郭 哲，史惠蓉

1)南阳市中心医院妇产科 南阳473000 2)郑州大学第一附属医院妇产科 郑州450052

#通讯作者，女，1956年4月生，博士，教授，研究方向:妇科肿瘤，E-mail:huirougshi@yahoo.com.cn

宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一，是发展中国家妇女死亡的第二大原因，目前其发病率和死亡率有增长趋势且有明显年轻化倾向。肿瘤生成依赖血管形成，因此，肿瘤组织内的微血管形态、分布、数量及血液循环状态对于肿瘤的形成、治疗和预后判定有着十分重要的意义。微血管密度(microvessel density，MVD)是目前评估肿瘤血管生成形态学的金标准，且其表达与宫颈癌的预后密切相关［1］。CD13是肿瘤特异性血管标记物，是血管生成的重要调节因子，对处于血管生成过程中的微小血管内皮细胞具有较高的特异性，因此用CD13 标记来检测MVD已成为当今的研究热点［2-3］。作者以CD13 和CD34为标记检测宫颈癌组织中的MVD，探讨CD13 作为肿瘤新生血管标记物的临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2009年6月至2011年8月在南阳市中心医院妇产科住院手术切除的新鲜宫颈癌标本60例。患者年龄38～65(48.5±6.8)岁，术前均未接受辅助放、化疗以及其他抗癌治疗。标本经组织病理学证实，鳞癌45例，腺癌15例; 其中19例有盆腔淋巴结转移。按照国际妇产科协会(FIGO)2009年新的宫颈癌临床分期标准进行分期，Ⅰ期32例，Ⅱ期28例。

1.2 宫颈癌组织中MVD 检测 鼠抗人CD13、CD34 单克隆抗体、SP 免疫组化试剂盒和DAB 显色剂均购自上海信然生物技术有限公司。取存档蜡块，4 μm 厚连续切片，采用免疫组化SP 法检测，按试剂盒操作说明进行。用PBS 缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定 显微镜下观察，CD13 和CD34 均在血管内皮细胞胞质中表达，呈棕黄色染色。由两位副主任医师在镜下进行微血管计数，凡呈现棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞群者，只要与邻近微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织分开，就视为一个微血管。参照Weidner 方法，先在40 倍视野下寻找MVD密集区，然后在高倍镜下计数4 个不同视野的微血管数，取其平均值作为该标本的MVD。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0 处理数据，2组间均数的比较应用两独立样本t 检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 CD13 和CD34 的表达 显微镜下可见CD13主要表达于微血管癌间质内皮细胞的胞质，CD34 在所有血管内皮细胞均着色(图1)。

2.2 CD13、CD34 标记的MVD 与宫颈癌临床病理特征的关系 见表1。

图1 CD13(左)和CD34(右)标记的微血管(×400)

表1 CD13、CD34 标记的MVD 与宫颈癌临床病理特征的关系

续表

3 讨论

CD13 是一种将氨基酸从寡肽N 末端切除的膜结合糖蛋白(氨基肽酶N)，具有锌离子结合依赖性金属蛋白酶活性，可酶解基底膜蛋白，促进血管生成，从而调控肿瘤细胞的侵袭和转移［4］。Kido 等［5］研究发现CD13 在骨肉瘤和黑色素瘤转移过程中起积极作用，认为与CD13 与促进肿瘤细胞附着、降解细胞外基质蛋白有关。Ikeda 等［6］研究发现，CD13表达水平与胰腺癌肿瘤内MVD 呈平行增加关系，提示CD13 与肿瘤的新血管生成密切相关。Inagaki等［7］证实CD13 抑制剂可以抑制肝癌细胞的侵袭和血管生成，在临床治疗中CD13 抑制剂结合放化疗对肝癌的治疗效果好于单纯放化疗［8］。

长期以来，国内外多采用CD34 抗体标记来评价实体肿瘤组织中的MVD，但是CD34 在所有血管内皮细胞均有表达，对肿瘤微血管无特异性。这种对大多数血管内皮细胞具有抗性作用的抗体往往与非增殖性或大血管的内皮细胞反应较好，但在肿瘤组织微血管中表达不稳定，反应特异性较差。该研究结果显示，CD34 标记的MVD 与宫颈癌患者的临床分期、盆腔淋巴结转移及病理分型无关，而Ⅱ期、有盆腔淋巴结转移及病理类型为腺癌的宫颈癌组织CD13标记的MVD 明显高于Ⅰ期、无转移及病理类型为SCC者。临床分期和盆腔淋巴结转移是宫颈癌预后的主要影响因素。因此，CD13 标记的MVD 可以作为预测宫颈癌患者的预后指标，对术后的放、化疗及其他抗癌治疗等有重要的指导作用。

总之，CD13 标记宫颈癌微血管比CD34 更具有特异性，CD13 可以用来判断宫颈癌生长、浸润及复发状况，并较准确地对肿瘤转移做出预示，可为患者预后提供更有价值的信息。

［1］刘楠，何福仙，钟刚.血管生长因子、血管生成与宫颈癌的关系［J］.国外医学:妇产科学分册，2003，30(4):204

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［4］Aozuka Y，Koizumi K，Saitoh Y，et al.Anti-tumor angiogenesis effect of aminopeptidase inhibitor bestatin against B16-BL6 melanoma cells orthotopically implanted into syngeneic mice［J］.Cancer Lett，2004，216(1):35

［5］Kido A，Krueger S，Haeckel C，et al.Inhibitory effect of antisense aminopeptidase N (APN/CD13)cDNA transfection on the invasive potential of osteosarcoma cells［J］.Clin Exp Metastasis，2003，20(7):585

［6］Ikeda N，Nakajima Y，Tokuhara T，et al.Clinical significance of aminopeptidase N/CD13 expression in human pancreatic carcinoma［J］.Clin Cancer Res，2003，9(4):1503

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［8］Haraguchi N，Ishii H，Mimori K，et al.CD13 is a therapeutic target in human liver cancer stem cells［J］.J Clin Invest，2010，120(9):3326