韩勇李英王海洲

（1，山东省日照市动物疫病预防控制中心 276800；2，山东省五莲县畜牧兽医局 262300；3，山东省日照市畜牧站 276800）

日照麻鸡禽白血病净化技术试验

韩勇1李英2王海洲3

（1，山东省日照市动物疫病预防控制中心 276800；2，山东省五莲县畜牧兽医局 262300；3，山东省日照市畜牧站 276800）

根据某公司禽白血病（ALV）流行病学调查结果，本试验参考国际ALV净化方案，针对禽白血病在日照麻鸡上流行的特点，开展了禽白血病的净化研究。经过一个世代的净化，鸡群的p27抗原阳性率由11.2%下降到5.5%，A/B抗体阳性率由4.5%下降到0，J抗体阳性率由1.7%下降到0，病毒分离阳性率由4.5%下降到0.2%。以上结果表明通过净化程序的实施，鸡群ALV阳性率大幅下降，净化效果成效显著。

禽白血病；疫病净化；抗原检测；差异；日照麻鸡；试验

禽白血病（Avian leucosis，AL）是由反转录病毒科（Retroviridae）禽白血病/肉瘤病毒群（Avian leucosis/sarcoma virus）引起的以造血细胞增生为主的一类肿瘤性疾病，包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞白血病和髓细胞性白血病[1]。该病是当前严重危害我国养禽业的重要疫病之一。病毒可通过种群的种蛋垂直传播给后代。该病尚无疫苗可供使用，其预防控制措施主要依赖种群的净化措施[2]。

日照麻鸡是一个历史悠久、遗传性能稳定的优良地方品种，它具有体型小、肉质风味好、产蛋量较高、蛋品质好、觅食能力强、抗病力和适应性强等突出特点，是一个十分宝贵的地方品种资源。1977年被列为山东省地方畜禽良种，2009年被山东省畜牧兽医局列入《山东省畜禽遗传资源保护名录》。其中心产区为胶南市南部与日照市东北部相连接的沿海一带，分布于胶南、东港区、五莲等县。上世纪八、九十年代，由于外来品种的引进和杂交改良，日照麻鸡感染禽白血病的病例报道逐渐增多，杨凤等在山东采集255份芦花、日照麻鸡等地方品种，P25抗原阳性率为50.98%，采集41份病料用PCR检测，33份呈ALV-J阳性（80.49%）[3]。随着致病力极强的ALV-J的出现并广为传播，加之该病又无疫苗免疫，感染禽白血病鸡群不断出现患病死亡鸡、生产性能下降和免疫抑制，给养禽业造成了严重损害[4]。因此，开展日照麻鸡禽白血病净化工作刻不容缓。

自2010年以来，日照市动物疫病预防控制中心选择某自繁自养原种鸡场，参照国际禽白血病净化标准，结合日照麻鸡特点进行了禽白血病净化探索试验，并取得了较好的成效。

1 材料与方法

1.1 主要检测试剂和仪器

ALV p27抗原检测试剂盒、ALV A/B亚群抗体检测试剂盒、ALV J亚群抗体检测试剂盒均购自美国IDEXX公司；酶标仪购于美国伯乐公司，DF1细胞为本室保存。

1.2 检测方法

ALV p27抗原检测、ALV A/B亚群抗体检测、ALV J亚群抗体检测按照试剂盒说明书进行。

1.3 净化程序

根据对该公司麻鸡ALV流行病学调查，研究出日照麻鸡ALV感染的3个敏感期，按程序进行净化。

1.3.1 后备种鸡检测（6周龄）

采集6周龄鸡血浆，分离培养ALV。选出阴性鸡，隔离饲养，作为后备种鸡。

1.3.2 初产种鸡检测（23周龄）

选择每只种鸡开产蛋，取蛋清的混合样品，用ELISA方法检测蛋清中的p27抗原，淘汰抗原阳性鸡。其余鸡采集血浆接种DF-1细胞分离病毒，用ELISA方法检测p27抗原，淘汰阳性鸡。

1.3.3 种鸡检测（43周龄）

选择每只种鸡蛋，取蛋清的混合样品，用ELISA方法检测蛋清中的p27抗原，淘汰抗原阳性鸡。其余鸡采集血浆检测p27抗原、ALV A/B亚群抗体、ALV J亚群抗体，检测阴性的接种DF-1细胞分离病毒，用ELISA方法检测p27抗原，淘汰阳性鸡。

1.3.4 雏鸡检测

收集阴性种鸡的种蛋，同一只种鸡来源的种蛋放在一起，分群孵化。采集全部1日龄雏鸡的胎粪，检测p27抗原。有一只雏鸡为阳性，则同一种鸡来源的雏鸡均判为阳性，不作种用。

连续进行多个世代种鸡的ALV检测与净化，直至p27抗原、A-B亚群抗体和J亚群抗体达到净化标准。

2 结果

（1）分别对零世代的核心群进行流行病学调查后进行净化，结果见表1。

（2）2.2对第一世代的日照麻鸡种鸡群的拭子、血清和全血进行p27抗原、血清学抗体及病毒分离的检测，结果显示经过一个世代的净化，禽白血病的感染率大幅下降。

（3）核心群净化效果评估。经过一个世代的净化淘汰，鸡群的p27抗原、A/B亚群抗体、ALV J抗体、病毒分离阳性率较零世代均有显著下降。

表1 零世代种鸡群ALV净化检测结果（单位：%）

表2 第一世代种鸡群ALV感净化检测结果（单位：%）

3 讨论

（1）采用ALV p27抗原检测、ALV A/B亚群抗体检测、ALV J亚群抗体检测、病毒分离等方法分别对相同个体进行检测，不同方法的检测结果存在差异。因此，单独使用一种方法对鸡群进行检测，诊断结果是不可靠的，因此，应在经济条件允许的情况下，同时使用至少2种不同检测方法[5]。本试验在国际金标准p27抗原检测基础上，在43周检测时段增加了p27抗原、ALV A/B亚群抗体和ALV J亚群抗体检测，最大限度的提高检测的敏感性，剔除阳性感染鸡，成效显著。

（2）根据不同鸡群调查ALV的感染水平，并选择合适的监测时间段尤为重要。本试验对前期鸡群ALV流行病学调查选择了6周龄、22周龄和43周龄3个敏感点进行检测，分析鸡群的排毒情况。

（3）由于本技术方法尤其是病毒分离对技术要求较高，成本高，一定程度上限制了本技术的推广。因此，探索适合我国国情的净化检测方法，逐步实现禽白血病在我国的净化势在必行。

[1]卡尔尼克 BW.禽病学[M].第10版.高福,苏敬良,译.北京:中国农业出版社,1999.

[2]吴天威,林光津,等.广西麻鸡白血病净化研究初报[J].广西畜牧兽医,2011,27（1）:6-7.

[3]杨凤,孙洪磊,倪伟,等.山东不同品系蛋鸡禽白血病流行病学调查[J].畜牧兽医学报,2011,42（5）:696-703.

[4]Fairfull R W,Garwood V A,Spencer J L,et al.The effects of geographical area,rearing method,caging density and lymphoid leucosis infection on adult performance in egg stocks of chicken[J].Poult Sci,1983,62:2360-2370.

[5]秦爱建.禽白血病防控的思考[J].中国家禽,2011,33（12）:37.

韩勇（1980.9-），男，汉族，山东省日照市人，预防兽医学研究生，研究方向为动物传染病和动物分子生物学。