赵艳丽，董宏伟，2，陈小庆，刘秋艳，胡桂学

（1.吉林农业大学动物科技学院，吉林 长春130118；2.吉林省农业广播电视学校，吉林 长春130021）

猫杯状病毒（feline calicivirus，FCV）能引起猫的多发性口腔和呼吸道传染病，还可引起结膜炎，故又称为猫传染性鼻-结膜炎病毒。FCV 是杯状病毒科疱疹病毒属（Vesivirus）的成员之一，其基因组为单股正链RNA，无囊膜，核衣壳呈二十面体对称。

目前FCV 感染已呈世界性分布。几乎所有的猫科动物均易感，一岁以下的猫最易感，也有感染狗的报道。FCV 感染猫通常仅局限于口腔和上呼吸道，有些毒株还可以引发机体产生慢性胃肠炎和急性关节炎症状。FCV 在猫群中高度流行，主要是因为许多临床康复的猫仍然是病毒携带者。该病虽发病率较高，但死亡率较低。然而病毒变异产生的强毒株可以引起严重的急性致死全身性疾病（virulent systemic disease，VSD）及出血热样疾病的暴发，致使猫死亡率增加。

目前猫传染性鼻-结膜炎尚没有特效的治疗方法，疫苗免疫接种是防制该病的主要措施。传统疫苗在病毒防制过程中起到重要的作用，但是这些疫苗只能减少临床发病率和病毒的排出，可能无法防止感染。随着分子生物学、基因工程技术的发展，新型疫苗的研究也不断被尝试。本文对国内外有关该病疫苗的研究进展综述如下。

1 传统疫苗

1.1 灭活疫苗 该类疫苗优点是安全性好，能够减少由FCV 引起的临床症状，缺点是不能诱导有效的黏膜免疫和细胞免疫应答，因而无法有效抑制呼吸道中FCV 的复制。此外，接种部位有时会形成纤维肉瘤，以氢氧化铝佐剂疫苗较为严重。

De man marc 等首次报道注射猫细小病毒（feline panleukopenia virus，FPLV）、疱疹病毒（feline herpesvirus，FHV）和FCV 灭活疫苗后在猫双侧胸部产生纤维肉瘤的案例[1]。Jas 等将由改性的FPLV、FHV，灭活的FCV 制备成的非佐剂重组疫苗RCPCh-FeLV 接种8～9周SPF猫，结果显示，接种疫苗一周后，经FHV和FCV 攻毒，免疫猫的临床表现显著低于对照组，FPV、FHV和FCV排出量显著减少，证实接种疫苗的第7 天开始产生免疫应答[2]。

由于中和性表位大部分位于衣壳蛋白高变区，用单价FCV 疫苗不能完全预防FCV 感染。因此，为提高交叉中和反应，多价疫苗成为FCV 疫苗新的研究方向。Poulet 研究证实了不同毒株具有交叉保护作用，随后以具有交叉保护作用的FCV 株（FCV431 和FCVG1）制成了非佐剂灭活二价疫苗（PUREVAX RCPCh-FeLV），疫苗对异源株产生的免疫保护作用与体外交叉中和反应有关，同时也说明交叉中和试验可以用于选择FCV 疫苗株，同样适用于引起VSD 的高致病毒株[3]。Masubuchi 等研发了一种三价灭活疫苗Kyoto Biken Feline-CPR，其中包含的3 个FCV 株的免疫和基因特性差异较大，经攻毒试验显示，该疫苗更有潜力应对蔓延整个日本的FCV 的抗原多样性[4]。

1.2 减毒活疫苗 该类疫苗能较好地刺激机体产生保护性免疫，但存在毒力返祖问题。有证据表明，活疫苗病毒在某些情况可能引起临床症状，甚至引起流行感染。

Radford 等将疫苗失败获得的分离株的序列归为两类：大多数疫苗失败获得的分离株与疫苗株序列存在21.33%～38.00% 的差异，而在某些情况下仅产生0%～5.33% 的变异，说明分离株可能来源于疫苗。此外，与来自同一个疾病暴发的分离株密切相关，仅产生0%～1.33% 的变异，而与流行病学无关的分离株存在20.67%～38.00%的差异[5]。Hohdatsu 等认为商业的FCV 疫苗A、B、C和D 产生的免疫血清相对能较好地中和FCV 试验株：F4，F9，FCV-255。而对野毒株的中和效果不理想。说明疫苗株和日本流行的FCV 株之间中和抗原差异显著，需要改进FCV 疫苗[6]。Porter研究表明，两个FCV 疫苗株（FCV-F9 和FCV-255）仍然存在广泛的交叉反应，F9 抗血清中和87.5%，FCV-255 抗 血 清 中 和75%[7]。Kanellos 等 将 猫 抗FHV、FCV 和FPLV 的冻干三价改性减毒活疫苗溶解在液体重组的亚单位猫白血病病毒（feline leukemia virus，FeLV）（p45 包膜蛋白）中，结果显示，混合两个疫苗对安全和效果都没有产生不利的影响[8]。Huang 研究发现，双株FCV 疫苗（FCV 和VS-FCV）比单一毒株疫苗能刺激产生更广泛的交叉中和抗体，并且能够使免疫猫当面临一个伴随致死性系统疾病的同源FCV 株感染时临床症状减轻[9]。Lappin 将SPF 猫接种灭活或减毒活FVRCP（2 个改性的活的FVR、FCV、FeLV）疫苗后，两个FVRCP 疫苗对FCV 血清反应率间没有数据上的差别[10]。

