姜君

（宜昌市第三人民医院，湖北 宜昌 443000）

结核病主要免疫保护机制是细胞免疫，在结核病中转化生长因子β1（TGF－β1）能够抑制T 细胞的反应，也能使巨噬细胞失活，可能是结核病免疫发病中的一个关键因素［1］。为此，我们对726例患者TGF－β1浓度水平进行测定，探讨其浓度水平与肺结核活动性的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2007年5月至2014年3月在我院门诊或住院诊疗的患者共726例，分为活动性肺结核组（活动组）、非活动性肺结核组（非活动组）、肺炎组及健康志愿者组，以健康志愿者为对照组。其中男379例，女347例，年龄18～77岁，平均45.5岁。

1.2 诊断标准 活动性肺结核组235例，按照肺部病灶范围分为≥4 个肺野组92例，＜4 个肺野组143例，均符合活动性结核病诊断标准，诊断标准以中华医学会结核分会制定的《肺结核诊断和治疗指南》为依据。非活动肺结核组为175例，入选标准：（1）X 线检查肺部仅有钙化、纤维化条索影或硬结灶，痰结核菌检查阴性；（2）痰结核细菌学阳性患者完成规定的疗程后连续3次涂片结果阴性，其中2次在完成治疗时；（3）痰结核菌检查阴性患者抗结核治疗＞6个月，终端治疗＞2个月后，X 线检查肺部结核病灶病变较上次无增多。肺炎组153例，均符合肺炎诊断标准［2］。健康志愿者163例为对照组。所有病例均履行了告知义务，本研究获得医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署了知情同意书。

1.3 方法（1）标本采集：入选病例1周内抽取外周静脉血做细胞因子测定。外周血2mL 收集在非抗凝无菌试管，以每分钟3 000 转离心10 min后，留取血清储存在－30 ℃冰箱，等待测定。（2）细胞因子检测：γ－干扰素（IFN－γ）及肿瘤坏死因子－α（TNF－α）检测试剂盒均由上海西唐生物科技有限公司提供，采用ELISA 试剂盒测定，检测方法严格按照试剂盒说明书操作步骤进行。TGF－β1检测试剂盒采用美国RD Biosciences公司生产的试剂盒，测定血清标本中人转化生长因子β1浓度水平。用纯化的人转化生长因子β1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入转化生长因子β1，再与HRP标记的转化生长因子β1抗体结合，形成抗体－抗原－酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人转化生长因子β1的含量。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计分析，计量资料用（±s）表示，两组间均数比较采用t检验，计算ROC曲线下面积（AUC），采用SPSS 16.0软件处理，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组间血清细胞因子浓度水平比较 活动组血清中TGF－β1浓度水平显著高于非活动组，差异有统计学意义（P＜0.01）。活动组IFN－γ 和TNF－α浓度水平分别低于非活动组（P＜0.01）。活动组血清中TGF－β1浓度水平与肺炎组比较差异有统计学意义（P＜0.01），IFN－γ和TNF－α浓度水平分别低于肺炎组（P＜0.01）。活动组血清中TGF－β1浓度水平与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01），IFN－γ组和TNF－α组浓组度组水组平组分组别组低组于组肺组炎组（P＜0.01）。对照组、肺炎组及非活动组血清TGFβ1、IFN－γ及TNF－α浓度水平组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α浓度水平比较（±s）

表1 各组血清TGF－β1、IFN－γ及TNF－α浓度水平比较（±s）

注：与对照组比较，＊均P＜0.01；与肺炎组比较，＃均P＜0.05；与非活动组比较，▲P＜0.01。

2.2 活动组内细胞因子浓度水平比较 病灶范围≥4个肺野组TGF－β1水平明显高于病灶＜4个肺野组（P＜0.05）；病灶范围≥4个肺野组TNF－α和IFN－γ水平与病灶＜4个肺野组分别比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 活动组中不同病灶范围TGF－β1、IFN－γ及TNF－α浓度水平比较（±s）

