刘伟群应海刚

（1.内蒙古巴林左旗动物疫病预防控制中心,内蒙古赤峰 025450；2.内蒙古巴林左旗三山乡农村牧区综合服务中心,内蒙古赤峰 025474）

动物布氏杆菌病的诊断方法

刘伟群1应海刚2

（1.内蒙古巴林左旗动物疫病预防控制中心,内蒙古赤峰 025450；2.内蒙古巴林左旗三山乡农村牧区综合服务中心,内蒙古赤峰 025474）

布鲁氏分枝杆菌病简称布病，是由布鲁氏杆菌引起的一种广泛分布于世界各地的人畜共患的传染病。近年来，本病多次暴发，凡有牲畜的地区都有布鲁氏分枝杆菌病流行，是我国重点防治的地方病之一，主要发生在牧区。

1 病原体

布鲁氏杆菌是革兰氏阴性球杆菌，呈短杆状、边缘稍凸或直，末端钝圆。布鲁氏杆菌属分为6个菌种，即羊种（马耳他布鲁氏菌）、牛种（流产布鲁氏菌）、猪种及绵羊附睾种、沙林鼠种、犬种。临床上以羊、牛、猪3种意义最大，羊种致病力最强。本菌为需氧菌，但很多株需CO2（5%～10%）环境，最适宜pH值6.6～7.4，最适宜温度36℃～37℃。布鲁氏杆菌在自然环境中生命力较强，在污染的土壤、水以及病畜的分泌物、排泄物及死畜的脏器中能生存1～4个月，在食品中约生存2个月。60℃加热30 min、70℃加热5 min或日光下曝晒4 h可杀死本菌，对常用化学消毒剂较敏感。

2 流行病学

本病的易感动物范围很广，但主要感染羊、牛及猪。本病的主要传染源是病畜及带菌动物，染疫动物首先在同种动物间传播，造成带菌或发病，随后波及人类。本病一年四季均可发病，但以家畜流产季节为多。发病率，牧区高于农区。流行区在发病高峰季节可呈点状暴发流行。

3 临床症状

本病的潜伏期长短不一，短的两周，长的可达半年之久。家畜患病后症状基本相似，多数病例为隐性感染。早期出现结膜炎和体温升高等。妊娠母畜流产（多在妊娠2～8个月），多为死胎或弱仔，但大多数流产经两个月后可以再受孕。畜群中关节炎、子宫内膜炎、胎衣不下和不孕症增多。公畜睾丸肿大，触之热、痛。多数病例有长期起伏的发热，称“波状热”。

4 诊断

由于本病的易感动物范围很广。主要侵害动物的繁殖机能，给养殖业带来极大的损失，所以本病的诊断很重要。

4.1 病原分离与鉴定

布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性球杆状或短杆状的细菌，培养条件较高，目前，常用血清葡萄糖琼脂、胰蛋白大豆琼脂等培养基进行分离培养，通过布鲁氏杆菌形态、染色、生长特性、菌落形态、氧化酶及过氧化氢酶试验及抗布鲁氏杆菌多克隆抗体玻片凝集试验来鉴定布鲁氏菌。

4.2 血清学诊断

4.2.1 全乳环状试验

用一次性塑料注射器取新鲜乳样1 mL，置于试管中，加入布病环状反应抗原1滴（约0.05 ml），摇动使其充分混匀后，置于37℃恒温水浴，1 h后小心取出试管，勿使振荡，立即判定结果。判定标准为：明确有色脂环和白色乳柱，为“++++”；明确有色乳脂环和稍带颜色乳柱，为“+++”；明确有色乳脂环和带色较明显的乳柱，为“++”；明确有色乳脂环和明确的有色乳柱，为“+”；乳脂环白色或略带颜色和乳柱显著着色，为“-”。

4.2.2 试管凝集试验（SAT）

SAT是许多国家布鲁氏分枝杆菌病诊断的常规血清学方法，也是检测布鲁氏菌病的最经典的方法。对被检血清用0.5% 苯酚生理盐水，分别1∶50、1∶100、1∶200、1∶400进行倍比稀释。然后，每个稀释度加诊断抗源0.5 ml，混匀，与标准管比浊判断结果。

4.2.3 平板凝集试验（PAT）

PAT是布鲁氏分枝杆菌病血清学诊断的常规方法之一，常用作布鲁氏分枝杆菌病普查的初检。方法：取洁净的玻璃板，划成4cm2的小格，在每小格内加被检牛血清，每份血样2个格，第1格加血清0.02mL，第2 格加血清0.04mL，然后加平板凝集反应液0.03ml于每份被检血清小格内，并用玻璃棒混匀，同时做阴、阳性血清对照。有凝集现象为阳性，无凝集现象为阴性。平板凝集反应具有操作简单、反应快、易掌握、成本低的优点。

4.2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）

随着生物技术的发展，新的快速方便的检测技术不断出现，ELISA方法特异性好，样品需要量少，整个反应仅需1.5h。判定：静止5min，将反应板放置酶联反应仪的正确位置上，在490nm 处空白调零，并测各孔OD值。OD 值≥0.32者判为阳性。

4.3 PCR检测技术

近十余年来，PCR是发展和普及最迅速的分子生物学新技术之一。由于它具有强大的扩增能力，并且可与其他分子生物学方法和免疫学方法相结合应用，使其敏感性和特异性都大大增强，因而广泛应用于生物医学领域的各个学科。

5 结语与展望

布鲁氏菌病是一种世界范围的传染病，不仅给养殖业带来损失也严重威胁着人类的健康。通过对几种诊断方法的进行比较，综合检测灵敏度和特异性，PCR法较高，ELISA等血清法较次。但血清法的操作简便、成本低，因此在时间检疫工作中仍作为主要手段，PCR和ELISA准确度高，但成本高。传统血清法和ELISA法在检测过程存在假阳性的情况，在个别诊断时应结合使用PCR法。