史庭燕　贺静　王梦筠

(1. 复旦大学附属中山医院妇产科，上海　200032； 2. 复旦大学附属肿瘤医院，上海　200032；

3. 广东省广州市妇女儿童医疗中心，广东广州　510623)



TNFAIP8家族基因单核苷酸多态性位点在宫颈癌预后评估中的作用

史庭燕1,2贺静3王梦筠2

(1. 复旦大学附属中山医院妇产科，上海200032； 2. 复旦大学附属肿瘤医院，上海200032；

3. 广东省广州市妇女儿童医疗中心，广东广州510623)

摘要目的：探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor-α-induced protein 8, TNFAIP8)家族基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点在宫颈癌预后评估中的作用。方法：选择2008—2009年行根治性子宫切除术并获得至少2年随访的144例宫颈癌患者。采用Taqman探针检测患者TNFAIP8家族基因中3个多态性位点(TNFAIP8-rs11064、TNFAIP8-rs3813308和TNFAIP8L1-rs1060555)的基因分型。分析TNFAIP8家族基因SNP位点与宫颈癌预后的关系。结果：携带TNFAIP8L1-rs1060555 GG的宫颈癌患者相较于携带CG/CC基因型者，肿瘤复发的危险度显著增加(校正HR=3.25，95%CI: 1.06~9.95)。联合效应分析发现，携带TNFAIP8基因家族2~3个危险基因型的患者相较于携带0~1个危险基因型者，肿瘤复发的危险度显著增加(校正HR=2.55，95%CI：1.02~6.36)。结论：TNFAIP8家族基因的SNP位点有望为宫颈癌的预后评估提供参考。

关键词宫颈癌；TNFAIP8基因家族；多态性；预后

在世界范围内，宫颈癌的发病率居女性恶性肿瘤的第3位，致死率居女性肿瘤的第4位[1]。在发展中国家，宫颈癌是发病率最高的女性生殖道恶性肿瘤。近年来，我国每年新增约10万例宫颈癌患者，占全球发病例数的1/5，且呈年轻化趋势，每年病死病例超过3万[2]。宫颈癌的发生、发展是多因素相互作用的结果，其中遗传被认为是宫颈癌个体化治疗及预后差异的重要因素。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor-α-induced protein 8, TNFAIP8)基因家族是一组新发现的、尚未深入研究的基因，目前认为它们具有维持自身免疫和抑制细胞凋亡的作用[3]。该家族包括TNFAIP8、TNFAIP8L1、TNFAIP8L2和TNFAIP8L3。它们在细胞增殖、炎性反应和细胞凋亡过程中起重要作用[4]。既往研究[5-6]发现，TNFAIP8和TNFAIP8L1在抑制细胞凋亡以及肿瘤的发生、发展过程中具有重要调控作用；而TNFAIP8L2被认为是重要的免疫相关负调控因子，参与炎性反应的发生发展。最新研究[7]表明，TNFAIP8L3是一种脂类第二信使转运蛋白，在肿瘤发生中起促进作用。我们的前期研究[8]发现，TNFAIP8家族基因的功能性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点与宫颈癌的发生相关。然而，SNP位点与宫颈癌预后的关系尚不明确。因此，本研究探讨了TNFAIP8家族基因的SNP位点与宫颈癌预后的关系，以期为宫颈癌个体化治疗、预后评估提供分子流行病学与遗传学证据。

1资料与方法

1.1 一般资料选择2008—2009年在复旦大学附属肿瘤医院进行根治性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术的144例宫颈癌患者，均获得标准治疗和随访。术后3周，当患者存在至少两个高危因素(≥1个盆腔淋巴结转移、肿瘤直径>4 cm、脉管浸润阳性、切缘阳性或者宫颈肌层浸润深度>1/2中任意两项)时，行盆腔放射治疗加顺铂化疗方案治疗(30 mg/m2顺铂 + 45 mg/m2紫杉醇)的同步放化疗方案。若患者有髂淋巴结转移，则改用延伸野放射治疗。所有患者在术后两年内每3个月随访1次，第2个两年每6个月随访1次，之后每年随访1次。肿瘤复发定义为：初次治疗后，经过至少3个月的无瘤期，再次发现肿瘤灶。无进展生存率(progression-free survival，PFS)为从初次手术到复发。144例患者均自愿参与研究，签署知情同意书，并提供5 mL外周静脉血。

