蔡志军， 韦 群， 周鹰豪， 陈 瑜

(1.广东医学院第二附属医院检验科， 广东 湛江 524000 2.广东省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 广东 湛江 524003)

血浆内毒素检测在快速诊断革兰阴性菌引起全身性感染的应用

蔡志军1， 韦 群2， 周鹰豪1， 陈 瑜2

(1.广东医学院第二附属医院检验科， 广东 湛江 524000 2.广东省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 广东 湛江 524003)

目的:探讨血浆内毒素检测与传统血培养之间的关系，方法:应用LKM－02－32动态试管检测仪检测血浆中内毒素的含量，并与血培养结果进行比较。结果:337例患者中内毒素检测阳性35例，占10.39%，内毒素检测阴性302例，占89.61%;内毒素检测阳性组血培养出革兰阴性菌19例，占54.29%，内毒素检测阴性组血培养出革兰阴性菌2例，占0.66%。内毒素检测阳性组血培养出革兰阴性菌显著高于内毒素检测阴性组，两组差异有统计学意义(P＞0.05)，在内毒素检测阳性的35例患者中，19例血培养阳性的内毒素含量也显著高于16例血培养阴性的内毒素含量(P＞0.05)。以血培养为标准，内毒素检测的敏感度为90.48%，特异度为94.94%，阳性预测值为54.29%，阴性预测值为99.34%，结论:内毒素检测较传统的血培养法快速，阳性率高，可用于全身性感染的早期辅助诊断。

内毒素; 革兰阴性菌; 感 染

全身性感染主要见于败血症，革兰阴性菌感染尤常并发内毒素血症，常见的致病菌如大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌、肠杆菌属、铜绿假单胞菌、变形杆菌等等，多通过泌尿道、肠道、胆道和呼吸道引起感染，亦可通过外伤、手术、导管以及器械操作等途径而进入血液，并大量繁殖引起败血症，从而造成内毒素血症［1］。通过血浆内毒素的快速检测，以判断由革兰阴性菌引起的全身性感染是近年来对感染性疾病病原学检查的一种新的辅助诊断方法，本文就血浆内毒素检测对革兰阴性菌引起的全身性感染的快速诊断进行探讨，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象:收集样本标准:根据广东省2008年7月颁布的血培养指导原则以及《严重感染与感染性休克国际诊治指南(2008)》诊断要求［2］:有以下体征之一均采血做血培养(需氧+厌氧)，同时抽取2mL静脉置于肝素锂抗凝管中进行血浆内毒素检测，①体温＞38℃或＜36℃;②心率＞90次/min;③呼吸频率＞20次/ min或PCO2＜32mmHg;白细胞数＞12×109L－1或＜4× 109L－1。从2013年10月至2014年7月收集到符合上述条件的样本337份，年龄21d至89岁，男192例，女145例，患者主要来自儿科、ICU、呼吸内科、肾内科、血液内科及感染科。

1.2 方 法

1.2.1 仪器与试剂:血培养及细菌鉴定:血培养仪: BACTEC－9120;全自动细菌分析仪:PhoenixTM－100，以及配套试剂均来自美国BD公司产品，每批次产品均严格按照常规做室内质控，质控菌株采用大肠埃希氏菌ATCC25922以及金黄色葡萄球菌ATCC25923。血浆内毒素检测:动态试管检测仪LKM－02－32、TAL－80试管恒温仪及内毒素检测试剂盒、质控品均由广东湛江安度斯生物有限公司提供。

1.2.2 血浆内毒素检测:①采集好的抗凝血进行2000r/min离心10min，取上层富含血小板的血浆0.1mL加入装有0.9mL样品处理液中，混匀后75℃保温10min取出后放置冷冻槽5min，为待测血浆样品;②取0.25mL试剂复溶液加入反应试剂中，轻轻摇匀静置2min得试剂溶液;③取反应管，每样本平行2管分别加入0.1mL处理后的待测血浆样品及50μg试剂溶液，混匀后插入 LKM－02－32动态试管检测仪中，75min反应结束后自动计算血浆中内毒素的含量。大于0.109EU/mL为阳性。

1.2.3 血培养阳性样本转种血平板后使用PhoenixTM－100全自动细菌分析仪进行鉴定。

1.3 统计学处理:应用SPSS17.0软件统计分析，计量资料组间比较采用t检验，以±s表示;计数资料组间比较采用χ2检验，P＞0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 内毒素检测与血培养结果:337例患者中内毒素阳性35例，占10.39%，内毒素含量:0.272±0.246EU/mL，内毒素阳性组血培养出革兰阴性菌19例，占54.09%，内毒素阴性组302例，占89.61%，内毒素正常组血培养出革兰阴性菌2例，占0.66%;血培养阳性21例组，内毒素含量:0.298±0.314EU/mL，血培养阴性316例组，内毒素含量:0.04±0.045EU/mL，两者比较差异有统计学意义(P＞0.05);在内毒素阳性35例中，19例血培养出革兰阴性菌的内毒素平均含量为 0.325EU/mL，16例血培养阴性的内毒素平均含量为:0.208EU/mL，两者比较P＞0.05，差异有统计学意义。

