左玉良，窦中岭



NMP22、CA19-9、CEA在膀胱癌中的表达及临床意义

左玉良1，2，窦中岭1

摘要：目的探讨NMP22、CA19-9、CEA 3种肿瘤标记物在膀胱癌中的表达及临床意义。方法收集72例膀胱癌及10例非膀胱癌的组织标本，应用免疫组织化学测定NMP22、CA19-9、CEA的表达情况，分析3种肿瘤标记物与膀胱癌病理分级、临床分期之间的关系。结果NMP22、CA19-9、CEA在膀胱癌组织中的表达阳性率明显高于非膀胱癌组织，NMP22的表达与膀胱癌的病理分级和肿瘤大小均呈正相关，与年龄呈负相关。CA19-9的表达与膀胱癌的病理分级及临床分期均呈负相关。CEA的表达与膀胱癌的病理分级、临床分期和肿瘤大小呈正相关。结论NMP22、CA19-9、CEA检测是膀胱癌早期诊断及术后复发监测的重要手段，可以对膀胱癌的生物学特点作出判断，为临床治疗方案的选择和预后的判断提供更为充足的证据。

关键词：膀胱癌；NMP22；CA19-9；CEA；免疫组织化学

作者单位：1.河南科技大学第一附属医院，河南洛阳 471000

2.河南科技大学附属黄河医院，河南三门峡 472000

在泌尿系统肿瘤当中，膀胱癌的发病率高居首位，近年来膀胱癌的发病率有上升趋势。膀胱癌是严重威胁人类健康的疾病，其术后复发率较高，保留膀胱的各种手术治疗，约50%在2 a内肿瘤可能复发，约10%～15%的复发肿瘤恶性程度有增加趋势。因此，长期规律随访并早期发现肿瘤复发是膀胱肿瘤治疗成功的关键之一。膀胱镜检查及活检是膀胱癌的诊断金标准，但属侵入性的检查，经济成本较高，并有导致尿路感染的风险。核基质蛋白22(nuclear matrix protein 22,NMP-22)、糖链抗原19-9(carbohydrate antigen 19-9, CA19-9)及癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)肿瘤标记物对膀胱癌的早期诊断、治疗和预后判断及复发监测起到积极作用。为探讨NMP22、CA19-9及CEA在膀胱癌组织中的表达情况及其临床意义，作者应用免疫组化S-P法检测上述3种肿瘤标记物在72例膀胱癌及10例非膀胱癌组织中的表达情况，分析报道如下。

1资料与方法

1.1资料收集72例膀胱癌病例及10例非膀胱癌病例，分为观察组及对照组。观察组患者男56例，女16例，年龄(62.5±8.6)岁；肿瘤单发54例，多发18例，瘤体直径0.5～6.0 cm；72例膀胱癌中，初发膀胱癌43例，复发膀胱癌29例。对照组患者男7例，女3例，年龄(55.3±7.1)岁；其中9例为膀胱良性病变，1例为输尿管癌病例。观察组术前行泌尿系超声、CT和膀胱镜等检查，经尿道膀胱肿瘤电切术、膀胱部分切除或膀胱全切术治疗，并获取膀胱癌组织标本。对照组经尿道膀胱肿瘤电切术及膀胱镜检查获取膀胱良性病变组织标本，正常膀胱组织标本由输尿管癌病例行输尿管根治术中获取。72例观察组均为膀胱尿路上皮癌，其中低分级35例，高分级37例；临床分期：T1N0M0期34例，T2N0M0期25例，T3N0M0期13例。对照组9例为慢性膀胱炎，1例为正常膀胱组织。

1.2方法所有组织标本均采用免疫组化S-P法进行免疫染色(CEA免疫染色不需高压热修复)。使用NMP22免疫组化试剂盒(上海安研商贸有限公司)，CA19-9及CEA免疫组化试剂盒(河南赛诺特生物技术有限公司)。

