刘品，于小玲，徐文华，周燕，罗霜，高洁

（1 青岛大学医学院病理生理学教研室，山东 青岛 266021； 2 菏泽医学专科学校病理学教研室； 3 青岛大学医学院生物化学教研室）

姜黄素是从植物姜黄的根茎中提取的一种酚类色素，除了抗炎、抗氧化等作用外［1－2］，还具有抗肿瘤作用［3］。本室体内外研究结果显示，姜黄素以及姜黄素联合紫杉醇可抑制前列腺癌PC3细胞［4］及其裸鼠皮下移植瘤的生长增殖［5］。但是由于姜黄素不溶于水，临床难于实施静脉注射治疗。本研究旨在观察体内姜黄素对肿瘤生长的影响。

1 材料与方法

1.1 材料来源

取雄性裸鼠（BALB／c nu／nu）40只，体质量为15～18g，4～5周龄，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。于实验前在恒温、恒湿、SPF级条件下适应性饲养1周。人前列腺癌细胞株PC3细胞购于中国科学院上海细胞生物学研究所。姜黄素（相对分子质量368.39）购自美国Sigma公司。顺铂注射液购于齐鲁制药有限公司。

1.2 裸鼠皮下移植瘤模型的建立及分组干预治疗

PC3细胞常规培养，取对数生长期的细胞，消化收集后置于无血清培养液中，混匀制成细胞悬液。将裸鼠随机分为4组，每组8只，分别于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射含细胞密度为2×1010／L的细胞悬液0.2mL。待移植瘤直径约为5mm时开始随机分组并用药。对照组（A组）：用不含姜黄素的5g／L的阿拉伯胶溶液0.2mL按照下述姜黄素组的方式灌胃。姜黄素组（B组）：将姜黄素（200mg／kg）混悬于5g／L阿拉伯胶溶液0.2mL中灌胃，每天1次，共20d；顺铂组（C组）：顺铂0.2mL（2mg／kg）每天腹腔注射1次，连续5次后停用10d，然后再每天注射1次，连续5d。顺铂＋姜黄素组（D组）：顺铂和姜黄素按照前述方式分别给予。每5d用游标卡尺测量1次肿瘤的长径（L）和短径（S），并计算肿瘤体积。肿瘤体积（V）＝π／6LS2。并记录每组动物去瘤后的净体质量。

1.3 荧光定量RT－PCR法检测移植瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）和基质金属蛋白酶2（MMP2）mRNA表达

实验完成后脱臼处死小鼠，切取适量新鲜瘤组织，提取总RNA，然后逆转录合成cDNA，按照荧光定量RT－PCR试剂盒说明进行PCR反应。用荧光定量RT－PCR得到PCNA的CT值分别与其相对应GAPDH内参的CT值相减得到校正CT值，以对照组检测到的GAPDH mRNA荧光均值作为参数，按如下公式计算目的基因的相对表达量。目的基因的相对表达量＝2—（ΔCT目的基因—ΔCT对照基因）。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 体质量变化

顺铂＋姜黄素组裸鼠去瘤体质量明显高于顺铂组（F＝19.12，q＝6.02，P＜0.01）。见表1。

2.2 肿瘤生长情况

第20天时，对照组裸鼠的肿瘤体积为（689.96±138.47）mm3。顺铂＋姜黄素组肿瘤体积为（209.78±149.39）mm3，小于顺铂组的（309.96±142.23）mm3和姜黄素组的（467.59±137.74）mm3，差异有显著性（F＝52.93，q＝4.87、16.25，P＜0.01）。

2.3 肿瘤组织PCNA和MMP2的mRNA表达

顺铂＋姜黄素组肿瘤组织中PCN及MMP2 mRNA的表达均明显低于顺铂组和姜黄素组（F＝132.45、47.44，q＝6.36～27.88，P＜0.01）。 见 表1。

