宋忠旭　雷　彬　李良华　孙　华　彭先文　梅书棋李明波　刘贵生

湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，武汉430064



胶体金免疫层析试纸条与ELISA检测猪瘟抗体的比对试验

宋忠旭雷彬李良华孙华彭先文梅书棋*李明波刘贵生

湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，武汉430064

摘要胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%，ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%，两者符合率为99.07%；胶体金免疫层析试纸条强阳性率为86.73%，ELISA检测猪瘟抗体阻断率≥60%为89.38%，检测线显色强度与抗体水平呈正相关。

关键词猪瘟；胶体金免疫层析试纸条；ELISA；抗体比对

古典猪瘟（classical swine fever，CSF）早称“猪瘟”（hog cholera，HC），是一种高度接触性传染病，遍布于全世界，世界动物卫生组织（OIE）将此病列为A类传染病之一[1]。

为了从根本上解决猪瘟对养猪业的危害，我国开展了猪瘟等动物疫病净化的研究和实践工作，目前，ELISA、PCR、荧光法等常规的检测猪瘟抗原（或抗体）方法需要必要的仪器设备和试剂，费时费力，在基层兽医部门由于不具备工作条件和技术力量，很难开展[2]。

胶体金免疫层析试纸条是利用抗原抗体反应，在试纸条硝酸纤维素膜上预先固定好特异性抗原（或抗体）和第二抗体2种捕获剂，分别作为检测线（Test line）和质控线（Control line）[3]。以猪瘟病毒特异性抗原融合胶体金与膜免疫层析技术，检测猪血清中猪瘟抗体，检测样品顺加样孔上移，血清中的猪瘟抗体与金标抗原结合，形成的抗原-抗体-胶体金复合物被检测线拦截，呈现红色检测线（T），质控线拦截金标抗原后呈现红色质控线（C）；当被检血清中不含猪瘟特异抗体时，检测线不显色，只呈现红色质控线。现将胶体金免疫层析试纸条与ELISA法检测猪瘟抗体的比对试验结果报告如下。

1　材料与方法

1.1血清样本的采集

抽样113头，免疫猪瘟疫苗6周后的成年种猪，前腔静脉采血，血液离心，将同1头猪的血清分成2份，1份用于胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体，另1份用于ELISA法检测猪瘟抗体。

1.2胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体

1）胶体金免疫层析试纸条由河南省农业科学院动物免疫学重点实验室提供，密封、干燥、4℃保存。

2）将冷藏的试纸条从冰箱中取出，待其恢复至室温再打开密封使用。

3）根据已编号的待检血清样品份数取出稀释杯，每杯加入200 μL（约7滴）的稀释液，取1 μL的待检样品加入对应的稀释杯中混匀，1∶200稀释样品，取出试纸卡编号、平放，取稀释好的样品溶液100 μL（约4滴）加入相应的试纸卡样品中，静置5～10 min后观察结果。

4）结果判定。对照样品：阳性对照应出现2条红线（检测线和质控线），检测线强于质控线；阴性对照检测线明显弱于质控线。

被检样品：视窗区出现两条红色线（检测线和质控线），检测线明显强于质控线时判为强阳性，可记为“+++”；检测线与质控线显色强度相当时判为阳性，可记为“+”；检测线明显弱于质控线，或只出现一条红色质控线时判为阴性，可记为“-”；质控线不显红色时，表示操作有误或试纸失效。

1.3 ELISA检测猪瘟抗体

将用于ELISA检测的血清，冷藏送至华中农业大学，用IDEXX公司CSFV- Ab- ELISA试剂盒进行检测，依据标准为GB/T 16551- 2008，阻断率≥40%判定为阳性，表示抗体合格；阻断率﹤40%判定为阴性，表示抗体不合格。

2　结果

1）胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%，ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%，结果如表1。

2）试纸条强阳性率为86.73%，ELISA阻断率≥60%为89.38%，结果如表2。

表1　 ELISA法检测猪瘟抗体结果

表2　试纸条强阳性率

3　讨论

1）胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体阳性检出率94.69%，ELISA法检测猪瘟抗体合格率95.58%，ELISA法比胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体灵敏，与金颜辉等的结果一致[4]，两者符合率为99.07%，胶体金免疫层析试纸条可以用于临床检测猪瘟抗体。

2）试纸条强阳性率为86.73%，ELISA阻断率≥60%为89.38%，检测线显色强度与抗体水平呈正相关。

3）检测线强于或等于质控线即为阳性；检测线明显弱于质控线，或只出现一条红色质控线即为阴性，通过比色方法肉眼判定检测结果，5～10 min后观察结果，试纸条可以在温度4～30℃的条件保存，可以在工作条件和技术力量较差的基层兽医部门开展，无需苛刻的应用条件。

4）产品包含试纸条、样品稀释液、稀释杯、滴管、阳性对照和阴性对照，操作简便。

4　结　论

胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟抗体具有简便、快速、敏感、特异等优点，可以用于猪血清中猪瘟抗体的定性检测。

参考文献

[1]斯特劳（Straw B E）等.猪病学[M].9版.北京：中国农业大学出版社，2008：325- 335.

[2]杨明，陈伯祥，孙晓林，等.猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制[J].甘肃农业大学学报，2010，45（2）：34- 37.

[3]黄芬，叶绍辉，龚振明.免疫层析快速诊断试纸条的制备及其应用[J].当代畜牧，2006（8）：20- 22.

[4]金颜辉，黄印尧，张长弓，等.应用金免疫层析技术检测猪瘟抗体的研究[J].中国动物检疫，2004，21（5）：26- 27.

*通讯作者宋忠旭，男，1969年生，高级畜牧师，研究方向：猪育种及生产管理。

基金项目：国家科技支撑计划项目（2011BAD28B01- 3）；国家生猪产业技术体系项目（CARS- 36）；湖北省农业科技创新中心创新团队项目（2011- 620- 001- 003）；湖北省重大人才工程高端人才引领培养计划

收稿日期：2015- 08- 06