张治军，张友军，徐宝云，朱国仁，吕要斌，吴青君

(1.浙江省农业科学院 植物保护与微生物研究所，浙江 杭州 310021;2.中国农业科学院 蔬菜花卉研究所，北京 100081)

西花蓟马Frankliniella occidentalis (Pergande)属缨翅目 (Thysanoptera)蓟马科 (Thripidae)害虫，寄主植物多达62 科500 多种［1-2］，是世界范围分布的危险性入侵害虫［3］。我国最早于2003年在北京发现［4］，现已扩散至云南、山东和浙江等14 省市，尤以云南和北京危害最为严重，在全国呈快速蔓延趋势［5-6］。

在西花蓟马爆发期目前仍主要以化学防治为主［5］。由于西花蓟马体型微小，繁殖力强，能进行孤雌生殖，种群增长迅速，田间用药强度大［7］，导致国外西花蓟马对有机氯、有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类杀虫剂产生了不同程度的抗药性［8-11］。筛选不同类型的防治药剂，明确我国西花蓟马对不同类型药剂的抗性风险［12-15］，开展田间西花蓟马抗性监测对于明确不同地区西花蓟马的抗性谱和抗性水平，建立各地区合理的西花蓟马防治和西花蓟马抗性治理措施具有重要意义。

建立一套合理、可靠、省时、省力、快速、简单、易行的生物测定方法是西花蓟马药剂筛选的前提。目前西花蓟马的生物测定方法主要有玻璃残留法［16］、改 进 的Plexiglass cell 法［17］、改 进的Munger cell 法［15］和改进的离心管药膜法(thtips insecticide bioassay system TIBS)［18］。上 述方法的共同点都是药膜法，对于测定触杀类型的药剂行之有效，但是用于测定胃毒或胃毒兼触杀等类型的药剂存在缺陷。本研究在省时、省力的基础上加以改进，添加浸泡药液的小叶盘 (直径5.0 mm，药饵)，称之为叶管药膜法，以此测定不同类型药剂对西花蓟马若虫和成虫的室内毒力，为防治西花蓟马筛选合适药剂。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

供试的西花蓟马，2003年于北京市海淀区中国农业科学院蔬菜研究所生产基地采集成虫，在室内产卵于四季豆豆荚上，孵化出的1 龄若虫、2 龄若虫、预蛹、蛹和成虫都用四季豆饲养于养虫室内。饲养条件:温度 (27 ± 1)℃，相对湿度75% ±5%，光周期16 h∶8 h (光照∶黑暗)。连续饲养30 代以上，期间不接触任何药剂，建立毒力敏感品系。

1.2 供试农药

选用氨基甲酸酯类、有机磷类、拟除虫菊酯类、新烟碱类、抗生素类、吡咯类和沙蚕毒素类7 大类，共11个杀虫剂品种。氨基甲酸酯类有90%灭多威可溶性粉剂 (上海杜邦农化有限公司)、20%丁硫克百威乳油 (苏州富美实植物保护有限公司)，有机磷类为48% 乐斯本乳油 (美国陶氏益农公司)，拟除虫菊酯类为4.5%高效氯氰菊酯乳油 (杭州庆丰农化有限公司)，新烟碱类有25%阿克泰水分散粒剂 (瑞士先正达有限公司)、20%啶虫脒可溶性液剂 (浙江正化股份有限公司)，抗生素类有2.5%菜喜悬浮剂 (美国陶氏益农公司)、0.9% 爱福丁乳油 (北京农业大学新技术开发总公司)、2.2%甲维盐微乳剂 (山东省长清农药厂有限公司)，沙蚕毒素类为18%杀虫双水剂 (海盐博大精细化工有限公司)，吡咯类为10%除尽悬浮剂 (德国巴斯夫股份有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 离心管药膜法与叶管药膜法比较

2种方法均以10% 除尽悬浮剂为测试药剂，设5个浓度处理，即100，50，25，12.5，6.25 mg·L-1，以清水为对照，比较2种方法对西花蓟马2 龄若虫的杀虫效果。

离心管药膜法 (TIBS)。将每个浓度药液分别注满1.5 mL 离心管3只，每只为1 重复，放置4 h。然后倒掉药液，将离心管置于实验台上晾干，待用。将长约10 cm 的细针针尖经酒精灯加热，刺晾干的离心管管底，烫出直径2～3 mm 的孔。然后往离心管管盖内加入10%的糖水作为试虫的食物，并用封口膜封上。真空泵的接口用纱布封好，套在处理好的离心管管口，打开真空泵，调节气流大小，把离心管管底的烫孔对准西花蓟马2 龄若虫，使虫顺气流吸入离心管。先对照后处理，每管吸2龄若虫10～20 头，然后盖好管盖，用封口膜封好烫孔。25℃环境下放置1～4 d。