表2 活动组中不同病灶范围TGF－β1、IFN－γ及TNF－α浓度水平比较（±s）

2.3 活动组与非活动组细胞因子的相关性 活动组中TGF－β1与TNF－α、IFN－γ水平有显著负相关（r值分别为－0.815和－0.823，均P＜0.05）。非活动组血清中TGF－β1 与TNF－α和IFN－γ水平有显著负相关（r值分别为－0.762和－0.889，均P＜0.05）。两组中TNF－α与IFN－γ水平比较无明显相关性（r值分别为0.229和0.102，均P＞0.05）。

2.4 TGF－β1 浓度水平与肺结核活动性关系分析采用ROC 计算AUC 0.873，筛选血清TGF－β1浓度判定肺结核活动性的敏感度及特异度交点最大值（Q 值）为0.86，结果组显组示TGF－β1组浓组度组值34.21ng／mL组作为最佳截值，敏感性及特异性分别为85.4%和91.2%，TGF－β1浓度水平与活动性的判定呈高度相关一致性。

3 讨论

肺结核病由于其痰菌阳性率低、临床症状及X影像学缺乏特异性等特点，肺结核活动性的判定常是困扰临床的一个难题。结核病主要是由T 淋巴细胞介导的免疫反应，TGF－β1 作为一种免疫抑制因子具有抑制T 淋巴细胞的增殖及其功能，TGFβ1可能通过Fas／FasL系统增强结核病T 细胞的凋亡，并调节其他免疫细胞的凋亡［3］，TGF－β1可以促进结核分支杆菌的胞内生长，因此认为TGF－β1 可影响着结核病的活动性变化。与之相反，IFN－γ和TNF－α能够适度增加人单核巨噬细胞抗结核分支杆菌活性，这些细胞因子在结核患者体内能成功地抑制结核分支杆菌复制。本文通过对4组血清TGF－β1、TNF－α和IFN－γ浓度水平分别进行检测，结果显示血清TGF－β1水平活动组明显高于非活动组、肺炎组及对照组，而活动组的TNF－α和IFN－γ水平低于其他组，可能与活动性肺结核患者体内过量表达的TGF－β1 抑制T 细胞免疫应答有关，与TGF－β1下调了IFN－γ、TNF－α的产量和活性有关。国外也有研究［4－5］报道其在结核病患者血清中表达升高，升高的TGF－β1 与结核病活动有密切关系。本文还发现肺部病灶范围≥4 个肺野组的血清TGF－β1水平明显高于肺部病灶＜4个肺野组，分析可能为过量的TGF－β1不仅可以引起结核分支杆菌感染的慢性过程，而且可以导致广泛组织破坏、空洞形成和纤维化的结核病病变特征，TGF－β1 作为结核病免疫功能损害的指标，其水平越高，免疫损害越重。本组结果还显示肺结核活动性与TGF－β1浓度水平间存在正相关，可能与结核分支杆菌及其有效成分可以刺激单核巨噬细胞过量表达TGF－β1 有关，血清TGF－β1浓度水平与活动性的判定呈高度相关一致性，对肺结核活动性的分析判断有一定的价值，且实验操作简单，值得进一步推广应用。

［1］刘萍，张丽，庞楠楠，等.血清IEN－γ、TGF－β1、IL－10检测对儿童潜伏性结核感染的诊断价值［J］.中国病原生物学杂志，2011，6（9）：650－651.

［2］中华医学会呼吸病学分会.社区获得性肺炎诊断和治疗指南［J］.中华结核和呼吸杂志，2006，29（10）：478－450.

［3］孙志平，刘建辉，吕翠环，等.糖尿病合并肺结核患者的转化生长组因组子β1组与Fas／FasL组系组统组检组测［J］.河组北组医药，2010，32（6）：649－651.

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