马燕，赵建美

(南通大学附属医院，江苏南通226001)

非霍奇金淋巴瘤(NHL)是原发于淋巴结和结外淋巴组织等处的血液系统肿瘤，约占我国全部恶性淋巴瘤的90%，具有发病地区差异性、临床表现多样性、病理类型复杂性等特点［1］。NHL的发病率位于全部恶性肿瘤的第12位，并且正以每年3%的速度增长［2～4］。但是，NHL 发病的分子机制、特异性诊断和治疗靶点等问题，至今尚未阐明。

P27kip1是于1994年Polyak等发现的一种热稳定蛋白，是能编码198个氨基酸的多肽，位于人类12号染色体12p12.-12p13.1交界处，包含2个外显子和1个内含子，负性调控细胞周期，参与细胞分化及凋亡。c-Jun激活区结合蛋白1(Jab1)是Claret等发现的一种编码38 kD的可溶性核蛋白，位于染色体8q13，在动植物中均高度保守。Jab1被认为是基因调节激活蛋白的共活化蛋白，参与细胞增殖的调控。S期激酶相关蛋白2(Skp2)是在人成纤维细胞中克隆出来的，位于人类染色体5p13，长31 962 bp，编码的蛋白质由436个氨基酸残基构成，分子质量约为45 kD，在细胞增殖调控过程中发挥重要作用。本研究对P27kip1、Jab1、Skp2的生物学特性及其与NHL发生、发展关系的研究进展综述如下。

1 P27kip1、Jab1、Skp2 的生物学功能

细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)是调控细胞周期的核心物质，在G1期具有催化活性，调节细胞通过G1期的速度。P27kip1是一种广谱的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKIs)，属于细胞周期依赖性激酶抑制剂cip/kip家族，能够与多种细胞周期蛋白-CDK(cyclin-CDK)复合物结合并抑制其活性，抑制G1/S相变，使细胞周期阻滞在G1期，抑制细胞增殖，参与细胞分化及凋亡。研究发现，P27kip1能够诱导肿瘤细胞分化，其过表达能够增加少突胶质细胞分化能力［5］;PTEN 通过 p-Akt调节 P27kip1，从而调节听觉祖细胞的增殖和分化［6］;P27kip1表达下降，肿瘤细胞凋亡率也下降［7］;在乳腺癌中组蛋白脱乙酰酶抑制剂辛二酰双羟肟酸通过调节P21、P27kip1、Bcl-2等，导致细胞周期阻滞和凋亡［8］。

c-Jun能够与P27kip1在细胞核中相互作用，并使P27kip1蛋白转移到细胞质。Jab1是c-Jun蛋白的活化剂，能够促进 P27kip1磷酸化及降解。Jab1是P27kip1与出核因子CRM1的接合器，诱导P27kip1从核内输出并降解。因此，下调Jab1表达可增加P27kip1在G1/S期的表达，诱导 P27kip1在细胞核积聚［9］。COP9信号体导致的c-Jun直接磷酸化作用取决于c-Jun与 COP9信号体亚单位 Jab1的相互结合。COP9信号体可能优先磷酸化通过C-端相互作用形成的c-Jun二聚体，过表达的Jab1可增强AP-1依赖性的胶原蛋白酶启动子的转录活性，原因可能是Jab1诱导并激活c-Jun复合物与AP-1位点间结合。P53基因是一种抑癌基因，能以高亲和力结合天然的COP9信号体，通过其N-末端，P53与Jab1发生相互作用。COP9信号体能特异性介导人P53蛋白磷酸化，以泛素-26S蛋白酶体依赖性方式进行降解［10］。

