杨红 孟岩 王超

流式细胞仪检测缺铁性贫血患者淋巴细胞免疫表型的探讨

杨红 孟岩 王超

目的研究缺铁性贫血(IDA)患者外周血淋巴细胞免疫表型的变化。方法30例缺铁性贫血患者(IDA组)和30例健康体检者(正常对照组), 均应用流式细胞仪三色直接免疫荧光法检测淋巴细胞免疫表型。对两组外周血淋巴细胞免疫表型进行比较。结果IDA组外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD+/CD+比值显著低于正常对照组(P＜0.01), CD+CD+值高于正常对照组(P＜0.05)。结论 缺铁性贫血患者影响机体T细胞的增殖分化, 导致细胞免疫功能障碍和免疫调节机制紊乱。

缺铁性贫血；淋巴细胞免疫表型； 流式细胞仪；骨髓细胞学检查

缺铁性贫血是因机体铁的需要量增加和铁吸收减少, 使体内储存铁耗尽而缺乏, 又未得到足够的补充, 导致合成血红蛋白的铁不足而引起的贫血［1］。是人类最常见的慢性疾病之一。淋巴细胞免疫表型是了解机体免疫系统功能的状态。在正常机体内各淋巴细胞亚群的相互作用, 维护着机体正常的免疫功能, 当淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时, 都可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列的病理变化［2］。淋巴细胞免疫表型的分析对一些疾病的诊断、治疗、免疫功能重建、器官移植监测等有重要的临床意义［3］。流式细胞仪检测缺铁性贫血与淋巴细胞免疫表型的关系, 国内外报道较少。现将本院2012年1月～2014年12月收治的30例IDA患者进行了外周血淋巴细胞免疫表型(CD+、CD+CD+、CD+CD+33438及CD4+/CD8+)的检测, 并与正常人对照。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 30例IDA患者作为IDA组, 男5例, 女25例,年龄23～81岁, 中位年龄46.5岁。血红蛋白48～92 g/L, 红细胞(3.24～4.76)×1012/L, 网织红细胞0.1%～1.0%, 外周血红细胞呈小细胞低色素性改变。骨髓细胞学检查示：骨髓增生明显活跃-活跃, 粒/红比值1.91～4.37, 红系增生活跃, 以中晚幼红细胞为主, 晚幼红细胞核固缩明显。成熟红细胞大小不等,以小者居多, 中心淡染区明显扩大。骨髓细胞铁染色：外铁(-),细胞内铁为0～13%, 骨髓报告：符合缺铁性贫血骨髓象。血清铁2.51～11.5 mol/L, 血清铁蛋白3.15～12.4 ng/L。全部病例服用铁剂治疗有效。另选健康体检者30例作为正常对照组,其中男10例, 女20例, 为血常规、血清铁、铁蛋白各项指标均在正常范围内, 且无其他器质性病变。两组一般资料比较, 差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 仪器与试剂 采用美国BD FACSCalibur流式细胞仪,三色标记McAb：CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/ CD45PerCP、红细胞裂解液、荧光校准微球 calibrate 3 Beads均购自美国BD公司。

1.3 方法

1.3.1 样品的制备 各管分别加入CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP荧光抗体20 μl, 再分别加入新鲜EDTA-K3抗凝外周血100 μl, 混匀, 室温避光孵育20 min, 加入 1∶9 配制的溶血素 2 ml, 避光 10 min。2000 r/min离心5 min, 倒掉上清液, 加入 PBS 缓冲液 2 ml, 2000 r/min 离心5 min。去上清, 加入500 μl PBS混匀待测。

1.3.2 流式细胞仪测定 以荧光微球calibrite 3-colour校准仪器补偿、使仪器分辨率CV＜2%达到最佳工作状态, 采用MultiSET 软件获取数据。建立SSC/CD45Percp、CD4PE/CD3FITC、SSC/CD3FITC荧光点图, 用CD45-PerCP/SSC-Gating和Back-Gating 细胞群双圈门以排除碎片的干扰, 调节 FSC、SSC、Detectors/Amps、Copensation, FL1-FL 2% 、FL2-FL 1%荧光补偿, 每管获取1.5万个细胞, 建立CD+/CD+、CD+/CD+4383散点图, Th(CD4+)和Ts(CD8+)的表达情况, 同时计算出 Th/Ts比值。

