苯海拉明软膏微生物限度检查方法的验证

2014-08-14余晓霞朱桦区杰彬

中国实用医药 2014年23期

余晓霞朱桦区杰彬

苯海拉明软膏为中山大学孙逸仙纪念医院的外用制剂,其主要成分为盐酸苯海拉明和黄凡士林,具有抗过敏、止痒、消炎、消肿作用。2013年广东省食品药品监督管理局对医院制剂提出了标准提高的要求。现根据《中国药典》2010年版[1],对苯海拉明软膏微生物限度检查方法进行验证,以保证测定结果的可靠性。

1 仪器与材料

1.1 仪器 HTY-2000B集菌仪(杭州泰林医疗器械厂)、NS01-75D1薄膜过滤器(北京牛牛基因技术有限公司,批号20121223)、超净工作台(苏净集团安泰公司)、303A-1生化培养箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)、SPX-100B生化培养箱(上海悦丰仪器表有限公司)。

1.2 试药营养琼脂培养基(批号：121220),玫瑰红钠琼脂培养基(批号：130108),营养肉汤培养基(批号：121214),改良马丁培养基(批号：130109),改良马丁琼脂培养基(批号：130109),胆盐乳糖培养基(批号：120309),溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基(批号：130215),甘露醇氯化钠琼脂培养基(批号：130520)(以上均来源于北京三药科技开发公司)。苯海拉明软膏(中山大学孙逸仙纪念医院,批号：201309118,201301111,201401118；规格：30 g)。

1.3 菌种大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC(B)44 102],金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003],枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) [CMCC(B)63 501],白色念珠菌(Candida albicans) [CMCC(F)98 001],黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F)98 003],铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104](以上菌种的冻干菌均购自中国食品药品生物检定研究院)。

2 方法与结果

2.1 菌液制备

2.1.1 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌取新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中,置30～35℃培养18～24 h；培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数为50～l00 cfu/ml的菌悬液。

2.1.2 白色念珠菌取新鲜培养物接种至改良马丁培养基中,置23～28℃培养24～48 h；培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数为50～100 cfu/ml的菌悬液。

2.1.3 黑曲霉取新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中,置23～28℃培养 5～7 d,加入3～5 ml含 0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成含孢子数50～100 cfu/ml的孢子悬液。

2.2 供试液制备取供试品10 g、十四烷酸异丙酯20 ml至含无菌玻璃珠的锥形瓶中,置45℃水浴中,充分振摇,使供试品溶解,再加入45℃ pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml,振摇5～10 min,置45℃水浴保温、静置使分层,取下层作为1：10的供试液。

2.3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证

2.3.1 试验组各取1：10供试液、试验菌液1 ml,注入同一平皿中,立即倾注相应琼脂培养基,待凝结后,培养,每株试验菌平行制备2个平皿,测定试验组的平均菌落数。

2.3.2 菌液组取试验菌液1 ml,注入平皿中,立即倾注相应琼脂培养基,待凝结后,培养,每株试验菌平行制备2个平皿,测定菌液组的平均菌落数。

2.3.3 供试品对照组各取1：10供试液1 ml,注入平皿中,立即倾注相应琼脂培养基,待凝结后,培养,测定供试品对照组的平均菌落数。

2.3.4 回收率计算各菌株回收率(%)=(试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)/菌液组的平均菌落数×100%。结果见表1(回收率应不低于70%)。

由表1可知,用1 ml/皿供试液时,各菌株的回收率均可达到70%以上,且3次均能重现试验结果,因此本品的细菌、霉菌及酵母菌计数可用平皿法检查(即1 ml/皿)。

2.4 控制菌检查方法的验证本品为局部给药制剂,根据《中国药典》2010年版,控制菌应检铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。

2.4.1 铜绿假单胞菌检查法的验证分别取1：10供试液10 ml、铜绿假单胞菌菌悬液1 ml,加至胆盐乳糖培养基100 ml中,按铜绿假单胞菌检查法进行验证。结果见表2。