辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能的试验研究

2014-03-14袁根良蒋丽殷光玲黄远英

食品研究与开发 2014年8期

关键词：辅酶软胶囊阴性

袁根良，蒋丽，殷光玲，黄远英

（汤臣倍健股份有限公司，广东广州510663）

辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能的试验研究

袁根良，蒋丽，殷光玲，黄远英

（汤臣倍健股份有限公司，广东广州510663）

分别以33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（相当于人体推荐用量5、10、20倍）剂量的辅酶Q10软胶囊给小鼠连续灌胃30 d，分别测定ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化功能、小鼠的迟发型变态反应、小鼠抗体生成和溶血素水平、单核-巨噬细胞碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力以及NK细胞活性。结果显示辅酶Q10软胶囊能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化作用，促进小鼠的抗体生成细胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促进小鼠的迟发型变态反应及其单核-巨噬细胞的吞噬功能，因此，可判定辅酶Q10软胶囊具有增强小鼠免疫力的作用。

辅酶Q10；软胶囊；增强免疫力；小鼠

辅酶Q10是脂溶性醌类化合物，广泛存在于酵母、植物叶子、种子以及动物的心脏、肝脏和肾脏中[1]。在人体中以组织器官中浓度较高，如肝、心、肾、胰脏等，其总含量为0.5 g～1.5 g。辅酶Q10作为生物体内细胞产生能量的重要酶以及重要代谢反应的底物和作为细胞代谢激活剂，辅酶Q10具有预防和治疗各种类型心血管疾病，改善小儿心肌炎及心脏功能，抗氧化功能，提高精力和脑力，保护牙龈健康，协助治疗癌症等多种生理功能[2-5]。目前，辅酶Q10作为一种新型的具重大医学价值的生化药物或开发作为保健食品的良好材料。近年来，有学者观察到，辅酶Q10对于恶性肿瘤、AIDS和溃疡患者的症状均有一定的改善作用，于是提出辅酶Q10还具有增强免疫力的作用[6-7]。本文对辅酶Q10软胶囊进行增强免疫力功能试验研究，同时参照规定《保健食品检验与评价技术规范》[8]进行试验，初步研究辅酶Q10软胶囊增强免疫力的功效，为辅酶Q10在增强免疫力保健食品类的开发提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 样品

辅酶Q10软胶囊，规格400mg/粒。人口服推荐量为每人每日1次，每次1粒，成人体重按60 kg计算，折合剂量为6.7mg/kg。

1.2 实验动物与分组

SPF级健康昆明种雄性小鼠240只，体重为18 g～22 g：由广西医科大学医学实验动物中心提供（SCXK（桂）2009-0002）。每40只小鼠为1组，共6组。免疫Ⅰ组，进行ConA诱导鼠脾淋巴细胞转化实验；免疫Ⅱ组，进行迟发型变态反应实验；免疫Ⅲ组，进行体比值测定，血清溶血素测定和抗体生成细胞数测定；免疫Ⅳ-Ⅵ组，分别进行碳实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和NK细胞活性测定。

1.3 主要仪器与试剂

二氧化碳培养箱：日本三洋；紫外可见分光光度计：岛津有限公司；酶标仪：美国宝特；等。

绵羊红细胞（SRBC）、Hankˊs液（pH 7.2-7.4）、RPMI1640培养液、小牛血清、ConA、吩嗦二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I等。

1.4 剂量选择与受试物给予方式

根据人口服推荐用量，设样品低、中、高剂量组分别33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍），设一个阴性对照组，每组10只动物。分别称取Q10软胶囊内容物0.34，0.67，1.34 g各加玉米胚芽油至200mL，混匀、配成1.675、3.350、6.700mg/mL浓度溶液，按2mL/10BW的体积给予相应剂量组动物灌胃，阴性对照组予以等体积的玉米胚芽油，每天灌胃一次，连续灌胃30 d。

1.5 实验方法

1.5.1 脏器/体重比值测定

称重后处死小鼠，取出胸腺和脾脏，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

1.5.2 其他免疫指标的测定

根据《保健食品检验与评价技术规范》-2003免疫功能检测的程序，分别测定下列各项免疫指标：ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验（MTT法）、二硝基氟苯诱导的小鼠DTH实验（耳肿胀法）、抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）、血清溶血素的测定（血凝法）、小鼠碳廓清实验、NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶测定法）。

1.6 实验数据统计

应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。

1.7 结果判定

根据《保健食品检验与评价技术规范》增强免疫力功效的判定标准，在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。

2 试验结果

2.1 辅酶Q10软胶囊对小鼠体重的影响

不同剂量辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能试验对小鼠体重的影响，结果见表1和表2。

表1 不同剂量辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能试验对小鼠（免疫Ⅰ组）体重的影响（±s）Table1 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

（mg/kg·BW）动物数初始体重/g剂量组/中期体重/g末期体重/g增重/g 134.0 10 20.1±1.3 30.9±1.0 43.1±1.6 23.0±2.0 67.0 10 19.7±1.2 30.0±0.8 40.7±1.7 21.1±2.5 33.5 10 20.2±1.3 32.0±1.0 42.8±1.8 22.5±2.6阴性对照10 19.9±1.2 31.0±1.1 41.9±1.8 22.0±2.2

