李 江，邵同先，赵明蕊，赵汴霞，吕丰收，王书伟，李志强，李学玲，张苏亚

河南职工医学院内科学教研室 郑州451191

#通讯作者，男，1956年12月生，本科，教授，研究方向:低温环境对心肌缺血和心律失常的影响，E-mail:txshao@sina.com

环境温度是一种基本的生态因素。人和哺乳动物的适宜环境温度为10～35℃，对代谢无明显影响。当环境温度低于10℃时，机体代谢将出现明显变化，故将10℃称为临界温度［1］。何子安等［2］研究提出，冷凝蛋白(cold insoluble protein，CIP)是机体血浆经低温致冷后形成的大分子冷不溶性蛋白，37℃复温后仍不溶解。在机体的血浆中CIP 以较大的颗粒存在，在微小血管中可能会造成淤积或堵塞，导致微循环障碍，加剧冻伤组织的病变。该研究中作者采用考马斯亮蓝法检测不同低温环境下家兔急性心肌缺血时心血及外周血CIP 水平，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及仪器 健康家兔112 只，雌雄不拘，体质量2.0～2.5 kg，由河南省实验动物中心提供。TGL-16G 离心机(上海安亭科学仪器厂)，TU-1901 双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.2 动物分组和处理 采用随机数字表法将112只兔分为实验组和对照组。参照韦方等［3］的方法，2组家兔在自然低温环境(10℃、5℃、0℃、－5℃)分别暴露30 min 和60 min(每一温度对应一个暴露时间为7 只家兔)，均采用100 g/L 水合氯醛耳缘静脉麻醉(5 mL/kg)，仰卧固定于手术台上。备皮，消毒，沿胸骨左缘切口切断左侧第3～4 肋软骨，暴露纵隔和心脏。进一步纵行切开心包，结扎左冠状动脉左室支中下1/3 处，直视下确定结扎相应供血区域心肌组织颜色变暗，确定急性心肌缺血模型制备成功。对照组开胸但不阻断冠脉血流。分别抽取心血和耳缘静脉血各1 mL 于肝素钠抗凝试管中。

1.3 CIP 水平测定 参照何子安等［4］的方法分离CIP 粗品，用生理盐水反复洗涤，除去可溶性杂蛋白。用100 g/L 丁醇溶解CIP 后，采用考马斯亮蓝法，以牛血清白蛋白作标准，测定595 nm 处的吸光度，根据标准曲线求出样品液蛋白浓度。

1.4 CIP 生化性质鉴定 采用考马斯亮蓝法进行定性反应，37℃水浴进行溶解实验。

1.5 统计学处理 采用SPSS 11.5 处理数据。应用4×2×2 析因设计的方差分析分别比较不同低温环境下暴露不同时间2组家兔心血和外周血中CIP水平的差异，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 低温环境下暴露不同时间2组家兔心血和外周血CIP 水平比较 见表1、2。

表1 低温环境下暴露不同时间2组家兔心血CIP 水平比较(n=7)mg/L

表2 低温环境下暴露不同时间2组家兔外周血CIP 水平比较(n=7)mg/L

2.2 CIP 生化性质 将CIP 样品做考马斯亮蓝定性反应为阳性，表明CIP 是蛋白质;又取CIP 样品约500 μL 置于2 mL 生理盐水中，离心后37℃水浴加热2 h 未见溶解，表明CIP 不溶于水。提示CIP 是一种大分子冷不溶性蛋白。

3 讨论

施永德等［5］研究发现，人血浆中存在着冷季增高、热季降低的CIP。该研究是在冬季自然低温状态下进行的，结果显示2组家兔心血和外周血中均有CIP 生成。

孙方人等［6］研究发现，在低温状态下，随着时间的延长，冻伤大鼠血浆中CIP 水平逐渐增高。该研究结果显示，低温环境下两组家兔心血及外周血CIP 水平均随着环境温度下降和时间延长逐渐增高，且实验组心血及外周血CIP 水平明显高于对照组，差异有统计学意义;其中温度与组别交互作用显著，温度与暴露时间交互作用、暴露时间与组别交互作用较显著，而温度、暴露时间和组别三因素之间无交互作用，提示CIP 是一种冷应激蛋白，低温环境下CIP 的生成增加可能是引起微血管血流淤积和堵塞，导致心肌微循环障碍、心肌缺血加重的重要因素;心肌缺血在低温环境下亦可促进CIP 的生成。对CIP 的理化性质及生物学效应有待于进一步研究和探讨。

［1］邵同先，张苏亚.低温医学［M］.呼和浩特:远方出版社，2003:7

［2］何子安，孙方人，马子敏.冷暴露大白鼠血浆中冷凝蛋白的含量测定及其分离鉴定［J］.解放军预防医学杂志，1996，14(4):257

［3］韦方，袁明兰，王树辉.冠状静脉窦逆行灌注VEGF 蛋白对兔心肌梗死模型心电图演变及心律失常的影响［J］.实用心电学杂志，2008，17(4):263

［4］何子安.大白鼠血浆中冷凝蛋白的初步分离与生化性质的鉴定［C］.第二届全国低温生物学大会论文汇编，1992:20

［5］施永德，步燕芳，唐镇生.血浆冷凝蛋白与季节、疾病、血液流变学行为和其他蛋白成分间关系的研究［J］.生物化学与生物物理学报，1989，21(2):134

［6］孙方人，刘嘉瀛，刘友梅，等.低氧条件下冻伤对大鼠血浆中冷凝蛋白含量的影响［J］.解放军预防医学杂志，1997，15(2):83