1.4 统计学方法 应用SPSS11.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(-x±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

IDA组外周血中CD3+、CD3

+CD4

+及CD4+/CD8

+比值显著低于正常对照组(P＜0.01), CD3+CD8

+值高于正常对照组(P＜0.05)。见表1。

表1 IDA组与正常对照组淋巴细胞免疫表型的结果( x-±s, %)

3 讨论

导致细胞免疫功能障碍和免疫调节机制紊乱［9］。

3.1 缺铁性贫血是一种全球性疾病, 虽然随着现代物质生活条件的改善, 各种营养缺乏性疾病已大为减少, 但缺铁性贫血仍然是人们所面临的威胁健康的一大难题［3］。为了了解缺血性贫血对机体免疫系统功能的影响, 本试验通过流式细胞仪三色免疫标记法观察30例成人缺铁性贫血外周血淋巴细胞免疫表型的变化, 总结出缺铁性贫血主要影响机体的细胞免疫功能, 可引起细胞免疫功能障碍和免疫调节紊乱［4］。

3.2 淋巴细胞是免疫系统的重要组成部分, 在人体细胞免疫中发挥核心作用。T 细胞免疫主要通过T 细胞的增殖分化来实现, 这是一个消耗能量、依赖核酸及蛋白质合成的复杂过程［5］。CD3+CD4+T 细胞是辅助性/诱导性T淋巴细胞(Th细胞), 也是迟发性超敏反应的启动者、促使B细胞产生抗体的辅助细胞、抑制性T淋巴细胞的诱导细胞；CD3+CD8+T 细胞是抑制性/细胞毒性T细胞(Ts细胞), 是细胞毒性T 细胞介导反应的效应细胞, 也是抑制B细胞产生抗体的抑制性细胞; 当CD4+/CD8+比值发生变化时, 可引起机体免疫功能降低［6］。从而影响淋巴细胞的增殖和分化, 使T淋巴细胞功能受损, 导致免疫功能低下和免疫调节紊乱［7］。

3.3 缺铁性贫血可对多系统造成危害, 但对免疫功能的具体影响具有争议。Salaman 等［8］认为, IDA 可影响人体整个免疫系统, 使特异性和非特异性免疫功能均下降; 本研究从机体免疫功能角度出发, 分析IDA 对人体免疫功能的影响, 结果发现IDA 患者CD3+、CD3+CD4+T细胞比例减少、CD3+CD8+T 细胞比例升高, 提示IDA影响T细胞的增殖分化,

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Investigation of flow cytometry in examination of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia patients

YANG Hong, MENG Yan, WANG Chao.Department of Inspection, Beijing Fengtai Hospital, Beijing 100070, China

Objective To research the changes of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia (IDA) patients.MethodsThere were 30 iron-deficiency anemia patients (IDA group) and 30 healthy people (normal control group), and they all received flow cytometry three-color direct immunofluorescent method for detection of lymphocyte immunophenotyping.Comparison was made on the peripheral blood lymphocyte immunophenotyping between the two groups.ResultsIDA group had much lower levels of CD3+、CD3+CD4+, and CD+/CD+ratio in peripheral blood than the normal control group (P＜0.01), and it also had higher CD+CD+4838value than the normal control group (P＜0.05).ConclusionIron-deficiency anemia may affect proliferation and differentiation of T lymphocyte, resulting in decreased immune functions and immune regulatory dysfunction.

Iron-deficiency anemia; Lymphocyte immunophenotyping; Flow cytometry; Marrow cytology examination

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.009

2015-01-27］

100070 北京丰台医院检验科(杨红 孟岩), 血液科(王超)