顾建新 冯军

【摘 要】本文研究了氟化物对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响。试验组Ⅰ和试验组Ⅱ在4-42d分别喂含氟量为300mg/Kg和500mg/Kg的饲料，43-56d喂常规饲料，对照组在整个试验期内喂常规饲料。试验结果表明，在短期内，氟化物能增强鸡新城疫疫苗的免疫效果；在较长时间内，氟化物干扰ND疫苗免疫效果，但不显著。

【关键词】氟化物；鸡；免疫效果；新城疫疫苗

氟中毒主要是由于自然高氟以及在饲料中添加含氟量过高的磷酸氢钙所引起的，近年来后一种因素出现增多的趋势。80年代以后，氟化物对机体免疫系统的影响研究日益引起国内外学者的关注。众多研究资料表明，氟化物对机体体液免疫功能有不同程度的影响[1]。为了弄清楚氟化物对雏鸡免疫功能的影响，从而为提高动物机体抵抗力和进一步研究氟中毒提供科学依据和新途径，特此研究。

1.材料和方法

1.1 饲料和实验动物

1.1.1 饲料

本试验所用饲料按一定配方自行配制。经检测氟含量为64mg/Kg。准确称取氟化钠，溶于离子交换水中，以喷雾方式均匀地混入饲料中，使饲料中氟含量分别为300mg/Kg、500mg/Kg。对照组饲料不添加氟化钠，也喷雾等量的离子交换水。

1.1.2 实验动物

从华南农业大学动物科学系种鸡场购进1d石歧杂黄鸡150只，当天心脏采血8只，测母源抗体效价。试验期为56天。试验前，健康观察三天，4d时称重并随机分为三组，每组50只，即试验组Ⅰ（300mg/Kg）、试验组Ⅱ（500mg/Kg）、对照组。试验组从4-42d分别饲喂上述浓度的饲料，43-56d喂常规饲料，对照组整个试验期内均喂常规饲料。三组于14d和38d接种Lasota鸡新城疫疫苗。

1.2 检测项目和方法

1.2.1 鸡新城疫血清HI抗体滴度的测定

分别于第1、14、21、28、35、42、49、56d各取10只鸡（以后同），心脏或翅下静脉采血，分离血清，采用微量HI试验法于当天测定。

1.2.2 鸡血清球蛋白含量的测定

方法：分别在14、28、42、56d采血，分离血清，用双缩脲比色法和溴甲酚绿比色法分别测得血清总蛋白和清蛋白含量，两者之差即为球蛋白含量。即：

球蛋白含量（g/l）=总蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l）

试剂：

T.P.试剂：广东省人民医院临床检验中心出品。

ALB.试剂：同上。

蛋白标准液：卫生部上海生物制品研究所出品

仪器：法国产UV-VIS2型半自动生化分析仪。

1.2.3 骨氟含量的测定

方法：用氟离子选择电极法14、28、42、56d时测定鸡的股骨氟含量

仪器：

PHS-3C型精密PH计：上海雷磁仪器厂生产。

232C型甘汞电极（参比电极）：江苏泰县水准仪器厂生产。

氟离子选择电极：上海电光器件厂生产。

1.2.4 法氏囊器官指数测定

方法：分别于14、28、42、56d每组各取10只鸡，称重，测定法氏囊重量，求出器官指数。即：器官指数=脏器重（mg）/体重（g）

2.结果与分析

2.1 骨氟含量的测定

从表1中可知，在整个试验期内，二个试验组骨氟含量均比对照组高，且差异极显著（P<0.01）；此外，试验组骨氟含量随饲料中氟含量的升高而升高，呈正相关性；同时，随着实验时间的推移，试验组骨氟含量也相应升高。