Skp2和细胞周期依赖的基因调控密切相关，在细胞增殖调控过程中发挥重要作用。Skp2是泛素-蛋白连接酶(SCF)复合物底物识别亚基F-box家族的一员，其功能是作为SCF复合物底物识别亚基，特异性识别磷酸化的底物，并介导其泛素化降解，从而使细胞从G1期进入S期，控制细胞周期有序进行。Kokontis等［11］研究表明，前列腺癌细胞中Skp2过表达能够阻止P27积聚，并增加Cdk2活性，阻止雄激素对细胞增殖和细胞周期的抑制作用。E2F-1是细胞内重要的转录因子，对细胞的增殖、分化和凋亡都发挥关键性作用。E2F-1在G1/S期快速降解是E2F-1特异性的同Skp2相互作用的结果，破坏Skp2与E2F-1的相互作用可下调E2F-1泛素化，增加其稳定性。在肿瘤组织中E2F-1过表达抑制细胞周期相关因子如cyclin D1、Skp2、c-Myc表达。Myc作为癌蛋白转录因子，与细胞的生长、分化、增殖和肿瘤发生相关。Skp2在E2F-1转录激活和泛素化降解过程中发挥关键作用，作用机制是依赖于Myc增强c-Myc诱导的S期转变，进而活化c-Myc靶基因。Skp2是c-Myc转录辅因子，能够调节c-Myc蛋白的稳定性以及 c-Myc依赖的转录［12］。此外，c-Myc与Skp2能够协调P27降解和血管平滑肌细胞增殖［13］。

2 P27kip1与 Jab1、Skp2 的关系

P27kip1能够与多种cyclin-CDK复合物结合并抑制其活性，使Rb蛋白被cyclin-CDK有效磷酸化，抑制E2F转录因子释放及下游基因转录，从而阻断细胞周期的进程［14］。细胞内P27kip1蛋白表达受到多种机制的调节，其中最为重要的是细胞周期依赖性底物特异性的蛋白水解途径。目前，对于介导P27kip1出核转运及降解的机制还不清楚。研究发现，提高细胞内Jab1/CNS5的表达水平，可以诱导CDK特异性下调，从而使P27kip1的出核转运明显增加［15］。最近已有研究表明，Skp2在P27kip1的降解过程中发挥重要作用［16］。P27kip1本身并不具备典型的NES序列，不能有效地被出核因子CRM1识别。Jab1含有富含亮氨酸的 NSE序列，能够直接与P27kip1结合，为 P27kip1提供 NES，从而实现 P27kip1的出核转运。人为提高细胞内Jab1的表达水平后，P27kip1的出核转运明显增加，并且CRM1和26S蛋白酶体依赖性的蛋白降解加快。

P27kip1降解的限速因子为SCF型泛素链接酶复合体，包括Skp2作为特殊的底物识别位点。Skp2在惰侵袭性淋巴瘤中的表达水平明显高于惰性淋巴瘤，并且在大多数淋巴瘤亚型中Skp2和P27的表达呈负相关［17］。套细胞淋巴瘤组织Skp2蛋白过表达抑制P27Kip1的表达水平;通过小干扰RNA技术抑制Skp2 表达后，P27kip1和 P21WAF1 表达水平增加［18］。此外，在结肠癌、乳腺癌等组织中也发现Skp2具有控制P27kip1表达水平的重要作用［19］。

3 P27kip1、Jab1、Skp2 与 NHL 发生、发展的关系

研究发现，抑制 P27kip1能够促进淋巴瘤生长［20］。Zhang 等［21］研究发现，P27kip1在淋巴瘤组织中表达水平降低，且随着病理等级的增加，P27kip1降低更明显。此外，在淋巴瘤Jurkat细胞中P27kip1蛋白表达下降，并且细胞核内P27kip1显著降低［22］。低P27kip1表达与 NHL不良预后有关［23］。在淋巴瘤Jurkat细胞中Jab1过表达导致P27kip1水平下降，加快细胞周期G1/S期的进程［24］;淋巴瘤细胞U937血清饥饿后P27kip1蛋白表达增加，Jab1表达降低［25］;间变性大细胞性淋巴瘤(NHL的一种特殊类型)组织中Jab1表达水平增加与P27kip1表达水平下降及不良预后有关［26］。在眼附属器NHL组织中，Skp2高表达与肿瘤的发生有关［21］;Skp2在NHL组织中表达水平显著高于反应增生性淋巴结，与其增殖活性及侵袭性呈正相关［27］;在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中Skp2表达增高，且与侵袭性参数如晚期、结外转移及高增殖有关［28］;Skp2在惰性淋巴瘤组织中的表达明显低于侵袭性淋巴瘤，并且 Skp2和P27kip1的表达呈负相关［29］。

