郑海群

(柳江县中医医院 药剂科，广西 柳州 545100)



雷公藤不同部位雷公藤甲素含量的测定

郑海群

(柳江县中医医院 药剂科，广西 柳州 545100)

目的：测定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量。方法：采用Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱；流动相：乙腈-水(30∶70)；检测波长：218nm;流速：1.0mL/s；柱温：25℃。结果：雷公藤甲素在2～80μg/mL浓度范围内线性关系良好，回归方程为：A=27.295C-16.241(r=0.999 2)，加样回收率为100.57%，RSD为0.50%；根部位含量为9.02μg/g，茎部位含量为10.90μg/g，叶部位几乎没有检测到。结论：该方法可行、简便、准确、重现性好，可用于测定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量。

雷公藤；雷公藤甲素；含量测定

雷公藤为卫矛科植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook f.)的根，又叫断肠草、红药、菜虫药、黄藤木等[1-2]，其性温、味苦、有毒，主产地为福建、浙江、安徽等地。雷公藤具有抗炎、抗菌等多种生理活性[3-4]，临床上主要用于治疗类风湿关节炎、皮肤病、肾病等疾病。雷公藤甲素是雷公藤主要有效成分之一，也是雷公藤中的毒性成分。本研究旨在测定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量，为临床合理用药提供依据，具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

雷公藤药材采于2014年7月广西玉林药材市场，经我院药剂科鉴定为雷公藤，雷公藤甲素标准品(购自中国食品药品检定研究院，纯度≥98%)，乙腈、甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，氯仿为分析纯。

1.2 仪器与设备

采用日本岛津液相色谱仪(LC-20AT高压输液泵、紫外检测器:SPD-20A、色谱工作站:N2010)；十万分之一电子天平(CP225D，德国赛多利斯)；超声清洗仪(AS3120，天津奥特赛恩斯)；恒温水浴锅(HH-S2系列，江苏坛市环宇科学仪器厂)；真空干燥箱(DZF-6050型，上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

1.3 方法

1.3.1 液相色谱条件 采用Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱；流动相：乙腈-水(30∶70)；检测波长：218nm；流速：1.0mL/s；柱温：25℃；进样量：20μL。在该条件下，样品中其他成分对雷公藤甲素的测定无干扰，见图1。

1.3.2 样品处理 将采到的雷公藤药材按根、茎、叶分类，除去上面的尘土，用粉碎机进行粉碎，过80目筛子，备用。

1.3.3 供试品溶液的制备 分别取雷公藤药材的根、茎、叶各8g，精密称定，置于250mL的圆底烧瓶中，加入90mL的氯仿回流提取1.5h，冷却，过滤，浓缩，水浴锅上蒸干，得残渣。取适量甲醇溶解残渣，并定容至10mL容量瓶中，摇匀，用一次性针管吸取适量，并用0.45μm的微孔滤膜过滤至EP管中备用，该续滤液即为供试品溶液。

1.3.4 对照品溶液的制备 精密称取雷公藤甲素对照品2mg，置于25mL容量瓶中，用适量甲醇溶解并定容，制成浓度为80μg/mL的溶液，备用。

2 结果

2.1 标准曲线绘制

分别精密量取对照品储备液0.125、0.5、2.0、4.0、5.0mL于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度并摇匀。经0.45μm微孔滤膜过滤，每个浓度平行进针3次，每次进样量为20μL，以3次峰面积平均值作为纵坐标，对照品浓度C为横坐标，得回归方程为： A=27.295C-16.241(r=0.999 2)。结果表明：雷公藤甲素在2～80μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.2 精密度试验

精密吸取对照品溶液 20μL，连续进样6次，记录峰面积并计算得RSD =1.50%( n=6)。表明该仪器精密度良好。

2.3 稳定性试验

精密吸取供试品溶液20μL，分别于放置 0、4、8、12、16、20h后，注入液相色谱仪，记录峰面积并计算得RSD=1.75%(n=6)。结果表明：供试品溶液在20h内稳定性良好。