由此可见，骨胳中氟含量的高低一方面与饲料中氟含量的高低有关，另一方面也与氟化物作用时间的长短有关。

表1 股骨中氟含量的变化（×103） 单位：mg/Kg

注：① C=对照组 T1=试验组Ⅰ T2=试验组Ⅱ② 同日龄中，*表示试验组与对照组比较，差异极显著； **表示差异极显著

2.2 对鸡新城疫血清HI抗体滴度的影响

从表2可知，在14d测定时，试验组Ⅱ母源抗体滴度高于对照组，且差异显著（P<0.05），14dLasota ND疫苗首免后7d的测定结果也同样如此。此时，试验组Ⅰ母源抗体滴度虽比对照组高，但差异不显著（P>0.05）。

由此可见，氟化物在实验初期促进抗体产生，并与剂量呈正相关性。随时间推移，这种作用越来越不明显。

表2 鸡ND病毒血清HI抗体滴度

注： ① HI抗体滴度：以2为底对数（log2x）② 14d进行Lasota疫苗首免，38日龄时二免③ 同日龄中，*表示试验组与对照组比较，差异显著

2.3 对鸡血清球蛋白含量的影响

从表3可知，在14d、28d测定时，试验组Ⅱ球蛋白含量比对照组升高，且差异极显著（P<0.01）；在42d、56d测定时，试验组Ⅱ虽比对照组高，但差异不显著（P>0.05）。而试验组Ⅰ在整个试验期内，球蛋白含量虽然比对照组高，但差异不显著（P>0.05）。

由此可见，氟化物仅在一定时间内影响球蛋白的生成，而且与剂量呈正相关性。

表3 鸡血清球蛋白含量的变化 单位：g/l

注：

① 总蛋白测定参数：波长--540nm，反应温度--室温，反应时间--10分钟，光程—1.0cm。 清蛋白测定参数：波长--630nm，反应温度--室温，反应时间--5分钟，光程—1.0cm。

② 表中数据为：总蛋白含量（g/l）-清蛋白含量（g/l） ③ 同日龄中， **表示差异极显著

2.4 器官指数测定

法氏囊指数及脾脏指数在整个试验期内均没有明显变化。如表4所示。

表4 器官指数及平均重量的变化

注：

① 表中重量均为器官平均重量（g）② 器官指数单位：mg/g

3.讨论

体液免疫为B淋巴细胞介导（又称抗体介导）的免疫应答反应。

本试验通过对鸡ND病毒HI抗体滴度的测定和血清球蛋白含量的测定为指标来评价氟化物对鸡体液免疫功能的影响。结果表明，在短期内，氟化物使鸡血清ND病毒HI抗体滴度和球蛋白含量显著升高，说明氟化物能促进抗体产生，反映了氟化物在短期内能增强新城疫苗免疫效果。从结果还可发现，在短期内，这种增强作用仅出现在高剂量组（500mg/Kg），说明氟化物对体液免疫功能的影响存在剂量-效应关系。

在实验后阶段测定时发现，血清中ND病毒HI抗体水平和球蛋白含量，高、低剂量组与对照组之间不存在显著差异（P>0.05），表明较长时间内，氟化物对新城疫免疫效果影响不大。

4.小结

（1） 在短期内，氟化物能增强新城疫苗免疫效果，并呈剂量-效应关系。这种增强作用可能是由于氟短时间作用引起机体应激反应所致。

（2）在较长时间内，氟化物对新城疫疫苗免疫效果影响不明显。

参考文献：

[1] 李为，马蔚，戴寿芝，等.1990.地方性氟中毒患者免疫功能、SODI、微量元素和Hb含量的研究.中国实验临床免疫学杂志，2（1）：34～35

[2] Rivas A and Fabricant J.1985.Indication of immunodepression in chicken infected with various strain of Marek，s Disease Virus.Avian Dis，32：1～8

[3] 腾国兴，孙玉富，汤瑞奇，等.1992.燃煤污染型和饮水型氟区人群免疫功能状态的研究.中国地方病防治杂志，7（地方性氟中毒增刊）：12

[4] 宋世震，章孟本.1989.氟化物免疫毒性的实验研究.氟研究通讯，4（1）：38