姜在清 陈明生

（山东省诸城市畜牧兽医管理局，山东诸城 262200）

畜产品中瘦肉精、氯霉素等残留的胶体金检测技术

姜在清 陈明生

（山东省诸城市畜牧兽医管理局，山东诸城 262200）

诸城市畜牧局坚持以人为本的理念，始终把畜禽产品质量安全工作放在全局工作的首要任务。严格贯彻执行《食品安全法》《动物防疫法》《农产品质量安全法》《国务院关于加强食品及产品监督管理特别规定》《动物性食品中兽药最高残留限量》等法律法规及有关配套规定，加强畜禽产业行业管理，强化官方兽医监管职责，定期不定期到畜禽产业各环节进行监管，发现问题依法处理，同时充分发挥动物疫病预防控制中心的技术优势，积极开展对动物疫病、兽药饲料、畜禽产品药物残留进行监测和技术指导，发现问题由动物卫生监督机构依法处理。由于诸城市对畜禽产品质量安全的高度重视，加强畜禽产业各环节的监管、兽药残留的检测（监测），按照国家标准、行业标准及省、市有关兽药残留抽样检测计划的规定和操作规程和技术要求进行兽药残留的监测，至今无畜禽及畜禽产品质量安全事故发生。

2002年3月农牧发〔2002〕1号文件《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》、2002年4月农牧发〔2002〕235号文件《动物性食品中兽药最高残留限量》中“瘦肉精”（盐酸克伦特罗及其盐、酯）、氯霉素及其盐、酯是首要禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。盐酸克伦特罗在人的临床上用于治疗哮喘病，对心脏副作用大，属于—肾上腺类激素，据资料报道人医用量0.02～0.5μg/kg中毒一般含量肝脏100～500μg/kg，一般肝脏的残留是肌肉的200倍，一餐食用含“瘦肉精”的猪肝0.25kg以上者，约15min至6h可出现中毒症状，长期食用含有—受体激动剂残留的食品，将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心律失常病人的病情，引起心室期前收缩，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤，常见恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。

随着人民生活水平不断提高，人们对动物性食品的要求从数量型已转变成质量型，近年来中国的畜牧业迅速发展，已成为世界上畜禽产品生产大国，也是消费大国，同时出现了不科学应用动物疾病的防治及促生长药物，甚至受到利益的驱动，冲破道德的底线，使用或添加国家明令禁止的兽药及有害物质，目前诸城市畜牧局及动物屠宰企业积极开展兽药残留的检测工作，认真执行《动物性食品中兽药最高残留限量》规定，确保人民“舌尖上的安全”，让人民吃上“放心肉”，净化畜产品市场。

面对大量的畜禽及其畜禽产品，探讨研究快速、简单、准确的检测技术—胶体金快速检测法筛查，在实际工作中是最现实、最方便、最具有操作性的方法。胶体金快速检测卡是最快速、最简单的一种方法，判断依据为农业部《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》、农业部《禁止在饲料和饮水中使用的药物品种目录》、农部《农业部关于投入品使用的有关规定》；判断标准以确证方法定量限为判断值，超过定量限即判定为不合格。层析法免疫胶体金检测试剂实际上是免疫金标技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式，服从于抗原抗体反应的特性，从抗原抗体反应的原理上可把层析法免疫胶体金检测试剂分为以下几类，一是双抗体夹心法金标。二是双抗原夹心法。三是捕获法检测特异性的人IgG和IgM；四是竞争抑制法检测小分子物质。现在诸城市场上采用的 “瘦肉精”快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的“瘦肉精”在流动过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上“瘦肉精”—蛋白偶联物的结合。如样品尿液中“瘦肉精”含量大于3ppb，肉类中“瘦肉精”含量大于1ppb，检测线不显色，结果为阳性；反之为阴性。

“瘦肉精”胶体金快速检测卡检测方法：（1）最简单的方法只需要取一些猪肉、肝脏、肺脏、肾脏、瘦肉样品（约10g），将样品剪碎装入1.5 ml离心管中，盖紧管盖，在水浴中煮5～10 min，使汁液浸出，取出离心管放至室温，将煮出的汁液加同样体积的配套缓冲液混匀，用吸管吸入样本液垂滴加1～2滴于加样孔内，用于检测即可，几个ppb的瘦肉精就能被测出，全程只需十几分钟。注意脂肪会造成假阳性，取样时请弃去肉眼可见的脂肪。（2）样品猪肉组织，称取5.0±0.05g新鲜猪肉（或肝）样品，放于500ml带盖离心管中加5g无水硫酸钠，再加5ml乙氰振荡3min，4000r/min离心10min，取4ml上清液于另一试管中56度空气后氮气吹干，0.3ml三蒸水复溶，振荡3min取液体检测；（3）样品饲料，称取均质的饲料样品1.0±0.05g加入10ml甲醇，再加入5g无水硫酸钠振荡3min，室温4 000 r/min以上离心10 min，吸出离心后的上清液1ml，于56度氮气吹干，用1ml三蒸水复溶，再加1ml正己烷混合30s室温4 000 r/min以上离心，取下层液体检测。检测，在检测卡的加样孔内加入2滴（80μl）待检样品溶液，在室温下静置5～8 min内判定结果，超过30 min的结果只能做参考，当样品溶液中的瘦肉精含量大于检测限时，检测线不显色结果为阳性，当样品溶液中瘦肉精含量小于检测限时，检测线显紫红色，结果为阴性。肉类检测限为1ppb、饲料5～10 ppb。

胶体金快速检测卡对生猪尿液中“瘦肉精”的检测（适合于官方兽医搞产地检疫检测和屠宰检疫及屠宰厂检验检测时）。具体操作与注意事项：取出检测卡，根据检测样品的数量确定需要检测卡的数量；检测卡放置在平坦的台面上；检测卡标记上尿样的编号应于猪的耳标编码一致；然后用滴管吸取尿样，垂直滴加2滴尿样于加样孔中。结果的判定：（1）阳性：仅质控区（C）出现一条紫红色带，在测试区（T）内无紫红色条带出现，表明尿液中的克伦特罗残留物大于3ppb。（2）阴性：两条紫红色条出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内，表明尿液中不含克伦特罗残留物或小于3ppb。（3）无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或检测卡已损坏，应再次测试。注意操作过程在室温下；用干燥、洁净适当的容器采集50ml左右尿液，尿液在2℃～8℃保藏；尿样澄清时可直接用于检测，较为混浊尿样应离心或过滤后用于检测。