总之，P27kip1、Jab1、Skp2均参与细胞周期调控，Jab1、Skp2功能异常导致P27kip1水平下降、功能缺失，可能参与NHL的发生、发展。

［1］Zhang Q，Yang Z，Jia Z，et al.ISL-1 is overexpressed in non-Hodgkin lymphoma and promotes lymphoma cell proliferation by forming a p-STAT3/p-c-Jun/ISL-1 complex［J］.Mol Cancer，2014，(13):181.

［2］Siegel R，Ma J，Zou Z，et al.Cancer statistics，2014［J］.CA Cancer J Clin，2014，64(5):364.

［3］Fu ZY，Zhu J，Song YQ，et al.Prognostic analysis of 525 Chinese patients with diffuse large B cell lymphoma［J］.Beijing Da Xue Xue Bao，2014，46(3):405-411.

［4］Salazar CR，Anayannis N，Smith RV，et al.Combined P16 and human papillomavirus testing predicts head and neck cancer survival［J］.Int J Cancer，2014，135(10):2404-2412.

［5］Tamaki S，Tokumoto Y.Overexpression of cyclin dependent kinase inhibitor P27/Kip1 increases oligodendrocyte differentiation from induced pluripotent stem cells［J］.In Vitro Cell Dev Biol Anim，2014，50(8):778-785.

［6］Sun C，Zhao J，Jin YC，et al.PTEN regulation of the proliferation and differentiation of auditory progenitors through the PTEN/PI3K/Akt-signaling pathway in mice［J］.Neuroreport，2014，25(3):177-183.

［7］Ohtani M，Isozaki H，Fujii K，et al.Impact of the expression of cyclin-dependent kinase inhibitor p27(Kip1)and apoptosis in tumor cells on the overall survival of patients with non-early stage gastric carcinoma［J］.Cancer，1999，85(8):1711-1718.

［8］Yang X，Zhang N，Shi Z，et al.Histone deacetylase inhibitor suberoyl bis-hydroxamic acid suppresses cell proliferation and induces apoptosis in breast cancer cells［J］.Mol Med Rep，2015，11(4):2908-2912.

［9］Fei M，Hang QL，Hou SC，et al.Adhesion to fibronectin induces p27(Kip1)nuclear accumulation through down-regulation of Jab1 and contributes to cell adhesion-mediated drug resistance(CAMDR)in RPMI 8226 cells［J］.Mol Cell Biochem，2014，386(1/2):177-187.

［10］Yoshida A，Yoneda-Kato N，Panattoni MA，et al.CSN5/jab1 controls multiple events in the mammalian cell cycle［J］.FEBS Lett，2010，584(22):4545-4552.

［11］Kokontis JM，Lin HP，Jiang SS，et al.Androgen suppresses the proliferation ofandrogen Receptor-Positive Castration-Resistant prostate cancer cells via inhibition of Cdk2，CyclinA，and Skp2［J］.PLoS One，2014，9(10):e109170.

［12］Baresova P，Pitha PM，Lubyova B.Kaposi sarcoma-associated herpesvirus vIRF-3 protein binds to F-box of Skp2 protein and acts as a regulator of c-Myc protein function and stability［J］.J Biol Chem，2012，287(20):16199-16208.

［13］Sicari BM，Troxell R，Salim F，et al.C-myc and skp2 coordinate p27 degradation，vascular smooth muscle proliferation，and neointima formation induced by the parathyroid Hormone-Related protein［J］.Endocrinology，2012，153(2):861-872.