1.3NMP22免疫染色结果判断标准细胞核出现棕黄色着色或棕黄色颗粒为染色阳性，NMP22免疫染色细胞百分比低于10%或未见染色定为阴性，而染色范围超过10%为阳性。CA19-9免疫染色结果判断标准：细胞质和(或)细胞膜出现棕黄色着色或棕黄色颗粒为染色阳性，因CA19-9在正常尿路上皮细胞的胞质和细胞表面亦有表达，故CA19-9免疫染色细胞百分比低于10%或未见染色定为阴性，而染色范围超过10%为阳性。CEA免疫染色结果判断标准：CEA在正常膀胱黏膜中为阴性，故细胞质和(或)细胞膜出现棕黄色着色或棕黄色颗粒定为阳性。

1.4统计学分析应用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，组间率的比较用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1NMP22、CA19-9和CEA表达情况NMP22、CA19-9、CEA在10例对照组均为阴性表达，而在72例膀胱癌组织中均有表达，3种肿瘤标记物两组间差异均有统计学意义。NMP22在72例膀胱癌细胞核中阳性表达47.2%(34/72)，在低分级和高分级膀胱癌中阳性表达为34.3%(12/35)和59.5%(22/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中阳性表达分别为50.0%(17/34)、40.0%(10/25)和53.8%(7/13)，见图1～2。

CA19-9阳性表达为73.6%(53/72)，在膀胱癌癌细胞质和细胞膜呈阳性染色，见图3；在低分级和高分级膀胱癌中阳性表达85.7%(30/35)和62.2%(23/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中阳性表达97.0%(33/34)、64.0%(16/25)和30.8(4/13)。

CEA在72例膀胱癌组织中阳性表达65.3%(47/72)，在膀胱癌癌细胞质和细胞膜阳性染色，见图4；低分级和高分级膀胱癌中阳性表达40.0%(14/35)和89.2%(33/37)，在T1、T2和T3期膀胱癌中阳性表达50.0%(17/34)、72.0%(18/25)和92.3%(12/13)。

图1　NMP22在T1期膀胱癌的表达(SP,×200)

图2　NMP22在T2期膀胱癌的表达(SP,×200)

图3　CA19-9在T3期的膀胱癌表达(SP,×200)

图4　CEA在T3期的表达膀胱癌(SP,×200)

2.2NMP22、CA19-9和CEA表达与年龄NMP22的表达与膀胱癌患者的年龄呈负相关，而CA19-9与CEA的表达与患者年龄无相关性，见表1。

表1　NMP22、CA19-9和CEA与年龄　例(%)

2.3NMP22、CA19-9和CEA与肿瘤大小NMP22阳性表达比随膀胱肿瘤瘤体的增大而升高，3组间差异具有统计学意义(P<0.05)，提示NMP22在膀胱癌中的表达与肿瘤大小呈正相关。CA19-9在膀胱癌中的表达与肿瘤大小无相关性 (P>0.75) 。CEA的阳性表达比随膀胱肿瘤瘤体的增大而升高，3组间差异具有统计学意义(P<0.05)，提示CEA在膀胱癌中的表达与肿瘤大小呈正相关，见表2。

表2　NMP22、CA19-9和CEA与肿瘤大小　　例(%)

2.4NMP22、CA19-9和CEA在初发和复发膀胱癌中的表达NMP22、CA19-9和CEA在复发膀胱癌中的表达阳性比例均高于初发膀胱癌，但均无统计学意义(P>0.05)，而NMP22、CA19-9和CEA在复发膀胱癌中的联合表达阳性率高于初发膀胱癌，两组间差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3　3种肿瘤标记物联合表达阳性与膀胱癌　例(%)

2.5NMP22、CA19-9和CEA与膀胱癌病理分级及TNM分期NMP22在高分级膀胱癌中表达阳性率高于低分级 (P<0.05)，提示NMP22与膀胱癌的病理分级呈正相关，但NMP22与膀胱癌的临床分期无相关性(P>0.5)。CA19-9在低分级和表浅性膀胱癌中的表达与膀胱癌的病理分级和临床分期均呈负相关(P<0.025，P<0.005)。而与CA19-9表达相反，CEA表达在高分级及浸润性膀胱癌中的表达阳性率均高于低分级和表浅性膀胱癌(P<0.005，P<0.025)，CEA与膀胱癌的病理分级及临床分期均呈正相关。

