田汝芳 刘 鹏 厉超飞

山东健康药业有限公司，山东 济南 250022

乳癖宁胶囊由赤芍、柴胡、川芎、当归等10味中药组成，具有活血行气，软坚散结的功效。赤芍为方中君药，所含成分芍药苷为乳癖宁胶囊主要有效成分之一，具有扩张血管、镇静、镇痛、抗炎等功效［1－2］。芍药苷为赤芍中主要有效成分，因此，通过检测制剂中芍药苷的含量来控制赤芍的含量，对确保制剂的疗效有重要意义。为此，用高效液相色谱法对乳癖宁中芍药苷的含量测定方法进行了研究。该法简便、快速、重现性好，可作为该产品质量控制方法。

1 仪器与试药

1220型安捷伦高效液相色谱仪;METTLER电子分析天平;KQ－300B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号:0736－200219);乳癖宁胶囊 (批号:20120613、20120615、20120620)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 m)，流动相:甲醇－0.05 mol/L磷酸二氢钾－1%磷酸溶液(40∶59∶1)，流速:1 ml/min，检测波长:230 nm，柱温:室温，进样量10 L，理论板数按芍药苷峰计不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品12.36 mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀;再精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得 (浓度为49.44g/ml)。

2.3 供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理 (功率250W，频率33kHz)30min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液液的制备 按照处方量，以相同的制剂工艺制备缺少赤芍的阴性对照样品，照2.3供试品溶液的方法制得阴性对照溶液。

2.5 系统适用性考察照2.1项所述色谱条件进行测定。精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 L，分别注入液相色谱仪。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上检出相应的色谱峰，芍药苷色谱峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5;阴性对照在与对照品溶液色谱峰相应的位置上没有相应的色谱峰，不干扰供试品溶液的测定。结果见图1。

2.6 线性关系考察 精密量取芍药苷贮备液 (494.4g/ml)，分别精密量取1、2、3、4、5ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10 L，注入液相色谱仪，照2.1项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以对照品浓度 (Y)为纵坐标，色谱峰峰面积 (X)为横坐标，绘制标准曲线。结果，芍药苷回归方程为:Y=140.46X+101.03，r=0.9996，表明在19.776～98.880 g/mL范围内，芍药苷色谱峰峰面积与对照品浓度有良好的线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10 L，注入液相色谱仪，照2.1项下所述的色谱条件进行测定，连续测定6次，记录色谱峰峰面积并计算相对标准偏差 (RSD)。结果，芍药苷对照品色谱峰峰面积平均值为7169.5，RSD=0.72%，表明仪器的精密度良好。

2.8 重复性试验 取同一批号乳癖宁胶囊样品 (批号20120615)6份，按照2.3项下所述方法制备供试品溶液，照2.1项下所述液相条件测定，计算样品中芍药苷的含量及RSD。结果平均值为3.66 mg/g，RSD为0.57%，表明该方法的重复性良好。

2.9 稳定性试验 取乳癖宁胶囊样品，照2.3项下所述方法制备供试品溶液，照2.1项下所述液相条件测定，分别精密吸取供试品溶液10 L，于0、2、4、6、8小时测定，记录峰面积，并计算RSD。结果，芍药苷峰面积的平均值为5362.8，RSD=1.09%，表明供试品溶液中的芍药苷在8小时内测定的结果稳定。

2.10 回收率试验 取已知芍药苷含量 (3.66mg/g)的样品0.25g，共6份，分别置50ml量瓶中，分别精密加入1.036mg/ml的芍药苷对照品溶液1ml，按2.3项下所述方法制备供试品溶液，并按2.1项下所述色谱条件测定，计算回收率及RSD。结果平均回收率为100.11%，RSD为0.95%，表明该方法能够准确测定样品中的芍药苷含量。结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.11 样品测定 取3批乳癖宁胶囊样品，照2.3项下所述方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液 (芍药苷含量49.44 g/ml)和供试品溶液各10 L，注入液相色谱仪，照2.1项下所述色谱条件测定，记录色谱图，以外标法计算芍药苷含量，见表2。

表2 三批样品含量测定结果 (n=3)

3 讨论

3.1 本品具有活血行气，软坚散结的功效，用于气滞血瘀所致的乳腺增生病。赤芍为方中君药，有效成分芍药苷具有扩张血管、镇静、镇痛、抗炎等作用［1－2］。故选择芍药苷作为本品的含量测定指标，与本品的功能具有较高的相关性。

3.2 预试验考察了不同提取溶剂甲醇与70%乙醇做提取溶剂时芍药苷的含量，比较了不同提取方法超声与回流提取时芍药苷的含量，比较了不同超声时间20min、30min、40min时芍药苷的含量，最终选择用甲醇做提取溶剂，超声提取30min。

3.3 流动相选择中，分别考察了乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－水等系统［3－6］的不同配比，结果表明甲醇－0.05mol·L－1磷酸二氢钾溶液－1%磷酸 (40∶65∶1)为流动相最为理想，此条件下芍药苷与其他成分能够较好的分离，阴性无干扰，且样品处理方法简单，可作为本品质量控制的理想方法。

［1］阮金兰，赵钟祥，曾庄忠，等．赤芍化学成分和药理作用的研究进展［J］．中国药理学通报，2003，19(9):965－970．

［2］杨媛媛，周刚，马晓康，等．赤芍的研究进展［J］．医药导报，2008，27(1):67－69．

［3］梁可文，龙云，施丹．HPLC法测定防芷鼻炎片中芍药苷的含量［J］．中国民族民间医药，2012，21(16):67－68．

［4］林月英，董宪凤．HPLC法测定三九胃泰颗粒中芍药苷的含量［J］．天津药学，2012，24(4):12－13．

［5］李惠珍，罗君，周兰，等．RP－HPLC法测定杜仲补天素片中芍药苷的含量［J］．中国民族民间医药，2011，20(7):45－46．

［6］奚永兰，徐富柱．高效液相色谱法测定乳宁颗粒中芍药苷的含量［J］．中国民族民间医药，2012，21(6):42－43．