2.2 内毒素检测的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。以培养出革兰阴性菌为标准，内毒素检测的敏感度为90.48%，特异度为94.94%，阳性预测值为54.29%，阴性预测值为99.34%，检测结果见表1。

表1 内毒素检测和血培养阳性生结果比较

3 讨 论

内毒素的主要成分为脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，LPS是炎症反应的关键递质，其化学成分主要是由O－特异性链、核心多糖、类脂A三部分组成［3］，LPS一般在细菌死后细胞壁崩解时释出，活菌亦可以发疱形式将内毒素释出。革兰阴性菌感染是院内感染的主要致病菌，尤其是其所致的败血症更为严重。董玉梅［4］、冯颖［5］、邵敏伟［6］等分别在血培养阳性病原体分析中，革兰阴性菌分别占:59.95%、52.3%、65.2%，本院2013年度统计158份血培养阳性标本中，革兰阴性菌占61.4%，基本一致。因此，及时判断革兰阴性菌引起的全身性感染对治疗及预后起到重要作用。

细菌培养是循征感染医学中细菌性感染性疾病病原学检查的“金标准”。细菌培养在临床疾病诊断及使用抗生素治疗的过程中具有重要的意义，具有一定的不可替代性，由于细菌种类繁多，进行培养时不同的菌种所需要的条件(营养、温度、酸碱度、气体等)各异，这就难以确保在普通培养时对菌种培养鉴定的全面性，还有受临床用药、标本采集等因素影响了培养的准确性，同时培养时间过长也可能延误临床诊断病情，间接导致病人的病情加重，出现不良后果。

内毒素检测的方法有凝胶法、浊度法、比色法、酶联免疫吸附测定法、流式细胞术、化学化光测定法等。我们现在使用由湛江安度斯生物有限公司提供的配套仪器及试剂，根据内毒素与鲎试剂的C因子发生反应，由内毒素引发激活的凝固酶，切断凝固蛋白原中的精氨酸肽链，形成凝固蛋白从而产生凝胶过程中的浊度变化，是用浊度仪定量的方法，本方法广泛应用于药物检测及临床。在本次研究中，血培养出革兰阴性菌组内毒素含量明显高于血培养阴性组(P＞0.05)，说明内毒素测定与由革兰阴性菌引起的全身性感染有良好的相关性，血浆内毒素检测的阳性率高于血培养法且检测时间仅仅为75min，其敏感度及特异度均达90%以上;在35例内毒素阳性标本中仅有19例血培养出阴性菌，阳性预测值为54.29%，这与部分患者患肝脏疾病、胰腺疾病、溃疡性结肠炎并发内毒素血症有一定关系。其次假阳性还可由于患者治疗过程中使了脂肪乳、白蛋白、香茹多糖类、黄芪注射液、双黄连注射液等药物;各种相关的反应条件、操作环境、标准品等等也可干扰试验的准确性。因些，在实际检测过程中应严格遵守操作规程，尽力排除各种干扰因素，使试验结果更加准确、真实可信。在21例血培养出革兰阴性菌的患者中有2例血浆内毒素检测阴性，假阴性结果与感染早期未经抗生素治疗，内毒素尚未释出有关。我们本次研究的阴性预测值达99.34%。

［1］马金玲，刘扬，李伟保，李忠信.内毒素检测与临床应用现状［J］.国外医学临床生物化学与检验学分册，2003，24 (2):64～65.

［2］Dellinger R P，Levy M M，Carlet J M，et al.Surviving Sepsis Campaign:International guidelines for management of severe sepsis and septic shock:2008［J］.Intensive Care Med，2008，34(1):17～60.

［3］焦炳华，余庆.内毒素的结构及其功能的关系［J］.国外医学生分子生物学分册，1987，9(4):168～170.

［4］董玉梅，靳桂明，刘海冰，等.从菌血症病原体分析观察医院感染动向［J］.华南国防医学杂志，2002，16(2):55～56.

［5］冯颖，黄晶，姚兴伟，等.3500份血培养阳性结果分析和病原菌分布［J］.中国实验诊断学，2009，13(10):1426～1247.

［6］邵敏伟，梁艳，周庭银.4603例血培养病原菌种类分布与耐药性分析［J］.中国抗生互杂志，2008，33(12):727～730.

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.04.059

1006－6233(2015)04－0690－02