叶管液膜法。是对TIBS 法的改进，在上述步骤的基础上，以浸药的菜叶取代糖水。将摘来的鲜嫩甘蓝叶洗干净，晾干。分别在每个浓度药液中浸叶1 片，时间10 s。浸过的叶子置实验台上晾干，待用。然后在吸虫之前，用剪刀将晾干的甘蓝叶片剪成3 片2 cm×4 cm 的长方形小条，用小镊子夹入相应药液浓度的离心管中，每管1 片，放置平整，取代10%的糖水作为试虫食物。

1.3.2 西花蓟马若虫、成虫对不同类型药剂的敏感性

以叶管药膜法为生物测定方法分别测定西花蓟马若虫、成虫对11种不同类型药剂的敏感性。

1.4 数据分析方法

应用SAS 软件分析10% 除尽悬浮剂不同处理(不同方法和不同浓度)之间西花蓟马2 龄幼虫死亡率差异显著性 (P ＜0.05;不同方法之间进行t检验，不同浓度之间进行Turkey 氏测验)。应用Probit 机率值分析法，经计算机求出毒力回归方程及LC50、LC95和各自95% 置信限，以及相关系数等相关参数。

2 结果与分析

2.1 西花蓟马生物测定方法

如表1 所示，西花蓟马在10% 除尽悬浮剂不同处理浓度和不同处理方法处理24 h 后，浸管又浸叶的叶管药膜法处理西花蓟马的死亡率，除了对照以外，都明显高于仅浸管时相应处理浓度的死亡率。同时仅浸管时各药剂处理浓度之间的死亡率无差异显著性，而浸管+浸叶的叶管药膜法中西花蓟马的死亡率在不同浓度的药剂处理之间呈现出梯度变化。对照的死亡率与不同方法之间没有明显差别。说明用叶管药膜法比TIBS 法对西花蓟马生物测定效果更好。

表1 西花蓟马在10% 除尽悬浮剂不同处理浓度和不同处理方法下的死亡率

2.2 11种药剂对西花蓟马若虫的毒力

应用叶管药膜法测定11种药剂对西花蓟马敏感品系若虫的毒力，分析建立各种杀虫剂的毒力回归方程，并计算出LC50和LC95致死浓度 (表2)。

表2 11种杀虫剂对西花蓟马若虫的致死剂量

由表2 可知，11种药剂中，对西花蓟马若虫毒力最高的是抗生素类2.5% 菜喜悬浮剂，LC50值为0.11 mg·L-1;2.2%甲维盐微乳剂毒力较高，LC50值为0.68 mg·L-1;其次为48% 乐斯本乳油，其LC50值为1.04 mg·L-1;接下来就是0.9%爱福丁乳油、10%除尽悬浮剂、2.5% 阿克泰水分散粒剂、4.5%高效氯氰菊酯乳油，其LC50分别是4.81，5.02，7.77 和9.63 mg·L-1;20%丁硫克百威乳油、90%灭多威可溶性粉剂和20%啶虫脒可溶性液剂的LC50值分别为44.92，63.73 和92.36 mg·L-1;毒力最差的是18%杀虫双水剂，LC50为212.32 mg·L-1。其中48%乐斯本乳油、2.5%菜喜悬浮剂、0.9%爱福丁乳油、2.2%甲维盐微乳剂、10%除尽悬浮剂、25%阿克泰水分散粒剂、4.5%高效氯氰菊酯乳油7种农药对西花蓟马敏感品系若虫具有显著的生物活性，其效果明显高于供试的其他药剂。

各种药剂对西花蓟马若虫LC95值从小到大依次是2.5% 菜喜悬浮剂、48% 乐斯本乳油、2.2%甲维盐微乳剂、0.9% 爱福丁乳油、10% 除尽悬浮剂、25%阿克泰水分散粒剂、20% 丁硫克百威乳油、90% 灭多威可溶性粉剂、18% 杀虫双水剂、20% 啶虫脒可溶性液剂，分别为0.83，4.85，25.21，38.76，59.73，114.33，212.46，285.86，289.04，323.69 和591.90 mg·L-1，综合LC50和LC95，20%丁硫克百威乳油、90%灭多威可溶性粉剂、18%杀虫双水剂、20%啶虫脒可溶性液是供试药剂中对西花蓟马敏感品系若虫毒力最弱的4种杀虫剂。

