丘文君

（广州医科大学附属第三医院，广东 广州 510150）

早期自然流产胚胎染色体数目异常行荧光原位杂交技术检测的研究

丘文君

（广州医科大学附属第三医院，广东 广州 510150）

目的 针对早期自然流产患者，研究分析荧光原位杂交技术对其胚胎染色体数目异常检测的效果分析。方法 在我院的早期自然流产患者中抽取60例为研究对象，用荧光原位杂交技术（FISH）对患者胚胎绒毛的5条染色体：13、18、21和X、Y染色体进行快速检测。结果 采用FISH检测，所有结果与常规染色体核型分析一致，检测率为100%，患者中出现染色体异常25例，占患者总数的41.7%。结论 FISH检测技术用于早期自然流产胚胎染色体数目异常的检测具有方法简单、过程迅速等优点，有助于提高诊断的成功率。

早期自然流产；荧光原位杂交技术；染色体异常

早期自然流产指的是发生在妊娠12周之前的非人工流产。导致自然流产的原因很多包括父母染色体异常［1］，母体内分泌失调、生殖道异常或感染等，其中大约一半以上的早期流产是由胚胎染色体异常导致的。荧光原位杂交技术（FISH）是近些年在细胞遗传学上发展的新型检测技术，相比于传统的检测技术，快速、准确、灵敏度高成为FISH技术的最显著优点［2］。FISH是一种探针检测技术，检测特异微生物种群的存在和丰度。由于FISH可以迅速准确诊断染色体数目异常问题，目前已经被广泛应用在产前诊断。现抽取我院2012年12月至2013年12月的早期自然流产患者共60例，对其行FISH快速检测，分析检测效果。报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料：从2012年12月至2013年12月在本院治疗的早期自然流产患者中抽取60例为研究对象。孕妇患者年龄在19～41岁，平均年龄28.6岁。患者妊娠时间在51～98 d，平均妊娠时间为72.3 d。关于产妇流产次数，其中1次流产的29例，2次流产的20例，3次以上流产的11例。

1.2FISH检测方法

1.2.1标本取材：选择流产产妇的胎儿绒毛组织，首先用生理盐水清洗干净；然后用消毒剪刀去掉脱膜组织，以选取其中的绒毛或是肌肉组织；最后在无菌环境下将标本剪碎，并去除不能剪碎的部分。

1.2.2FISH探针选择：本次研究所用的两种FISH探针都来自英国Cytocell公司：第18，X，Y染色体探针，是特异性重复序列着丝粒探针，用蓝、绿、红三种颜色直接标记，区域定位为［3］：p11.1～q11.1；第13和21染色体探针为位点特异性单一序列探针，由红色和绿色分别直接标记，区域定位为：13q14.3，21q22.2。

1.2.3杂交检测：①将标本加入规定温度的Kcl溶液处理；再加入固定液预固定，多次离心去上清处理后室温下干燥保存；②将①中得到的玻片经过正规的消化、漂洗、脱水、自然干燥；然后将探针混合物10 μL滴加到玻片杂交区在规定环境中进行杂交。③杂交后，将玻片依次由46 ℃水浴锅、70%乙醇漂洗，之后暗处干燥；在目标区域滴加15 μL的DAPI复染剂，暗处放置观察。

1.3诊断标准：对于每例样本计数200个细胞，信号异常率介定值为10%和60%：＜10%视为阴性，＞60%视为阳性，10%～60%视为结果异常。

1.4统计学方法：使用SPSS17.0统计学软件，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结 果

①染色体数目异常类型：60例样本均检测成功，其中25例结果异常。关于异常类型如表1所示。②流产次数对于染色体数目异常的影响：比较1次流产和多次流产中染色体的异常情况，具体见表2。

表1　染色体异常类型数目比率

表2　流产次数与染色体异常的关系

3　讨 论

孕妇的早期流产，约50%以上由胚胎染色体异常导致。并且流产风险随着流产次数和孕妇年龄的增加而增高。导致自然流产的原因还包括：母体内分泌失调、母体生殖道异常和感染以及其他如生活习惯等因素［4］。其中胚胎染色体异常又包括多种情况：三倍体、多倍体、X单体、染色体平衡易位、缺失等。正常人群染色体异常率为0.2%，而在复发性流产夫妇中发生率为4%，其中母源与父源之比为3∶1。据历史资料［5］，胚胎染色体异常为首次自然流产的主要原因，而对于非首次或多次流产孕妇其发生率会更高。

荧光原位杂交技术的检测原理——利用非放射性荧光物质和核酸探针杂交原理，在核中或是染色体上显示DNA序列位置。其探针可以长时间保存，研究表明其具有快速、安全、灵敏度高等优点，现已被广泛应用在细胞遗传学、基因定位、产前诊断等研究领域。

本次研究通过FISH检测早期流产患者染色体异常情况，由检测值与常规染色体核型对比分析可知，检测成功率为百分之百。在检测出的25位染色体异常患者中，最多的为三体异常共16例，占总异常数的64%，其次为X单体，占28%。研究结果还表明，染色体异常随着产妇流产次数比率增大（P＜0.05）。

综上所述，FISH技术可以高效的检测早期自然流产中染色体异常情况，能够提高诊断的有效率。进而提高该病患者的生活幸福指数，值得临床推广。

［1］施琼，王箭，袁泰先，等.染色体数目异常自然流产胚胎hsMAD2基因研究［C］.遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集，2011，20（11）:29.

［2］刘永林，张丽，陈益民，等.孕早期妇女外周血白细胞Toll样受体表达的研究［C］.2009中国杭州生殖健康学术论坛暨浙江省计划生育学与生殖医学分会学术年会论文汇编，2010，33（6）:22-23.

［3］Weremowicz S，Sandrom DJ，Morton CC，et a1.Fluorescenceinsitu hybridization （FISH） for rapid detection of aneuploidy:experience in 911 prenatal cases［J］.Prenat Diagn，2011，21（4）:110-112.

［4］曾琼连，姚美玉.复发性自然流产患者封闭抗体的检测与临床应用［C］.第十次全国中医妇科学术大会论文集，2011，8（3）:791-793.

［5］石东红，谢鲁文，刘茜.2720例自然流产患者染色体分析［C］.第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编，2013，21（5）:69.

R714.21

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1671-8194（2015）20-0157-02