张静 徐斌

830000新疆医科大学附属中医医院病理科1

830000新疆医科大学附属中医医院肛肠科2

EphrinA1及其受体EphA1在直肠癌中的表达及意义

张静1徐斌2

830000新疆医科大学附属中医医院病理科1

830000新疆医科大学附属中医医院肛肠科2

目的：探讨EphrinA1及其受体EphA1在直肠癌中的表达及其意义。方法：检测40例直肠癌标本及40例癌旁组织标本EphrinA1及其受体EphA1的表达。结果：直肠癌EphrinA1阳性率、EphA1阳性率明显高于癌旁组织（P＜0.01）。≤65岁直肠癌患者与＞65岁直肠癌患者EphrinA1阳性率、EphA1阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：直肠癌的发生、发展可能和EphrinA1及其受体EphA1的异常表达有关。EphrinA1及其受体EphA1有望成为抗血管治疗新的靶点。

EphrinA1；EphA1；直肠癌；免疫组化

直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤，其发生、发展是多基因、多步骤参与的分子事件，包括多个癌基因的激活、抑癌基因的失活和基因组稳定性调控系统等多种改变。受体酪氨酸激酶包括血管生成素1、2（angiopoietin1、2）及其受体、血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体、促红细胞生成素肝细胞癌细胞株 受 体 配 体（EphrinA1）及 其 受 体Eph（erythropoietin-producecline），已经被公认为血管生成的重要信号因子。EphrinA1和EphA1参与多种肿瘤的发生和发展及肿瘤组织中血管的形成，其与血管生成的关系越来越被重视[1]，是功能强大的癌基因，对血管生成具有重要的作用。但直肠癌组织中EphrinA1和EphA1的表达及与其发生和发展的关系目前尚不清楚。本研究采用免疫组化方法探讨EphrinA1和EphA1在直肠癌组织中的表达，从分子水平上预测肿瘤的起源和发展，为干预肿瘤发生和发展奠定基础。

资料与方法

选取新疆医科大学附属中医医院病理科2012-2014年直肠癌标本40例及癌旁组织标本40例作为研究对象，所有标本均检测EphrinA1、EphA1。试剂购自Santa Cruz试剂及迈新试剂。

方法：按试剂盒说明书操作，PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性的肿瘤标本作为阳性对照。

免疫组化步骤如下：石蜡切片烘烤脱蜡至蒸馏水，PBS冲洗两遍；3％H2O2室温孵育5～10 min，消除内源性H2O2酶活性；蒸馏水洗，PBS浸泡5 min；切片抗原修复；滴加封闭用血清，室温10 min；加入一抗4℃湿盒中过夜；PBS冲洗两遍；生物素标记二抗，37℃孵育30 min；PBS冲洗两遍；切片加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液37℃处理30 min；PBS冲洗3遍；切片DAB显色，显微镜下观察3～10 min。自来水充分洗蒸馏水洗5～10 s；苏木素复染；梯度酒精脱水、二甲苯透明，树胶封固，光镜下观察EphrinA1及其受体EphA1的表达。

结果判断：光镜下观察：EphrinA1的表达主要见于肿瘤细胞的胞质或胞膜，在肿瘤血管内皮细胞也有弱阳性表达，EphA1的表达主要见于肿瘤细胞的胞质或胞膜，在肿瘤血管内皮细胞及一些巨噬细胞中也有表达。

统计学处理：采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计学分析，采用χ2检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

结果

EphrinA1及EphA1在直肠癌和癌旁组织中的表达：癌旁组织EphrinA1阳性率20％，直肠癌中EphrinA1阳性率62.5％，直肠癌中EphrinA1阳性率明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义（P＜0.01）。癌旁组织 EphA1阳性率（22.5％）低于直肠癌EphA1阳性率（75％），差异具有统计学意义（P＜0.01）。

EphrinA1及EphA1在不同年龄直肠癌患者中的表达情况：≤65岁直肠癌患者的EphrinA1阳性率（73.68％）高于＞65岁直肠癌患者的 EphrinA1阳性率（52.38％），但差异无统计学意义（P＞0.05），说明EphrinA1的表达与患者的年龄无关。≤65岁直肠癌患者的EphA1阳性率（68.42％）小于＞65岁直肠癌患者的EphA1阳性率（80.95％），差异无统计学意义（P＞0.05），说明EphA1的表达与患者的年龄无关。见表1。

讨论

直肠癌的发生、发展可能和EphrinA1及其受体EphA1的异常表达有关。已知有多种生长因子及细胞因子参与肿瘤血管生成。受体酪氨酸激酶包括血管生成素1，2及其受体、Ephrin及其受体Eph和VEGF及其受体，已经被公认为血管生成的重要信号分子。Eph/Ephrin是已知酪氨酸激酶中的最大成员[2]，EphA1是受体酪氨酸激酶一个亚族Eph家族中的第一个成员。配体称为EphrinA1，只有受体和配体结合才具有活性，发挥生物学功能，它们在肿瘤发生、发展和血管形成中起着举足轻重的作用。血管形成为实体瘤生长奠定基础，同时也是转移的重要途径。关于Eph基因在肿瘤发生、发展中的作用的报道逐渐增多，Hirai等通过Northern印迹法发现[3]，EphA1的mRNA在肺腺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌高表达，为家族参与肿瘤的发生发展提供了有力证据。本研究发现EphrinA1及其受体EphA1在直肠癌中的表达明显高于癌旁组织，说明了EphrinA1及其受体EphA1参与了直肠癌的发生、发展，EphrinA1与其受体EphA1结合，参与并促进直肠癌组织的血管生成，从而促进癌细胞的生长、浸润、转移。EphrinA1及其受体EphA1表达与年龄无关。

Expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma

Zhang Jing1，Xu Bin2
Department of Pathology，the Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 8300001The Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University 8300002

Objectives：To study the expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma.Methods：The expression of EphrinA1and EphA1 were detected in 40 specimens rectal carcinoma tissue and 40 specimens of paracarcinoma tissue.Results：The positive rate of EphrinA1 and positive rate of EphA1 in rectal carcinoma were lower than in paracarcinoma tissue（P＜0.01）.The positive rate of EphrinA1 and positive rate of EphA1 in patients with rectal carcinoma more than 65 years old were not different from that in patients with rectal carcinoma less than 65 years old（P＞0.05）.Conclusions：The occurrence and development of rectal carcinoma were correlated with abnormal expression of EphrinA1，EphA1.EphrinA1 and EphA1 could become the new targets for the anti-angiogenesis treatment.

EphrinA1；EphA1；Vascular endothelial growth factor；Rectal carcinoma；Immumohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.33.3

新疆医科大学创新基金（直肠癌EphrinA1及EphA1表达与血管生成关系的研究XJC201296）

Foundation item Innovation fund of Xinjiang Medical University（Expression and significance of EphrinA1 and EphA1 in rectal carcinoma XJC201296）