还有学者对该类疫苗接种部位、接种时间及非特异保护作用进行研究。Lappin 等将SPF 猫接种FVRCP 疫苗，鼻内接种与注射接种FVRCP 疫苗的猫比较，FCV 攻毒后，更有可能在1 d 和14 d 对血清转化（疫苗产生抗体）[11]。Wilson 等研究发现，同时在猫不同部位注射佐剂疫苗FeLV 和猫多价疫苗或单次注射二者的混合疫苗后，能对FeLV，FCV，FHV，FPV强毒攻击产生相同的保护效果。两种注射方式在临床评分或低水平持续抗原血症上与对照组相比差异显著[12]。Schultz 等研究发现，在16 周或以上接种单剂量的改性活病毒猫核心疫苗（抗FPLV，FCV和FHV）可以提供高比例动物的长期免疫力，同时也能增加群体免疫[13]。Bradley 等研究发现，鼻内接种减毒活FHV-1 疫苗和FCV 疫苗的猫能减少由实验室感染的支气管败血波氏杆菌引起的临床症状，这个非特异性免疫有利于抵抗疫苗不可用的感染并在疫苗引起体液免疫之前起到保护作用[14]。

2 新型疫苗

2.1 亚单位疫苗 此类疫苗以生物化学和物理方法从病毒培养物中提取、纯化有特异性的抗原而制成。FCV 的结构蛋白主要由VP1、VP2 组成，其中衣壳蛋白VP1 是诱导机体产生免疫反应的主要结构蛋白，由于它只含有病原体的一部分，不会导致动物发病。

Komolafe 等报道了FCV 亚单位疫苗，该疫苗来自于与整个FCV 抗原相似的亚单位组成。当致命毒株攻毒时疫苗对猫有保护作用，而对照组则出现了FCV 引起的典型临床和病理症状[15]。

2.2 活病毒载体疫苗 此类疫苗是将外源基因插入到某些病毒载体基因组内，使之高效表达但不影响该疫苗株的正常生存与繁殖。

Yokoyama 等将编码FCV-F4 株衣壳蛋白整个开放阅读框的基因插入到FHV-1 的胸苷激酶缺陷突变株（c7301dltk）的缺失位点（SmaI site）。重组病毒设计成C7301dlTK-Cap。通过眼内、鼻腔和口腔途径接种猫开展体内试验，免疫猫在很大程度上能抵抗亲本FCV F4 株和FHV1 C7301 株的致命感染。随后又构造了进一步改进的重组FHV-1（dlTK（gCp）-Cap），它在C7301dlTK-Cap FCV 前体衣壳蛋白基因上游带有一个假定的FHV-1 gC 启动子序列。通过试验证实dlTK（gCp）-Cap 的FCV免疫原性抗原高表达，经致死性的FCV 攻毒，显示含有dlTK（gCp）-Cap的疫苗比含有C7301dITK-Cap 的疫苗更有效[16]。Mccabe 等在构建了表达FCVF9 株衣壳基因的减毒重组黏液瘤病毒之后，将FCV F9、LS015 的衣壳蛋白基因分别插入到黏液瘤生长因子（MGF）位点、丝氨酸蛋白酶抑制剂（SERP 2）基因位点，生产了一个表达FCVF9 和LS015 衣壳蛋白基因的二价黏液瘤重组体。免疫猫能够对F9 株和LS015 株产生高水平的血清中和抗体。目前还没有证据证明黏液瘤-FCV重组病毒从免疫的猫到未免疫的猫之间传播，这种嵌合疫苗可能对广泛的FCV 株产生有效的保护作用[17]。

2.3 核酸疫苗 此类疫苗是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组质粒DNA 直接注射到动物体内，通过外源基因在体内表达产生的抗原激活机体的免疫系统，进而引发免疫反应。DNA 疫苗不包含活病毒或人工佐剂，具有潜在的广泛用途。

Sommerville 等将猫接种包含FCV-F9 株成熟衣壳蛋白的质粒（pF9VAC），利用异源FCV LS027株进行攻毒试验，虽然全部猫都出现临床症状，但是疫苗组的直肠温度和一般的临床症状评分都显著低于对照组，并且在溃疡分布上也存在显著的差异。虽然两组在感染初期都没有检测到血清学反应，但是在感染后期疫苗组滴度普遍高于对照组。结果显示，DNA 疫苗对FCV 感染起到部分保护作用[18]。

2.4 病毒样颗粒疫苗 FCV 成熟的衣壳蛋白能够自我组装成空衣壳即病毒样粒子（VLPs），形态和抗原与天然毒株相似，包含一个分子量约为60 kDa 的衣壳蛋白，它不具有感染性。新的基于VLPs 免疫原性的免疫策略能够提供改进抗FCV感染的安全性。

Martino 等发现，利用杆状病毒表达系统生成的FCV 衣壳蛋白产生的VLPs 能够与FCV 抗血清反应。VLPs 免疫家兔，能引起对临床样本中分离到的一些FCV 株的中和抗体。说明利用杆状病毒表达系统生成的FCV 衣壳蛋白可能作为一个安全有效的抗FCV 的重组疫苗，该重组疫苗有助于描述VLPs 在抗原不同FCV 感染的效果，FCVVLP 被看作是抗FCV 感染的候选疫苗[19]。

3 结语

由于FCV 的变异和相关致死性疾病的发生，现在的疫苗很多都失去了效力，免疫失败的案例时有发生，迫切地需要制备新型有效的疫苗。随着反向遗传操作技术的发展，应用RNA 病毒反向遗传系统可以重现病毒的生活周期和感染模式，对阐明病毒的起源、致病机制和免疫交叉保护提供一种切实可行的方法。我们课题组正致力于利用反向遗传操作技术，制备一种新型疫苗，进而减少由FCV 引起的致死性疾病的发生。

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