2.4 重复性试验

取雷公藤药材的根，按“1.3.3”项方法制备6份供试品溶液分别测定峰面积，并计算得RSD=1.75%(n=6)。结果表明：该方法重复性良好。

2.5 加样回收率

精密称取雷公藤药材的茎6份，按“1.3.3”项方法制备供试品溶液，精密加入不同量的雷公藤甲素对照品制备不同质量浓度溶液，进样20μL，并测定含量，计算回收率，结果显示：平均回收率为100.57%，RSD为0.50 %(n=6)。见表1。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2.6 含量测定

按 “1.3.3”项方法分别制得雷公藤根部位供试品溶液、雷公藤茎部位供试品溶液、雷公藤叶部位供试品溶液，按“1.3.1”项色谱条件平行进样3次，每次进样 20μL，计算每个部位雷公藤甲素的含量。结果见表2。

表2 雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量

3 讨论

在预实验过程中，本研究采用不同的提取方法(超声法、回流法[5]、煎煮法、浸渍法)进行提取，结果显示回流提取方法效果较好；在溶剂选择方面，预实验选用氯仿和甲醇，结果显示氯仿效果较好，故本研究以回流提取为提取方法、氯仿为溶剂。本研究结果显示：该方法可行、简便、准确、重现性好，可用于测定雷公藤不同部位雷公藤甲素的含量；茎部位几乎没有检测到雷公藤甲素，在根部位和叶部位检测到雷公藤甲素，且叶部位含量高于根，与孔乙铭[6]的研究结果基本一致。

因此，可有效利用雷公藤的根及叶部位提取雷公藤甲素，为临床用药提供来源基础。雷公藤不同部位其他有效成分含量的高低有待进一步研究，为今后合理利用药材提供理论依据。

[1] 陈在敏,黄有霖,陈星.HPLC测定不同产地雷公藤中雷公藤甲素含量[J].海峡药学,2013,25(8):67-69.

[2] 刘玉凤, 潘丽, 南丽红,等.雷公藤药理作用研究进展[J].亚太传统医药, 2014, 10(9): 37-40.

[3] CHEN XY,CHEN WL,MA M,et al.The potential of follicle-stimulating hormone peptide-modified triptolide-loaded nanoparticles to induce a mouse model of premature ovarian insufficiency.[J].Int J Nanomedicine,2015(10):2765-74.

[4] SANGWAN V,BANERJEE S,JENSEN KM,et al.Primary and Liver Metastasis-Derived Cell Lines From KrasG12D; Trp53R172H; Pdx-1 Cre Animals Undergo Apoptosis in Response to Triptolide[J].Pancreas,2015 ,44(4):583-9.

[5] 王艳芝.HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量[J].中国医药导报, 2010, 7(4):44-45.

[6] 孔乙铭,徐建中,王志安,等.HPLC 测定不同采收年限雷公藤根及不同部位雷公藤甲素含量[J].中国现代应用药学杂志,2009,26(11):904-906.

(责任编辑：李岚春)

Content Determination of Triptolide of Different Parts of Tripterygium

Zheng Haiquan

(TCM hospital of liujiang,liujiang 545100,China)

Objective:To determine the content of triptolide of different parts of Tripterygium.Methods:The Diamansil-C18(4.6mm×200mm,5μm) column was used.The mobile phases consisted of Acetonitrile and water(30∶70), the detection wavelength was 218nm.and the flow rate was 1.0mL/min.The column temperature was25℃.Results:The linear concentration range of Diphen-hydramine Hydrochloride was at 5.82～58.20μg·mL-1((r=0.999 6).The average recovery was 100.57%, and RSD was 0.50%.The root site content was 9.02μg/g, the stems site content was 10.90μg/g and the leaves almost no parts detected.Conclusion:This method is feasible, simple, accurate and reproducible, which can be used to determination of triptolide of different parts of Tripterygium.

Tripterygium;Triptolide;Contentdetermination

2015-06-26

郑海群(1974-)，女，广西柳江县中医医院主管中药师，研究方向为中药分析。

R284

A

1673-2197(2015)22-0008-03

10.11954/ytctyy.201522004