沙琨

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS),隶属克隆性造血干细胞疾病范畴,共分为五种类型。由于MDS预后极差,目前以改变自然病程和改善生存质量为主,因此,对其机制的研究尤为重要,引起广大学者的关注。相关文献报道[1],骨髓细胞凋亡过度与MDS的病情演变、无效造血密切相关。关于MDS的机制尚未明确,众多学者把细胞因子作为与MDS机制相关研究的重点；Rosenfeld 等[2]的研究表明,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在MDS无效造血机制占主导地位,发挥着决定性作用。本研究旨在进一步观察骨髓增生异常综合征各型骨髓细胞凋亡与TNF-α的联系,为临床治疗MDS提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 此次研究和治疗的21例研究对象均为本院确诊为MDS的患者,其中男12例,女9例,年龄20～70岁,其中RCUD型3例、RA型4例、RN型2例、RT型1例、RARS型2例、RCMD型2例、RAEB-1型1例、RAEB-2型3例、MDS-U型2例、MDS伴单纯5q-综合征型1例。对照组选取5例其他科室非血液系统疾病患者的骨髓,男3例 ,女 2例 ,年龄 30～70岁。

1.2 研究方法 采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法对两组骨髓进行分离,将分离出的单个核细胞进行细胞培养4 h之后,再2000 r/min离心10 min并收集上清液,保存备用。

1.3 观察指标 将细胞涂片染色,镜下计数凋亡细胞(每个样本至少计数2000个有核细胞),并按以下公式计算细胞凋亡指数：细胞凋亡指数=凋亡细胞个数/2000×100%；采用ELISA法,对两组收集制备的上清液进行试验,测定TNF-α的含量。

1.4 统计学方法 所有研究数据均应用SPSS17.0统计软件进行统计和分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验,组间比较行单因素方差分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

与对照组相比观察组在MDS各型的骨髓细胞凋亡指数均有所提高,差异有统计学意义(P＜0.05)。且不同的类型间的凋亡指数有较大的差异。随着病情的发展趋势,凋亡指数呈下降趋势；观察组MDS各型的TNF-α含量方面均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而TNF-α含量亦有下降趋势。见表1。

表1 骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与TNF-α关系

3 讨论

细胞凋亡是由于某些内源性或是外源性因素引发的,激活内源性核酸内切酶,将DNA于核小体间发生断裂,形成180～200 bp或成倍数的DNA片段。而细胞增殖和凋亡在生理过程中存在着动态平衡,过多的细胞凋亡必然会打破机体的平衡状态,因机体的平衡状态被破坏而引起疾病。

骨髓基质细胞可分泌多种细胞因子,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用较为重要的一种,其对造血细胞刺激增殖和诱导凋亡的双重作用。TNF-α特异地分布在凋亡细胞周围,可通过上调Fas和Fas L并下调Fas的负性调节剂Fap-1而诱导凋亡。其与MDS骨髓细胞凋亡可能存在这样的关系：①患者体内的高水平TNF-α、TGF-β及低水平的GM-CSF导致MDS骨髓细胞的凋亡；②MDS患者体内高浓度的TNF-α导致骨髓CD34+细胞内产生氧自由基,进而造成DNA和蛋白损伤,诱导细胞凋亡。

本研究首先通过形态学方法检测MDS骨髓细胞凋亡情况,其中以胞质胞核浓缩,核碎裂进而衍生的凋亡小体为晚期凋亡的形态学特征。结果表明MDS各型比对照组凋亡指数均有所提高(P＜0.05),并且随着疾病发展,凋亡指数有下降趋势,说明MDS早期骨髓细胞凋亡程度较为严重,与李大启等[3]研究结果一致。通过本研究对MDS不同亚型的分析可知,早期MDS患者的细胞凋亡程度明显多于晚期患者；从MDS演变成白血病的过程中,凋亡细胞亦明显减少。因此,在病情的发展过程中,细胞凋亡逐渐减少,呈下降趋势,可由此得出这样的结论：进展期MDS的异常克隆逃逸凋亡,逐渐获得生存优势。其次,有相关研究[4]表明,有关TNF-α含量升高的作用机制,几乎全部的MDS患者调控TNF-α的mRNA表达情况均明显提高。最后,在MDS的早期阶段存在过度凋亡现象,但在MDS的进展期未见此现象,TNF-α与凋亡的发生有关。

本研究通过对有限的患者研究,MDS呈现骨髓细胞过度凋亡状态,且早期更加明显,与TNF-α有正相关联系。由于在MDS的早期发展阶段,存在着细胞的过度凋亡,而在病情的发展过程中,并没有此类现象,因此临床在治疗MDS过程中应根据患者的具体病情来制定治疗方案,尤其是是否采用凋亡疗法,可以在早期试用抗凋亡的治疗方案,在晚期则用促凋亡的治疗法案,更好的治疗患者。

[1]Parker JE,Mufti GJ.Ineffective haemopoiesis and apoptosis in myelodysplastic syndromes.Br J Haematol,1998(101): 220-230.

[2]Rosenfeld C,List A.A hypothesis f or the pathogenesis of myelodysplastic syndromes: implications for new therapies.Leukemia,2000(14): 2-8.

[3]李大启,林果为.骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子TNF-α的研究.上海医学,2001,24(5): 274-277.

[4]Gersuk GM,Beckham C,Loken MR,et al .A role for tumor necrosis factor α,Fas and Fas Ligand in marrow failure associated with myelodysplastic syndrome.Br J Haematol,1998(103): 176-188.