刘安石，钟兰兰，杨 亚，刘进辉

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙410128）

草分枝杆菌属分枝杆菌类的一种非病源性细菌，是抗酸分枝杆菌中的一种。草分枝杆菌对动物机体的体液免疫作用，主要是通过增强Th细胞活性，促使Th细胞分泌B细胞生长因子（BCGF）以及B细胞分化因子（BCDF），从而刺激B细胞进入增殖、分化阶段，最终促进特异性抗体形成［1］。

猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以母猪妊娠后期发生流产、死产和木乃伊胎，新生仔猪死亡率高，各年龄猪（尤其是仔猪）出现异常呼吸为特征的传染性繁殖障碍疾病。临床症状主要表现为母猪发热、厌食、流产或死胎、木乃伊胎，仔猪常出现呼吸道系统症状和高死亡率［2－4］。由于PRRSV 的基因型与血清型众多，毒株间交互免疫力差［5－7］。且猪繁殖与呼吸综合征在流行病学上出现了一些新的特点，危害程度仍呈上升趋势，已成为规模化猪场繁殖障碍的主要疫病之一，给我国养猪业造成巨大经济损失。目前，对该病尚无特效的治疗方法，疫苗免疫仍是其主要防控手段。但鉴于目前市场上猪繁殖与呼吸综合征疫苗种类较多且质量良莠不齐，猪场疫情错综复杂，以及猪群存在严重的免疫抑制等因素，从而使得猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果差异性很大，且常常出现严重的免疫应激和免疫失败。因此，探索解决猪繁殖与呼吸综合征疫苗的免疫问题具有十分重要的临床意义和经济价值。

1 材料与方法

试验材料

1.1.1 试验药物与疫苗 草分枝杆菌（灭活粉剂）：500g/包，湖南某公司生产。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗：JXA1－R株，每头份病毒含量≥105.0TCID50，某疫苗生产厂家生产。

1.1.2 主要仪器设备 猪繁殖与呼吸综合征ELISA抗体检测试剂盒：武汉科前动物生物制品有限责任公司生产。

酶标仪：9602G，北京艾普生物设备有限公司生产。

数控摇床振荡器：DSR－10，江苏康健医疗用品有限公司生产。

1.1.3 试验动物 从湖南某猪场通过IDEXX的ELISA和PCR/RT－PCR两种方法进行血清学检测未感染PRRSV的20头30日龄的健康断奶仔猪。

试验方法

1.2.1 试验分组与设计 将20头试验仔猪随机分为4组，1个对照组和3个试验组，试验组分别为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ，每组5头。对照组正常饲喂，3个试验组分别于饲料中添加0.1%、0.2%和0.5%草分枝杆菌，连续喂料1周后，4个组均肌肉接种猪繁殖与呼吸综合征活疫苗1头份，3个试验组在疫苗免疫后7d内继续饲喂拌有草分枝杆菌的饲料。免疫的前1天和免疫后的第14、21、28天和第35天测其抗体。

1.2.2 动物免疫接种 在试验仔猪耳后颈部外侧肌肉注射高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，免疫剂量为1mL/头。

1.2.3 血清抗体检测 免疫的前1天和免疫后的第14、21、28天和第35天，对所有试验仔猪进行前腔静脉采血5mL，置于离心机中以1 500r/min离心5min，取血清，冷藏保存备用。将分离的血清用猪繁殖与呼吸综合征ELISA抗体检测试剂盒检测抗体的OD630nm值。

1.2.4 数据处理 将试验数据详细的记录整理，并进行统计学分析处理。

2 试验结果与分析

各组试验仔猪的血清抗体OD630nm值检测结果见表1。

由表1可知，试验猪只在免疫前都具有一定量的母源抗体，但OD630nm值很低，起不到任何保护作用，所以此时注射猪繁殖与呼吸综合征活疫苗具有重要意义。

表1 各组试验仔猪的血清抗体OD630nm值检测

从免疫后的第14天、第21天所测得的抗体OD630nm值来看，试验组和对照组猪只的抗体水平在逐步上升，但所有试验猪只的OD630nm值都小于0.38，表明还没有产生具有保护作用的抗体。但从表1中数据可以发现，免疫后的14d内3个试验组与对照组之间的OD630nm值没有明显的差别（P＞0.05）。免疫后的第21天，试验组Ⅱ、试验组Ⅲ相对于试验组Ⅰ和对照组其OD630nm值具有显著差异（P＜0.05）；但试验组Ⅱ、试验组Ⅲ相比之间，试验组Ⅰ和对照组之间差异不显著（P＞0.05）。试验结果表明，在仔猪饲料中添加0.2%以上的草分枝杆菌在猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后的第21天可以起到明显的提高抗体OD630nm值的作用。