表2 不同剂量辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能试验对小鼠（免疫Ⅱ组）体重的影响（±s）Table2 Enhance immunity function test effect on body weight in mice of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule（±s）

（mg/kg·BW）动物数初始体重/g剂量组/中期体重/g末期体重/g增重/g 134.0 10 20.2±1.3 29.9±1.3 40.8±1.6 20.6±1.4 67.0 10 19.9±1.1 30.5±1.2 41.5±1.7 21.6±1.4 33.5 10 19.7±1.3 32.1±1.2 43.5±1.8 23.8±2.0阴性对照10 20.3±1.1 31.2±1.2 42.5±1.9 22.2±2.0

由表1和表2可见，不同免疫组的实验初期、实验中期、实验末期样品各剂量组的小鼠体重及实验期间小鼠的体重增长与阴性对照组间的比较，差异均无显著性（P＞0.05），表明该样品对小鼠的体重增长无明显影响。2.2辅酶Q10软胶囊对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

不同剂量的辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能试验小鼠的免疫器官脏器/体重比值，结果见表3。

表3 不同剂量辅酶Q10软胶囊增强免疫力功能试验小鼠的免疫器官脏器/体重比值（±s）Table3 Enhance immunity function test mice immune organ viscera weight/body weight ratio of different doses of Coenzyme Q10 soft capsule

剂量组/（mg/kg·BW）动物数胸腺/体重/%P值脾脏/体重/%P值134.0 10 0.208±0.016 0.340 0.392±0.049 0.892 67.0 10 0.214±0.019 0.884 0.393±0.023 0.897 33.5 10 0.215±0.013 0.952 0.406±0.050 0.998阴性对照10 0.218±0.015—0.403±0.039—

由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，小鼠的胸腺/体重及脾脏/体重比值与阴性对照组比较，均无显著性差异（P＞0.05），表明该样品对小鼠的免疫器官重量无明显影响。

2.3 辅酶Q10软胶囊对小鼠的细胞免疫的影响

2.3.1 辅酶Q10软胶囊对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响

不同剂量辅酶Q10软胶囊对小鼠脾淋巴细胞转化实验，结果见表4。

表4 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠脾淋巴细胞转化实验结果（±s）Table4 Mouse spleen lymphocyte transformation test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数淋巴细胞增值能力（OD值）P值134.0 10 0.226±0.136 0.011 67.0 10 0.161±0.074 0.304 33.5 10 0.156±0.099 0.371阴性对照10 0.097±0.039—

从表4可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，各剂量组小鼠的淋巴细胞转化能力均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（P＞0.05），表明该样品具有促进小鼠的淋巴细胞增值、转化能力的作用。

2.3.2 辅酶Q10软胶囊对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响

不同剂量辅酶Q10软胶囊对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响，结果见表5。

表5 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠迟发型变态反应（DTH）实验结果（±s）Table5 Mouse delayed type hypersensitivity（DTH）test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数左右耳片重量差值/mg P值134.0 10 12.13±2.23 0.002 67.0 10 10.05±1.60 0.385 33.5 10 9.61±2.54 0.710阴性对照10 8.83±1.30—

从表5可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，各剂量组于小鼠的左右耳片重量差值均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异具有非常显著性（P＜0.01），表明该样品具有促进小鼠的迟发型变态反应的作用。

2.4 辅酶Q10软胶囊对小鼠的体液免疫的影响

2.4.1 辅酶Q10软胶囊对小鼠的抗体生成细胞数的影响

不同剂量组辅酶Q10软胶囊对小鼠的抗体生成细胞数的影响，结果见表6。

表6 不同剂量辅酶Q10软胶囊的抗体生成细胞检测实验结果（±s）Table6 Detection of antibody-producing cells results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数溶血空斑数（1×10/106脾细胞）P值134.0 10 254.0±63.8 0.001 67.0 10 224.0±43.0 0.024 33.5 10 207.0±59.5 0.119阴性对照10 159.0±39.3-

从表6可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，各剂量组小鼠的抗体生成细胞数均高于阴性对照组，其中的高、中剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（分别P＜0.01和P＜0.05），表明该样品具有促进小鼠的抗体生成细胞增殖的作用。

2.4.2 辅酶Q10软胶囊对小鼠血清溶血素的影响

不同剂量组辅酶Q10软胶囊对小鼠血清溶血素的影响，结果见表7。

表7 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠溶血素测定结果（±s）Table7 Hemolysin measurement results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数抗体积数P值134.0 10 206.4±13.9 0.033 67.0 10 193.4±22.8 0.318 33.5 10 192.9±36.7 0.341阴性对照10 176.1±24.3-

从表7可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，各剂量组的小鼠的抗体积数均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明该样品具有提高小鼠的血清溶血素水平的作用。