3讨论

NMP22是核基质蛋白的一种，为核有丝分裂器蛋白的一个亚单位，对DNA的复制和转录、RNA的合成和剪接、基因表达的调节均起着重要作用[5-6]。当细胞发生恶变时，核内遗传物质在有丝分裂末期分配极度异常，核有丝分裂器蛋白合成激增。Lokeshwar等研究发现膀胱癌患者细胞中核基质蛋白浓度为正常细胞的25倍，本组NMP22在非膀胱癌膀胱组织中表达呈阴性，而在膀胱癌组织中表达呈阳性，尤其在高分级膀胱癌中表达较高，可能与高分级膀胱癌细胞增殖分裂更活跃，核内NMP22浓度升高更明显有关。

同时，NMP22表达阳性率随膀胱肿瘤瘤体的增大而升高，提示NMP22在膀胱癌中的表达与肿瘤大小呈正相关。NMP22在细胞凋亡后，由细胞核释出，以可溶性复合物或片段的形式存在于尿中，膀胱癌患者尿NMP22浓度水平为非癌对照组的20～80倍。NMP22在膀胱癌的早期筛查、诊断和监测中特异性、灵敏度较高，Kehinde等报道在新确诊的膀胱癌患者中，尿细胞学和NMP22检测的敏感性分别为28%和88%，在复发膀胱癌中，它们的敏感性分别为33%和57%，NMP22可以作为已确诊和可疑膀胱癌患者的评估标准。Gutierrez等[10]认为6 U·mL-1为尿NMP22检测的理想临界值，尿NMP22检测虽然不能代替膀胱镜检查，但其高敏感性可以调整复查膀胱镜的间隔时间。Jamshidian等[11]以10.1 U·mL-1为尿NMP22诊断膀胱癌参考值，可以评估膀胱癌的分级及分期。Stampfer等[12]也报道了膀胱癌GⅠ和GⅡ、GⅠ和GⅢ之间尿NMP22水平均有统计学差异。而且，在膀胱癌术后的监测及随访中，何朝宏等[13]认为尿NMP22水平>6 U·mL-1者应及时行膀胱镜检查，避免漏诊，而尿NMP22水平<6 U· mL-1者可推迟膀胱镜检查时间。本研究中NMP22在膀胱癌的表达与膀胱癌的病理分级呈正相关，提示NMP22的表达可能与膀胱癌细胞增殖分裂程度有关。

CA19-9是一种细胞膜上的糖蛋白，主要用于消化道肿瘤的诊断、疗效判断及随访。近年来，研究发现CA19-9的检测可能对膀胱肿瘤生物学特性的监测和预后判断起一定的作用[14-16]。在本研究中CA19-9在膀胱癌中的表达呈阳性，阳性率为73.6%，其中在低分级和高分级膀胱癌中的表达阳性率分别为85.7%和62.2%，在T1、T2及T3期膀胱癌中的表达阳性率分别为97.0%、64.0%和30.8%，提示CA19-9在表浅性、低分级的膀胱癌中表达率较高。 研究发现血清或尿CA19-9水平的升高表明膀胱癌预后差，血清CA19-9水平改变可反映膀胱癌的进展或缓解[17]。田溪泉等[18]研究发现CA19-9水平的升高与肿瘤浸润、转移以及患者预后密切相关。Pall等[19]发现浸润性膀胱癌患者的血清CA19-9水平较表浅膀胱癌患者高，且随着浸润深度的增加，血清CA19-9水平逐渐升高，同时发生转移的膀胱癌患者的血清CA19-9水平较未转移膀胱癌患者高。因此，血清CA19-9可以作为一种预后指标，在评价治疗效果和监测膀胱癌复发及转移中起到重要的作用。本研究中CA19-9在低分级和表浅性膀胱癌中的表达阳性率明显高于高分级和浸润性膀胱癌，其在膀胱癌中的表达与膀胱癌的病理分级和临床分期均呈负相关，而在田溪泉和Pall报道中，浸润性及晚期膀胱癌患者血清CA19-9水平较表浅性膀胱癌患者高，可能与此期膀胱癌组织生长、浸润致组织细胞坏死、崩解使细胞内CA 19-9释放和吸收入血有关[18-19]。

