蔡丽娟，朱丽敏，林启存，许宝青，刘 凯

（浙江省杭州市农业科学研究院，浙江杭州 310024）

2株鳖源致病菌的鉴定及药敏结果差异性的比较

蔡丽娟，朱丽敏，林启存，许宝青，刘 凯

（浙江省杭州市农业科学研究院，浙江杭州 310024）

对分离自温室和外塘发病甲鱼肝脏的2株鳖源致病菌，分别进行细菌鉴定并测定其对19种抗生素的药物敏感性，对比分析药敏结果的差异。经鉴定，2株菌均为嗜水气单胞菌，且均存在一定程度的耐药性，其中分离自温室甲鱼的嗜水气单胞菌耐药状况相对较严重。

鳖源；致病菌；嗜水气单胞菌；鉴定；药敏

鳖（Pelodiscus sinensis）俗称甲鱼、水鱼、团鱼等，卵生爬行动物，水陆两栖生活，因鳖肉味鲜美、营养丰富，深受消费者喜爱。近几年来随着集约化养殖的发展，养殖环境恶化程度加剧，病原滋生，疾病已成为制约甲鱼产业发展的瓶颈。其中原发性和继发性细菌性疾病占据了很大的比重，主要有腐皮病、穿孔病、疥疮病、白点病、红脖子病、出血性败血症等，死亡率均很高，给养鳖业造成了巨大的损失。

面对致病菌的肆虐，抗生素是最强有力的武器，但由于抗生素长期无度使用已导致了一定比例耐药菌的出现，给养殖用药造成很大的困扰。试验中2株菌株A1、A2分别分离自本地区有明显出血性败血症症状的温室鳖和外塘鳖，用VⅠTEK-32对其进行鉴定，并用纸片法［1］分别测定其对19种抗生素的药敏结果，对比2株致病菌的药敏结果差异。现将有关结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

主要耗材。血平板，GNⅠ+鉴定卡，MH培养基均购自法国梅里埃生物公司。

试验菌株。2株试验菌株A1、A2分别分离自本地区发病的温室甲鱼和外塘甲鱼。发病症状，病鳖肝脏有明显出血点，肠道无食且内壁明显充血，发病后死亡率很高。取病鳖肝脏组织，用无菌方式在血平板上分离出溶血严重的优势菌群，经动物回归后确诊为该鳖病的致病菌，用30%甘油制成菌悬液置于冰箱-70℃超低温冷冻保种。

药敏纸片。恩诺沙星（ENR，5µg·片-1）、氟哌酸（NOR，10µg·片-1）、庆大霉素（GEN，10µg·片-1）、四环素（LET，3µg·片-1）、丁胺卡那（AMⅠ，30µg·片-1）、强力霉素（DOX，30µg·片-1）、复方新诺明（COS，23.75/1.225 µg·片-1）、青霉素（P，10µg·片-1）、链霉素（SM，10µg·片-1）、利福平（RⅠF，5µg·片-1）、头孢唑啉（CZO，30µg·片-1）、萘啶酸（NAL，30µg·片-1）、氨苄青/舒巴坦（SAM，10/10µg·片-1）、头孢呋辛（CEP，30µg·片-1）、头孢他啶（FOR，30µg·片-1）、左氟沙星（LEV，5µg·片-1）、克林霉素（CM，2µg·片-1）、妥布霉素（TOB，10µg·片-1）、氯霉素（CL，30µg·片-1）购自杭州微生物试剂有限公司。

主要仪器。VⅠTEK-32微生物鉴定系统，NU-6382E超低温冰箱，恒温恒湿培养箱。

1.2 方法

细菌鉴定。2株鳖源致病菌A1，A2分别采用生物梅里埃的VⅠTEK-32全自动化微生物鉴定系统进行鉴定。

K-B纸片法药敏试验。将致病菌A1，A2经过24 h培养后，用无菌生理盐水配置成浓度为0.5个麦氏的菌悬液，用无菌棉拭子均匀涂抹至MH培养基上，按序贴上所需药敏纸片，置30℃培养箱内培养24 h，观察并测量抑菌圈直径，并对结果进行判定。

2 结果与分析

2.1 VⅠTEK32鉴定

A1，A2 2株鳖源致病菌的VⅠTEK32鉴定生化反应结果如表1。

VP试验、GAS试验均阳性，VⅠTEK32鉴定结果显示A1，A2 2株鳖源致病菌均为嗜水气单胞菌。

2.2 药物敏感性

经KB纸片法药敏试验，用游标卡尺测量药敏圈直径，具体结果如表2。

表1 2株鳖源致病菌A1，A2 VⅠTEK32鉴定结果

表2 2株鳖源致病菌A1，A2对19种抗生素的药敏结果

表3显示，同为鳖源嗜水气单胞菌的2株菌A1和A2对19种抗生素的耐药百分比存在较大的差异，A2耐药率为36.8%，A1的耐药率为63.2%明显高于A2。

表3 2株鳖源致病菌A1，A2的耐药率

3 小结与讨论

鳖源致病菌A1，A2经鉴定均为嗜水气单胞菌。嗜水气单胞菌属气单胞菌科气单胞菌属，为条件致病菌，广泛存在于池塘及土壤中。当放养密度、水温、水质等环境不适宜于养殖动物时，通常可致养殖动物感染嗜水气单胞菌，从而发病［2］。因此在养殖过程中须严格控制好养殖密度与水质，这对预防嗜水气单胞菌感染具有积极的作用。

试验表明，不管来自温室甲鱼还是外塘甲鱼的嗜水气单胞菌均存在一定的耐药性率，其中来自温室甲鱼的耐药情况更为严重，这与温室甲鱼较外塘甲鱼更易发病，抗生素使用更为频繁有一定关系，一般情况下用药背景复杂的养殖环境更容易产生耐药菌［3］。

鉴于甲鱼养殖业尤其温室甲鱼出现耐药菌的概率较高，经验用药已不再有效，建议当养殖场出现爆发性疾病的时候，养殖场工作人员最好持发病甲鱼就近求助于基层水产技术站或水产科研机构，进行确诊，并借助药敏检测技术选择合适的抗生素。

［1］ 张卓然，夏梦岩，倪语星.微生物耐药的基础与临床［M］.北京：人民卫生出版社，2007.

［2］ 王增福，谢红梅，张静.水产动物嗜水气单胞菌病研究进展［J］.水利渔业，2002，22（2）：18-19.

［3］ 蔡丽娟，许宝青，林启存.水产致病性嗜水气单胞菌耐药性比较与分析［J］.水产科学，2011，30（1）：42-45.

（责任编辑：张才德）

TS 254

A

0528-9017（2014）06-0939-02

文献著录格式：蔡丽娟，朱丽敏，林启存，等.2株鳖源致病菌的鉴定及药敏结果差异性的比较［J］.浙江农业科学，2014（6）：939-940.

2014-04-09

杭州市农业科研攻关专项（20130432B12）；浙江省公益技术研究农业项目（2012C22065）作者简介：蔡丽娟（1978-），女，浙江绍兴人，工程师，本科，研究方向为水产病害。