3 讨 论

顺铂是临床常用的一线化疗药物，用于多种肿瘤的治疗。顺铂具有多种毒副作用，治疗过程中给病人带来极大痛苦。目前临床普遍采用顺铂联合其他措施进行综合治疗。在我国联合中草药进行抗癌治疗是特色之一。姜黄素是从植物姜黄中提取的一中酚类物质，目前主要用做食物色素。本室以往研究证实，姜黄素腹腔注射联合紫杉醇治疗，可以显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长［5］。由于姜黄素不溶于水，只能溶于脂质或乙醇等特殊溶剂，所以动物实验采用灌胃给药。本研究根据姜黄素的溶解特点，采用顺铂联合姜黄素混悬液灌胃治疗裸鼠皮下移植瘤，结果显示，顺铂＋姜黄素组的疗效明显优于单用顺铂和姜黄素组，不仅肿瘤体积较小，小鼠的体质量也较高。肿瘤组织中代表细胞核增殖能力的PCNA及代表肿瘤细胞侵袭浸润能力MMP2的mRNA相对表达量显著下降，说明肿瘤细胞的增殖和浸润能力被抑制，这可能是导致肿瘤体积较小的主要原因。本实验结果充分证明，姜黄素口服灌胃的方式同样可以产生一定的抗肿瘤效应。本室以往的研究还显示，给正常小鼠预先灌胃可以显著减轻顺铂造成的肝［6］和胃肠道［7］的损伤，因而可以改善小鼠的整体生存状态。本研究中顺铂联合姜黄素后，裸鼠的体质量消耗减少，可能与上述姜黄素对肝脏以及胃肠道的保护作用有关。本研究为临床联合姜黄素抗肿瘤的应用提供了可行性研究基础。

表1 各组体质量和肿瘤组织中PCNA和MMP2的mRNA相对表达量（）

表1 各组体质量和肿瘤组织中PCNA和MMP2的mRNA相对表达量（）

分组 n 体质量（m／g） PCNA mRNA MMP2mRNA A 组 7 28.25±2.28 1.00±0.07 1.00±0.08 B 组 8 30.34±2.56 0.62±0.08 0.82±0.07 C 组 7 22.13±1.63 0.51±0.09 0.76±0.09 D 组 8 26.88±1.99 0.23±0.06 0.53±0.07

美、英等少数国家已经尝试用姜黄素进行临床试验［8］，并已取得一定的临床效果。英国著名学者IRVING等［9］研究和总结了超过800多名的志愿者参加的40多个临床1、2期试验，没有观察到姜黄素有明显的毒性反应。姜黄素的临床应用前景非常值得期待。在我国，尚未开展姜黄素的临床前期试验治疗，目前仍然处于实验研究阶段。本研究为今后在我国开展姜黄素临床试验治疗提供了的基础。

［1］赵鹏.姜黄素药理作用研究进展［J］.中医药临床杂志，2012，24（4）：380－382.

［2］GUPTA S C，PATCHVA S，KOH W，et al.Discovery of curcumin，a component of golden spice，and its miraculous biological activities［J］.Clinical and Experimental Pharmacology＆ Physiology，2012，39（3）：283－299.

［3］石峰.姜黄素抗肿瘤作用机制研究进展［J］.肿瘤基础与临床，2011，24（6）：547－549.

［4］齐瑞芳，于小玲，尚芳芳，等.姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC－3细胞凋亡影响［J］.青岛大学医学院学报，2009，45（4）：322－324.

［5］赵辉，于小玲，齐瑞芳，等.姜黄素和紫杉醇联用对前列腺癌PC3裸鼠移植瘤作用的研究［J］.现代生物医学进展，2010，10（5）：823－827.

［6］高晶晶，于小玲，刘玉波，等.姜黄素灌胃对顺铂所致小鼠肝损伤的防护效应［J］.现代中西医结合杂志，2010，19（34）：4401－4403.

［7］周燕，于小玲，高晶晶，等.姜黄素灌胃对顺铂所致的肠道损伤的保护效应［J］.中国现代医学杂志，2012，22（3）：37－40.

［8］CARROLL R E，BENYA R V，TURGEON D K，et al.PhaseⅡa clinical trial of curcumin for the prevention of colorectal neoplasia［J］.Cancer Prevention Research，2011，4（3）：354－364.

［9］IRVING G R，KARMOKAR A，BERRY D R，et al.Curcumin：the potential for efficacy in gastrointestinal diseases［J］.Best Practice ＆ Research in Clinical Gastroenterology，2011，25（4／5）：519－534.