2.3 10种药剂对西花蓟马成虫的毒力

从表3 可以看出，24 h 后各药剂对西花蓟马成虫LC50从高到低依次是:2.5%菜喜悬浮剂＞48%乐斯本乳油＞2.2%甲维盐微乳剂＞10%除尽悬浮剂＞0.9%爱福丁乳油丁＞4.5%高效氯氰菊酯乳油＞20%丁硫克百威乳油＞20%啶虫脒可溶性液剂＞18%杀虫双水剂＞90% 灭多威可溶性粉剂。其中2.5%菜喜悬浮剂毒力最好LC50值为0.02 mg·L-1，毒力最差的是90% 灭多威可溶性粉剂，其LC50值为365.03 mg·L-1，是2.5%菜喜悬浮剂的18 250 倍。2.2%甲维盐微乳剂和10%除尽悬浮剂作用没有差异，2.5%菜喜悬浮剂与其他9 药剂间具有明显的差异，同是氨基甲酸酯类的90% 灭多威可溶性粉剂与20% 丁硫克百威乳油间没有明显差异，而48%乐斯本乳油与其他药剂间的毒力具有明显差异。就LC95值而言，毒力最高的依然是2.5%菜喜悬浮剂，其LC95值为0.22 mg·L-1，其次是48%乐斯本乳油，是12.93 mg·L-1，再次是10%除尽悬浮剂﹑2.2%甲维盐微乳剂﹑0.9%爱福丁乳油、4.5%高效氯氰菊酯乳油和20% 丁硫克百威乳油，分别是74.04，77.56，88.40，148.48 和362.95 mg·L-1，最低的是20%啶虫脒可溶性液剂﹑ 90%灭多威可溶性粉剂和18%杀虫双水剂，分别是781.51，2 795.57 和6 107.86 mg·L-1。

表3 10种杀虫剂对西花蓟马成虫的致死剂量

3 小结和讨论

比较分析不同杀虫剂对西花蓟马若虫和成虫的致死剂量，结果表明西花蓟马若虫﹑成虫对不同药剂的敏感性不同。西花蓟马若虫﹑成虫对90% 灭多威可溶性粉剂的敏感性具有明显差异，90%灭多威可溶性粉剂对于西花蓟马若虫的毒杀效果显著高于成虫。48%乐斯本乳油用于防治西花蓟马若虫﹑成虫都有效，对若虫的LC50值是1.04 mg·L-1，成虫LC50值是2.73 mg·L-1，且对若虫的效果明显好于成虫。4.5%高效氯氰菊酯乳油、0.9%爱福丁乳油和2.2%甲维盐微乳剂对西花蓟马若虫﹑成虫效果与48%乐斯本乳油和90%灭多威可溶性粉剂的作用情形相同，对2个虫态都表现出很高毒力效果，且对若虫的毒力明显高于成虫。20%丁硫克百威乳油和20% 啶虫脒可溶性液剂对西花蓟马若虫﹑成虫2个虫态之间没有明显的差别。而2.5%菜喜悬浮剂对西花蓟马成虫和若虫的作用非常独特，对2个虫态都表现出最高的作用效果，对若虫和成虫的LC50值分别为0.11 和0.02 mg·L-1，对成虫的作用显著高于若虫，原因可能是西花蓟马成虫活动性更强、取食量更大，从而接触到的药剂量大于若虫。张安盛等［19］报道的结果与之相反，是若虫更敏感，可能与生物测定方法不同有关，他们采用的是浸虫法，可能若虫的表皮结构比成虫更利于药剂的渗透。

西花蓟马抗药性监测是西花蓟马抗药性治理的必要组成部分，其目的是为了明确西花蓟马的抗性水平、抗性分布情况、抗性变化的时空动态以及建立和评价抗性治理措施的效果。为此，必须具备一套准确而简便、快速的抗性监测技术。本研究在省时、省力、快速、简单、易行的TIBS 基础上加以改进:添加浸泡药液的小叶盘 (直径5.0 mm，药饵)，称之为叶管药膜法。因为西花蓟马的活动性强，应用玻璃残留法、浸虫法、改进的Plexiglass cell 法和改进的Munger cell 法等生物测定方法，挑取试虫难度大，费时、费力。TIBS 用真空泵作为动力源制造细微气流，在挑取试虫时省时、省力。TIBS 应用1.5 mL 离心管作为实验容器，试虫通过接触内壁的药膜而使药剂对其发生作用，这对仅有触杀类型的药剂不失为一种很好的生物测定方法。但是，对于同时具有胃毒或仅有胃毒等其他作用方式的药剂进行效果评价时，很可能低估它们的效果或者根本就不能说明其效果。本研究在TIBS 基础上建立的叶管药膜法，通过浸管和浸叶，附着药膜的叶片作为实验过程中试虫的食料，试虫充分接触到处理药液，因而能更准确有效地评价相关药剂的效果。

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