张 虹 季有波 (长春医学高等专科学校，吉林 长春 3003)

中医认为乳腺癌或癌前病变属于“乳岩”、“乳癖”范畴，乃由情志不畅、肝郁气滞、血瘀、脾气消沮等所致。而逍遥散行气疏肝，调畅神志，具有抗焦虑、抗抑郁作用，从而影响癌症的发生发展〔1〕。本课题组在前期研究中证实了逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7有显著的生长抑制作用〔2〕。本实验进一步探讨逍遥散提取液对细胞周期的影响，为古方新用及乳腺癌的防治进一步提供实验依据。

1 材料与试剂

1.1 试剂 DMEM 培养基(Invitrogen)、RNase、PI购自 Sigma公司;胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所。

1.2 药物 逍遥散的药物组成及用量为：柴胡、当归、白术、茯苓、芍药各30 g，炙甘草15 g，煨姜、薄荷各1 g，购自市售药店，并经过严格鉴定。按上述组方和单品药当归取生药，加蒸馏水回流提取3次，每次分别为60、30、30 min，浓缩药液，再加入DMEM培养液稀释，配成浓度为1 g/ml药液，过滤除菌，4℃保存备用。

1.3 细胞培养 人乳腺癌细胞系(MCF-7)购自吉林省肿瘤研究所，置于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37℃、5%CO2空气及饱和湿度条件下培养。以每5×104细胞/瓶接种，24 h换液1次并加入相应浓度的逍遥散提取液。

1.4 FCM检测细胞检测细胞周期 取对数生长期细胞用于实验，随机分5组：对照组、逍遥散提取液低剂量组(2 mg/ml)、中剂量组(5 mg/ml)、高剂量组(10 mg/ml)、当归组(5 mg/ml)。按照常规方法用PI染色，流式细胞仪检测细胞周期〔3〕。经低、中、高剂量的逍遥散提取液和当归分别作用48 h，收集MCF-7细胞，用PBS冲洗两次，70% 冷乙醇固定过夜。PBS冲洗2次，加RNase，37℃水浴30 min降解RNA;再用PBS洗2次后，加PI染液，4℃避光反应30 min，经PBS洗涤后上机检测。用FACScan流式细胞仪Cellfit软件收取细胞测定DNA含量的变化，每个样品收集细胞数为1×104个。

1.5 统计学分析 所有数据均采用SAS统计软件进行检测，数据用s表示，两组间比较采用t检验。

2 结果

经流式细胞仪检测，不同剂量的逍遥散提取液和当归提取液对乳腺癌细胞MCF-7作用48 h后，各周期细胞比例见表1。

表1 逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响( s ，%)

表1 逍遥散提取液对乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响( s ，%)

与对照组比较：1)P ＜0.05，2)P ＜0.01

组别 G0/G1 S G2/M逍遥散低剂量组 63.813±0.783 35.828±0.9551) 0.480±0.1231)中剂量组 55.615±1.4532) 28.258±3.7201) 0.207±0.1001)高剂量组 54.463±2.6962) 25.430±4.2461) 0.190±0.1471)对照组 64.763±2.202 36.238±1.110 0.597±0.076当归组68.250±3.990 31.500±4.210 0.250±0.250

3 讨论

细胞周期是指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期(M期)两个阶段。分裂间期是物质准备和积累阶段，分裂期则是细胞增殖的实施过程。间期又分为休眠期(G0期)、DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)，在此期间主要完成染色质中的DNA复制和相关蛋白质的合成。M期为细胞分裂期，在此期间进行细胞物质的平均分配，一个细胞经过分裂形成两个新的细胞。

在细胞周期中，S期是细胞增殖的关键，其最主要的特征是DNA的合成，DNA分子的复制就是在这个时期进行的。通常只要DNA的合成一开始，细胞增殖活动就会进行下去，直到分裂成两个子细胞。因此通过某种因素进行干扰、破坏或抑制DNA合成，就可以抑制癌细胞增殖，从而达到治疗癌症的目的。例如，放射线能破坏癌细胞DNA的结构与合成，治疗某些肿瘤〔4〕;药物秋水仙碱等则可阻止纺锤体的形成，从而抑制癌细胞的分裂〔5〕。

因为单味当归可能有促进妇女乳腺癌细胞增生的作用〔6〕，因此本实验采用当归提取液组作对照。本实验观察结果表明，逍遥散提取液3个不同浓度组对乳腺癌细胞MCF-7作用48 h后，S期细胞比例降低，且随着药物浓度的增加，细胞比例降低更明显。提示逍遥散提取液可通过阻断乳腺癌细胞MCF-7 DNA合成的方式，抑制乳腺癌细胞体外增殖;而单味当归亦无促进DNA合成作用。

1 吴在德.外科学〔M〕.第5版.北京：人民卫生出版社，2001：1.

2 王 迪，张 虹，付士波，等.逍遥散对乳腺癌细胞抑制作用实验研究〔J〕.中医药学刊，2006;(4)：643-4.

3 苏 旭，张迎春.胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响〔J〕. 白求恩医科大学学报，1995;15(21)：447.

4 鞠桂芝，付士波，刘建香，等.X射线照射对EL-4淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响〔J〕.辐射研究与辐射工艺学报，1998;18(16)：157-60.

5 高沛永，王 琼.秋水仙碱引起CHL细胞有丝分裂纺锤体损伤的观察〔J〕.军事医学科学院院刊，1993;13(4)：259-61.

6 戴 军.人参当归可能诱发乳腺癌 专业人士建议妇女慎用〔J〕.保健时报，2004;20(4)：1.