从本次试验结果来看，对照组猪只在猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后的第28天，产生有效保护抗体的仔猪比率为40%左右，免疫后35d，产生有效保护抗体的仔猪比率为60%，其他的40%为可疑。而第28天3个试验组的抗体OD630nm值，试验组Ⅰ阳性60%，阴性40%；试验组Ⅱ阳性80%，可疑20%；试验组Ⅲ阳性80%，阴性20%。35d的抗体OD630nm值，试验组Ⅰ阳性80%，可疑20%；试验组Ⅱ和试验组Ⅲ的阳性均为100%。试验结果表明，在仔猪免疫的前后21d于饲料中添加草分枝杆菌均可有效的提高猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的抗体效价，与对照组相比差异极显著（P＜0.01），添加0.2%和0.5%草分枝杆菌比添加0.1%的草分枝杆菌效果更好，且差异显著（P＜0.05）。

3 讨论

灭活的草分枝杆菌主要通过影响免疫应答反应而调节机体免疫功能。草分枝杆菌可以增强Th细胞活性，促使Th细胞分泌B细胞生长因子（BCGF）以及B细胞分化因子（BCDF），从而刺激B细胞进入增殖、分化阶段，最终促进特异性抗体形成。临床药理作用表明，使用本品后血清IgG，IgM滴度增高。持久的介入机体的免疫过程，不断的调节细胞免疫及体液免疫系统［8］。草分枝杆菌能显著增强特异性细胞免疫功能，促进淋巴细胞转化、增殖，促进白细胞介素2（IL－2）、白细胞介素4（IL－4）、肿瘤坏死因子（TNF）、γ－干扰素（IFN－γ）等各种细胞因子的产生还可显著增强NK细胞活性。临床药理试验证明，用药后 T3，T4，T8，T4/T8均有明显增加。草分枝杆菌对巨噬细胞的作用也十分明显，主要表现为草分枝杆菌能刺激T淋巴细胞，使之释放巨噬细胞凝集因子（MAF）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、巨噬细胞趋化因子（MCF）、促有丝分裂因子（MMF）等，对单核－巨噬细胞功能和代谢等各方面都有促进作用，还可以促进单核－巨噬细胞释放大量O2－，这与杀灭病原体及肿瘤细胞有关。草分枝杆菌尚可诱导内皮细胞和单核－巨噬细胞产生CSF，促进骨髓多能干细胞和脾粒细胞及巨噬细胞的前体增殖。从表1可以看出，随着草分枝杆菌在仔猪饲料中添加量的增加，猪群的抗体OD630nm也随之增加。这说明给仔猪喂食拌有草分枝杆菌的饲料后，猪体内的抗体水平有明显升高。通过本次试验可以看出，在猪饲料中添加0.2%以上的草分枝杆菌能够提高猪蓝耳病疫苗免疫的抗体水平，以提高其免疫效果。

［1］ 钟小娅，黄定蒙.草分枝杆菌对尖锐湿疣患者Th1/Th2免疫平衡的调节作用［J］.中国药师杂志，2006，13（4）：19－21.

［2］ 黄骊，郭万柱.猪生殖与呼吸综合征综述［J］.四川畜牧兽医，1999，3：17－18.

［3］ 孙世琪，靳野，郭慧琛，等.我国近期高致病性蓝耳病分子流行病学动态［J］.动物医学进展，2004，25（7）：69－71.

［4］ 王珍芹，曲志娜.猪繁殖与呼吸综合征免疫预防进展［J］.中国动物检疫，2005，22（12）：37.

［5］ 徐引弟，宋念华，张厚芝，等.猪生殖和呼吸系统综合征的血清学调查［J］.中国兽医科技，2003，33（1）：25－27.

［6］ 杨小燕，李晓华，沈绍新，等.猪繁殖与呼吸综合征的血清学调查［J］.中国兽医杂志，2001，37（4）17－22.

［7］ 王君玮，徐天刚，吴延功，等.山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征的血清流行病学调查［J］.畜牧与兽医，2004，3（6）：32－35.

［8］ 程相铎，雍磊，梅海豫.草分枝杆菌注射液辅助治疗支气管哮喘［J］.实用医药杂志，2009，26（2）：132－135.