1.2SNP位点选择根据HapMap和NCBI 的dbSNP数据库，查询中国汉族人群TNFAIP8基因的SNP位点。筛选标准：(1) 中国汉族人群最小等位基因频率≥0.05；(2) 各位点间连锁不平衡(r2<0.8)；(3) 位于基因功能区，且SNPinfo在线软件预测具有潜在功能性。根据上述标准，我们筛选出3个候选SNP位点：TNFAIP8-rs11064、TNFAIP8-rs3813308、TNFAIP8L1-rs1060555。

1.3血基因组DNA的提取和基因分型检测采用血液基因组DNA提取试剂盒(购自广州东盛生物科技有限公司)提取全血基因组DNA，并用超微量紫外可见分光光度计(ND-2000，美国Thermo Scientific公司)检测DNA的浓度和纯度。采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测SNP位点的基因分型，TaqMan探针和SNP分型试剂(TaqMan Genotyping Master Mix)均购自美国ABI公司。PCR反应后的荧光信号通过SDS 2.3软件(ABI公司)分析。每块PCR反应的384孔板在指定位置设有阳性和阴性对照各4个。另外，随机抽取5% 样本进行测序，测序结果与TaqMan基因分型结果的一致率为100%。

1.4统计学处理采用SAS 9.1软件进行统计学处理。采用Kaplan-Meier生存分析曲线、Log-rank检验和Cox多元回归分析评估模型进行TNFAIP8基因家族SNP和宫颈癌患者预后的相关性分析。

2结果

2.1一般情况144例患者的平均年龄(46.5±8.6)岁；按国际妇产科协会(FIGO)分期标准，Ⅰ、ⅡA和IIB期者分别为70、64和8例；肿瘤直径≥4 cm者85例 (59.0%)；盆腔淋巴结转移阳性和血管浸润阳性者分别为51例 (35.4%)、53例 (37.1%) ；宫颈肌层浸润深度>1/2层者110 例 (76.4%) ；术后采用同步放化疗方案者115例 (79.9%)。所有患者治疗后均随访24~40个月，中位随访时间为35个月，其中21例在随访期内肿瘤复发，11例患者因宫颈癌病死。见表1。

表1　144例患者的一般情况

2.2TNFAIP8家族基因SNP位点与宫颈癌预后的相关性多因素分析显示，携带TNFAIP8L1-rs1060555 GG基因型的宫颈癌患者相较于携带CG/CC基因型者，肿瘤复发的危险度显著增加(校正HR=3.25，95%CI：1.06~9.95)。我们将3个SNP位点进行联合分析，携带TNFAIP8-rs11064 AA、TNFAIP8-rs3813308 CC和TNFAIP8L1-rs1060555 GG中2~3个基因型的患者相对于携带0~1个基因型的患者，肿瘤复发的危险度显著增加(校正HR=2.55，95%CI：1.02~6.36)。见表2。Kaplan-Meier生存曲线(图1)分析也提示，当宫颈癌患者携带TNFAIP8L1-rs1060555 GG或TNFAIP8-rs11064 AA、TNFAIP8-rs3813308 CC和TNFAIP8L1-rs1060555 GG中的2~3个基因型时，PFS显著下降(Log-rank检验,P分别为0.024、0.014)。

表2　TNFAIP8家族基因SNP位点与宫颈癌预后的关系

注：*危险基因型为：TNFAIP8-rs11064AA、TNFAIP8-rs3813308CC、TNFAIP8L1-rs1060555GG

图1　Kaplan-Meier生存曲线

当宫颈癌患者携带TNFAIP8L1-rs1060555 GG基因型或携带2~3个危险基因型(TNFAIP8-rs11064 AA、TNFAIP8-rs3813308 CC、TNFAIP8L1-rs1060555 GG)时，PFS显著下降(Log-rank检验,P分别为0.024、0.014)。