CEA是一种结构复杂的可溶性跨膜糖蛋白，也是一种广谱肿瘤标记物。当尿CEA以30 ng·mL-1为检测参考值，膀胱癌患者尿中CEA含量升高程度与临床分期、肿瘤大小、侵犯方式等有关，肿瘤复发患者尿CEA水平升高更明显，经过有效治疗后，尿中CEA水平明显下降[20]。Zimmerman等[21]研究发现从T1期到T3期的膀胱癌患者，尿CEA的平均水平逐步升高，经过治疗后的患者尿CEA平均水平显著低于治疗前，初始治疗后半年内复发患者的尿CEA平均水平高于同期治疗未复发的患者。同样血CEA也可以作为一种肿瘤标记物被应用于膀胱癌的诊断和监测[22-25]，血清CEA水平和膀胱癌的分级呈正相关，CEA水平升高的患者，往往有较差的肿瘤预后，部分膀胱癌病人经过新辅助化疗后，CEA水平可下降或恢复正常。同样在本研究中，CEA在膀胱癌中的表达与肿瘤大小、膀胱癌的病理分级和临床分期均呈正相关，其在不同分期膀胱癌中的表达与上述报道中膀胱癌患者尿及血清中CEA水平的检测情况相符合，提示CEA的检测在膀胱癌的诊断、治疗和监测中具有重要的意义。

综上所述，NMP22、CA19-9及CEA这3种肿瘤标记物与膀胱癌的病理分级或临床分期均有关联，提示NMP22、CA19-9及CEA的检测可作为膀胱癌早期诊断、术后复发监测及预后判断的重要监测手段，它们作为辅助因子与影像学资料、病理检查等临床资料相结合，可以对膀胱癌的生物学特点作出更加精确的判断，为临床治疗方案的选择和预后的判断提供了更为充足的证据。

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Clinical Significance on Expression of NMP22, CA19-9 and

CEA in Bladder Cancer

ZUO Yu-liang,DOU Zhong-ling

(First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance on expression of NMP22, CA19-9 and CEA in bladder cancer.MethodsCollected 72 cases of bladder cancer and 10 cases of non-bladder cancer, using immunohistochemistry to detect the expression of NMP22, CA19-9 and CEA in bladder cancer and non-bladder cancer tissues, it was analyzed the relationship between their expression in bladder cancer and pathology classification and clinical stage. ResultsNMP22, CA19-9 and CEA expression in bladder cancer tissues were significantly higher than that of non-bladder cancer. NMP22 expression in bladder cancer tissue was positively correlated with pathology classification and tumor size, but no correlation with clinical stage.NMP22 expression in bladder cancer was negatively correlated with age. CA19-9 expression in bladder cancer tissue was negatively correlated with pathology classification and clinical stage. CEA expression in bladder cancer tissues was positively correlated with pathology classification, clinical stage, and tumor size. ConclusionThe delection of NMP22, CA19-9 and CEA, have important role of early diagnosis and monitoring of postoperative recurrence in bladder cancer, it can make more accurate judgement on the biological characteristics of bladder cancer, and provide more sufficient evidence for choice of clinical treatment and prognosis judgement.

Key words:bladder cancer；NMP22；CA19-9；CEA；immunohistochemistry

作者简介：左玉良(1979-)，男，河南正阳人，主治医师，从事泌尿外科肿瘤诊疗工作。

收稿日期：2015-08-17

中图分类号：R737.14,R446.6

文献标志码：A

文章编号：1672-688X(2015)04-0252-05