2.5 辅酶Q10软胶囊对小鼠的单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

2.5.1 辅酶Q10软胶囊对小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清的影响

不同剂量组辅酶Q10软胶囊对小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清的影响，结果见表8。

表8 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠单核-巨噬细胞碳廓清实验结果（±s）Table8 Coenzyme Q10 Mouse monocyte-macrophage carbon clearance test results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数吞噬指数P值134.0 10 8.33±1.22 0.020 67.0 10 7.13±1.35 0.868 33.5 10 7.05±1.30 0.937阴性对照10 6.79±0.90-

从表8可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，各剂量组小鼠的吞噬指数均高于阴性对照组，其中的高剂量组与阴性对照组的差异具有显著性（P＜0.05），表明该样品具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能的作用。

2.5.2 辅酶Q10软胶囊对小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

不同剂量组辅酶Q10软胶囊对小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响，结果见表9。

表9 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果（±s）Table9 Mouse peritoneal macrophage phagocytic results of different doses of coenzyme Q10 soft capsule（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数吞噬率/ %吞噬率数据转换P值吞噬指数P值134.0 10 23.6±3.4 0.506±0.040 0.041 0.46±0.08 0.001 67.0 10 20.9±3.7 0.473±0.046 0.877 0.41±0.07 0.087 33.5 10 21.8±3.0 0.485±0.037 0.443 0.39±0.08 0.208阴性对照10 20.0±2.1 0.463±0.027-0.34±0.05-

从表9可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，样品各剂量组小鼠的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数均高于阴性对照组，其中的高剂量的吞噬率和吞噬指数与阴性对照组的差异具有显著性（分别P＜0.05和P＜0.01），表明该样品具有促进小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能的作用。

2.6 辅酶Q10软胶囊对小鼠的NK细胞活性的影响

不同剂量组辅酶Q10软胶囊对小鼠的NK细胞活性的影响，结果见表10。

表10 不同剂量辅酶Q10软胶囊的小鼠NK细胞活性测定结果（±s）Table10 NK cell activity assay results in mice of different doses of coenzyme Q10 soft capsules（±s）

剂量组/（mg/kg·BW）动物数NK细胞活性/%NK细胞活性转换数据P值134.0 10 34.21±8.25 0.622±0.088 0.058 67.0 10 29.69±8.22 0.573±0.090 0.579 33.5 10 28.64±5.34 0.563±0.058 0.761阴性对照10 26.08±7.72 0.533±0.093-

从表10可见，经口给予小鼠不同剂量的辅酶Q10软胶囊30 d，样品各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于阴性对照组，但各剂量组与阴性对照组的差异均无显著性（P＜0.05），表明该样品对小鼠的NK细胞活性无明显的提高作用。

3 结论

1）分别以33.5、67.0、134.0mg/kg·BW（相当于人体推荐用量5、10、20倍）剂量的辅酶Q10软胶囊给小鼠连续灌胃30 d，能促进小鼠的脾淋巴细胞增殖、转化作用，促进小鼠的抗体生成细胞增殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促进小鼠的迟发型变态反应及其单核-巨噬细胞的吞噬功能，对小鼠的体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值及其NK细胞活性无明显影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》，可判定大豆异黄酮复合胶囊具有抗氧化功能作用。

2）本研究观察到，辅酶Q10软胶囊对小鼠免疫功能有明显的增强作用。这与彭亮等[6]研究的结果是一致的，说明辅酶Q10软胶囊是一个很好的具有增强免疫力功能的保健食品。现有研究报道[9]口服辅酶Q10可有效缓解慢性支气管炎与哮喘，口服辅酶Q10患者其淋巴细胞转化率和血清IgG水平较治疗前有不同程度的升高，这与辅酶Q10软胶囊具有增强免疫力功能可能都有关，可作为下一步的研究重点。

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Experimental Study on Effect of Coenzyme Q10 Soft Capsule on the Strengthen Immune Function

YUAN Gen-liang，JIANG Li，YIN Guang-ling，HUANG Yuan-ying
（By-health Co.，Ltd，Guangzhou 510663，Guangdong，China）

Coenzyme Q10 soft capsule were consecutively orally given tomice with the doses of 33.5，67，134mg/kg·bw（5，10，20 times to the recommended human dosage）for30d.The spleen lymphocyte transformation efficiency，delayed type hypersensitivity，antibody-producing，Monocyte-macrophage carbon clearance ability，Peritoneal macrophage phagocytic capacity and the activity of natural killer（NK）were determined.The results showed that Coenzyme Q10 soft capsule can promote the proliferation of mouse spleen lymphocytes and transformation of miceˊS spleen lymphocytes and the proliferation of antibody-producing cells in mice，increased levels of serum hemolysin in mice，promote delayed hypersensitivity and its monocyte-macrophage phagocytosis. Therefore，Coenzyme Q10 soft capsule can be determined in mice with enhanced immunity.

Coenzyme Q10；soft capsule；strengthen immunity；mice

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.08.029

2013-08-05

袁根良（1984—），男（汉），工程师，硕士，研究方向：功能食品。