3讨论

TNFAIP8基因家族包括TNFAIP8、TNFAIP8L1、TNFAIP8L2和TNFAIP8L3。本研究未在TNFAIP8L2和TNFAIP8L3基因中筛选到符合要求的SNP，因此最终纳入研究的仅为2个基因的3个SNP位点。我们的前期研究[8]已发现，TNFAIP8基因家族的功能性SNP位点与宫颈癌的发生密切相关，并且TNFAIP8蛋白表达水平与宫颈癌预后相关，但未对这些SNP位点与宫颈癌的预后做深入的多个位点联合分析。

本研究首次报告了TNFAIP8基因家族SNP在宫颈癌预后评估中的作用。我们发现，携带TNFAIP8L1-rs1060555 GG基因型的宫颈癌患者相对于CC/CG基因型携带者，PFS明显下降，肿瘤复发率增加。进一步的位点联合分析发现，携带TNFAIP8-rs11064 AA、TNFAIP8-rs3813308 CC、TNFAIP8L1-rs1060555 GG中的2~3个的患者比携带0~1个的患者，PFS明显下降，肿瘤复发增加。因此，TNFAIP8家族基因的SNP位点在宫颈癌的预后评估中起重要作用。

TNFAIP8基因定位于染色体5q23.1区域，主要通过负性调节T细胞受体和Toll样受体信号通路来发挥抗感染和维持免疫稳态的作用[5]；其过表达可引起细胞的增殖，在肿瘤发生、侵袭过程中扮演癌基因的角色[4，9-10]。TNFAIP8L1基因位于染色体19p13.3区段，DNA全长16 kb，编码的蛋白由186个氨基酸组成。目前，对TNFAIP8L1的研究较少，它可能作为抗凋亡的原癌基因，在免疫调节和肿瘤的发生发展中起重要作用，但与宫颈癌的关系尚未见报道。

尽管本研究纳入的病例数较少、随访时间较短，但我们的研究首次证实TNFAIP8家族基因SNP位点与宫颈癌预后相关。这些位点有望为宫颈癌患者的预后评估提供参考。我们将在后续研究中增加病例数、延长随访时间，以更加全面地了解TNFAIP8家族基因SNP在宫颈癌预后评估中的作用。

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Predictive Value of Polymorphisms in the TNFAIP8 Gene Family for Clinical Outcomes of Cervical Cancer

ShiTingyan1,2HeJing3WangMengyun2

1.DepartmentofObstetricsandGynecology,ZhongshanHospital，FudanUniversity,Shanghai200032,China; 2.FudanUniversityShanghaiCancerCenter,Shanghai200032,China; 3.GuangzhouWomenandChildren’sMedicalCenterinGuangdongProvince,Guangzhou510623,China

AbstractObjective： To investigate the predictive value of polymorphisms in the tumor necrosis factor-α-induced protein 8 (TNFAIP8) gene family in the prognosis of cervical cancer. Methods： A total of 144 cervical cancer patients who had been followed up for at least two years were recruited. Three polymorphism sites TNFAIP8-rs11064, TNFAIP8-rs3813308 and TNFAIP8L1-rs1060555 in the TNFAIP8 gene family were genotyped by the Taqman assay. The associations of polymorphisms in the TNFAIP8 gene family with prognosis of cervical cancer were analyzed. Results： Compared with CG/CC genotypes, tumor recurrence in TNFAIP8L1-rs1060555 GG genotype carriers increased (adjustedHR=3.25, 95%CI: 1.06-9.95). Combined analysis for the three polymorphisms indicated that compared with 0-1 risk genotype carriers, tumor recurrence in 2-3 risk genotype carriers increased (adjustedHR=2.55, 95% CI: 1.02-6.36). Conclusions： Polymorphisms in TNFAIP8 gene family may be predictive biomarkers for prognosis of cervical cancer.

Key WordsCervical cancer;TNFAIP8 gene family;Polymorphism;Prognosis

中图分类号R71

文献标识码A

基本项目：国家自然科学青年基金资助项目(编号：81402142)

·论著·