［14］Ha SY，Lee CH，Chang S，et al.Differential expression of forkhead box M1 and its downstream cyclin-dependent kinase inhibitors p27(kip1)and p21(waf1/cip1)in the diagnosis of pulmonary neuroendocrine tumours［J］.Histopathology，2012，60(5):731-739.

［15］Tomoda K，Kubota Y，Arata Y，et al.The cytoplasmic shuttling and subsequent degradation of p27(Kip1)mediated by Jab1/CSN5 and the COP9 signalosome complex［J］.J Biol Chem，2002，277(3):2302-2310.

［16］Uddin S，Ahmed M，Bavi P，et al.Bortezornib(velcade)induces p27Kip1 expression through S-phase kinase protein 2 degradation in colorectal cancer［J］.Cancer Res，2008，68(9):3379-3388.

［17］Caraballo JM，Acosta JC，Cortés MA，et al.High p27 protein levels in chronic lymphocytic leukemia are associated to low Myc and Skp2 expression，confer resistance to apoptosis and antagonize Myc effects on cell cycle［J］.Oncotarget，2014，5(13):4694-4708.

［18］Sutterluty H，Chatelain E，Marti A，et al.p45(SKP2)promotes p27(kip1)degradation and induces S phase in quiescent cells［J］.Nat Cell Biol，1999，1(4):207-214.

［19］Guo Z，Lv Q，Zhang Y，et al.Expression and significance of c-Jun activation domain binding protein 1 in human colorectal carcinoma［J］.Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2014，94(12):899-902.

［20］Roorda BD，Ter Elst A，Scherpen FJ，et al.VEGF-A promotes lymphoma tumour growth by activation of STAT proteins and inhibition of p27(KIP1)via paracrine mechanisms［J］.Eur J Cancer，2010，46(5):974-982.

［21］Zhang JJ，Zhao GQ，Lin H，et al.The expression and meanning of Skp2，p27，PTEN proteins in non-Hodgkin B-cell lymphoma of ocular adnexa［J］.Zhonghua Yan Ke Za Zhi，2012，48(12):1107-1112.

［22］Lu JX，Wang YC，Shen AG，et al.Expression variation and significance of Skp2 and p27(kip1)during the proliferation of Jurkat cells［J］.Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2008，30(5):330-334.

［23］Seki R，Ohshima K，Fujisaki T，et al.Prognostic significance of S-phase kinase-associated protein 2 and p27kip1 in patients with diffuse large B-cell lymphoma:effects of rituximab［J］.Ann Oncol，2010，21(4):833-841.

［24］Wang YC，Fei M，Cheng C，et al.Jun activation domain-binding protein 1 negatively regulate p27(kip1)in non-Hodgkin＇s lymphomas［J］.Cancer Biol Ther，2008，7(3):460-467.

［25］Ito Y，Yoshida H，Matsuzuka F，et al.Jun activation domainbinding protein 1 expression in malignant lymphoma of the thyroid:its linkage to degree of malignancy and p27 expression［J］.Anticancer Res，2003，23(5b):4121-4125.

［26］Qi CF，Xiang S，Shin MS，et al.Expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27 and its deregulation in mouse B cell lymphomas［J］.Leuk Res，2006，30(2):153-163.

［27］Lu JX，Zhang DM，Shen AG，et al.Eepression and correlation of Skp2 and p27(kip1)in 92 cases of non-Hodgkin＇s lymphoma［J］.Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2007，29(5):373-377.

［28］Abdou AG，Asaad NY，Abd El-Wahed MM，et al.The prognostic of Skp2 expression in Egyptian diffuse large B-cell lymphoma［J］.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2012，20(1):47-55.

［29］Signoretti S，Di Marcotullio L，Richardson A，et al.Oncogenic role of the ubiquitin ligase subunit Skp2 in human breast cancer［J］.J Clin Invest，2002，110(5):633-641.