侯英楠 黄金英 沈淑波 孙才 郑银子 石豪

铜绿假单胞菌产生的ESBLs菌株检测和药敏监测研究

侯英楠 黄金英 沈淑波 孙才 郑银子 石豪

目的 探讨应用双纸片扩散法检测铜绿假单胞菌产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的方法,掌握铜绿假单胞菌的流行和耐药趋势,指导临床合理应用抗生素,减少耐药性的产生。方法 采用双纸片确认法检测ESBLs,药敏试验采用双扩散法。结果 68株铜绿假单胞菌中有15株产生ESBLs,检出率22.06%。结论 应用双纸片扩散法检测铜绿假单胞菌产酶菌株,铜绿假单胞菌产ESBls菌株检出率较高,耐药性严重,临床应引起重视。

铜绿假单胞菌；超广谱β-内酰胺酶；药物敏感试验

铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌,是条件致病菌,广泛存在于潮湿的环境中,是院内感染的常见致病菌［1］。由于占院内感染细菌的首位,所以β-内酰胺酶类药物是临床应用最多的抗生素,铜绿假单胞菌的耐药性较为普遍,耐药的重要机制之一是产生ESBLs［2,3］。本文通过对本地区两所医院分离的铜绿假单胞菌,采用双纸片扩散法对其产生的ESBLs进行检测,探讨此方法的可用性及药敏情况分析研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 选取2013年1～12月本院临床送检的住院患者标本72株,主要为痰、尿、伤口分泌物,其中痰标本55株,伤口分泌物标本9株、尿标本4株。标准菌株：铜绿假单胞菌ATCC 29853、肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603购于国家卫生部(现卫计委)临检中心。

1.1.2 药敏纸片 英国Oxoid公司提供的亚胺培南纸片,头孢他啶、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氧氟沙星、阿米卡星、头孢哌酮、氨曲南、环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素为北京天坛生物技术开发公司生产,M-H药敏琼脂为法国生物梅里埃产品。

1.2 方法 ESBLs检测按照美国临床标准委员会(NCCLS)推荐确认法。将分纯菌株进行生化鉴定,鉴定为铜绿假单胞菌的细菌制成0.5麦氏单位的菌悬液均匀涂抹于4mm的M-H琼脂上,贴头孢他啶(CAZ)30 μg/片、头孢他啶/棒酸；头孢噻肟(CTX)30 μg/片、头孢噻肟/棒酸,按标准纸片扩散法经35℃培养18～24 h,分别测定2种纸片单独和加棒酸后的抑菌环直径,加棒酸和不加棒酸的抑菌环直径之差≥5mm即确认为产ESBls菌株。以标准铜绿假单胞菌ATCC 27853菌株为阴性对照,以标准肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603菌株为阳性对照。

2 结果

68株铜绿假单胞菌检出ESBLs株15例,检出率为22.06%。15株ESBLs阳性菌株对抗生素药敏情况上,哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢三嗪、氨曲南、氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、亚胺培南的耐药率分别为66.67%(10/15)、100.00%(15/15)、100.00%(15/15)、93.33%(14/15)、93.33%(14/15)、80.00%(12/15)、86.07%(13/15)、93.33%(14/15)、80.00%(12/15)、86.67%(13/15)、80.00%(12/15)、86.67%(13/15)。在53株ESBLs阴性铜绿假单胞菌耐药性上,哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢三嗪、氨曲南、氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、亚胺培南的耐药率分别为26.42%(14/53)、47.17%(25/53)、58.49%(31/53)、49.06% (26/53)、50.94%(27/53)、47.17%(25/53)、50.94%(27/53)、54.72% (29/53)、37.74%(20/53)、49.06%(26/53)、22.64%(12/53)、11.32%(6/53)。

3 讨论

铜绿假单胞菌作为临床上常见的条件致病菌,能够通过不同机制产生药物耐受性,对临床感染控制构成严重威胁。铜绿假单胞菌的抗药性分子机理非常复杂,往往是多种耐药机制相互作用下产生的。近年来深入研究,在铜绿假单胞菌中发现了多种β-内酰胺酶［4,5］。研究铜绿假单胞菌β-内酰胺酶,一方面可正确认识其耐药机制,有助于感染控制；另一方面,由于铜绿假单胞菌有可能是多种耐药基因的传播源,这将有助于了解和控制医院内耐药基因的播散和流行。β-内酰胺酶的产生是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,β-内酰胺酶是细菌产生的酶类,能够破坏渗透入菌体内的β-内酰胺类抗生素的活性。β-内酰胺酶种类很多,ESBLs是其中的一种［6］。ESBLs是一类水解窄谱青霉素、头孢菌素及单环内酰胺菌素的β-内酰胺酶［7］。ESBLs则是β-内酰胺酶中的一个类别,主要表现为：能分解第3代头孢菌素,且能为棒酸抑制,阿莫西林、替卡西林等抗生素中含有棒酸,近些年来其耐药性的增加,临床上开始使用哌拉西林/他唑巴坦钠等抗生素替代。

铜绿假单胞菌产ESBLs菌株的耐药性明显高于铜绿假单胞菌产ESBLs阴性菌株。

绿假单胞菌产ESBLs的检出率为22.06%,对亚胺培南耐药并非由金属酶所致,说明碳青霉烯类对铜绿假单胞菌的耐药起作用,临床上认为亚胺培南对铜绿假单胞菌100%敏感的传统用药方法需改变,应该在微生物室的正确试验下指导用药。

双纸片确证法检测ESBLs是NCCLS推荐的检测大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌及其他肠杆菌细菌产ESBLs菌的确定标准方法。铜绿假单胞菌等非发酵菌产生的ESBLs的检测方法,国内外到目前还没有推荐一种更合适的方法来检测。作者应用此方法来检测其结果经临床验证也是目前检测非发酵菌产ESBLs菌的一个有效手段,也能帮助和指导临床正确选用抗生素,治疗感染症。

铜绿假单胞菌产ESBLs菌株对亚胺培南产生部分耐药外,大部分菌敏感,仍是首选药,其次选用哌拉西林、阿米卡星、环丙沙星、头孢他啶等药物,临床上最好在药物敏感试验指导下采取联合用药,以联合用药达到较好的临床治疗效果。对产生ESBLs菌株患者严格管理控制,防止爆发流行。

［1］金保富,林平,陈佳玉,等.铜绿假单胞菌DHA-1型AmpC酶的检测及耐药性分析.中国抗生素杂志,2012,37(7):510-513.

［2］张传飞.多重耐药铜绿假单胞菌产ESBLs酶与高产AmpC酶情况及药物敏感性研究.中国微生态学杂志,2015,27(1):76-79.

［3］侯佳惠,童郁,费静娴,等.铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶、质粒介导AmpC酶基因分布及流行特征分析.检验医学,2012,27(1):39-43.

［4］王章星,黎肇光,汪春,等.新生儿重症监护病房铜绿假单胞菌感染分布及抗生素耐药分析.广西医学,2012,34(7):931-932.

［5］刘吉纯,张艳菊,郝英姿,等.铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析.中国抗生素杂志,2011,36(10):783-785.

［6］刘金波,何海明,周宁,等.铜绿假单胞菌高活性β-内酰胺酶检测及耐药性分析.临床检验杂志,2004(9):389-390.

［7］姚振江,周俊立,曾转萍,等.ESBLs与MDR铜绿假单胞菌流行现状及其关系研究.广东药学院学报,2011,27(2):199-201.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.11.147

2016-03-02］

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