吴宗晖 田 菂

(1.吉首市人民医院，湖南 吉首 416000; 2.湘西自治州民族中医院，湖南 吉首 416000)

大山黄连，系土家族民间常用的一种民族药。民间又称大车前、水红菜、翳子草。来源于龙胆科獐牙菜属植物双点獐牙菜 Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms的全草［1］，性寒、味苦，具有清热解毒、清肝利胆、止泻消炎等作用。土家医常用于消化不良，胃炎，急、慢性肝炎，胆囊炎，目赤肿痛，牙痛，肠炎，流行性感冒，尿路感染等疾病。现代研究发现其主要成分为獐牙菜苦苷等有效成分，可用于多种炎症。大山黄连提取物抑菌实验研究方面尚未见报道。为此，我们对大山黄连药液进行了抑菌实

验研究。现将结果报道如下。

1 材料

1.1 药材:采自湖南保靖县吕洞山，当地习称“大山黄连”。药物标本经内蒙古大学生物系马毓泉教授鉴定为龙胆科獐牙菜属植物双点獐牙菜Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms 。

1.2 标准菌株:金黄色葡萄球菌ATCC29213;表皮葡萄球菌ATCC12228;大肠埃希菌 ATCC25922;铜绿假单胞菌ATCC27853;粪肠球菌ATCC29212。营养琼脂培养基，购于北京海淀区微生物培养基制品厂。

1.3 供试菌株菌种:来源于本院微生物学实验室保存的菌种，用前经过鉴定，为典型菌株。1#ATCC12228表皮葡萄球菌、2#ATCC29213金黄色葡萄球菌、3#ATCC25922大肠埃希菌、4#ATCC27853铜绿假单胞菌、5#ATCC29212粪肠球菌、6#蜡样芽胞杆菌(呕吐物标本分离)、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰标本分离)、8#铜绿假单胞菌(痰标本分离)。

2 方法

2.1 药液制备:称取大山黄连药材50g碎成粗末，置于烧杯中，加适量纯化水浸泡1h后煎煮，沸后用文火再煎30min，滤出煎液后向烧杯中加入适量纯化水按上法再煎煮1次，合并2次滤液减压浓缩至50mL，置4℃保存备用。药液浓度相当于1毫升含1g生药。

2.2 琼脂稀释法:将不同浓度的抗菌药物，加入融化并冷至50。C左右的定量M－H琼脂中，制成含不同抗菌药物浓度的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，肉眼观察以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度判为MIC。

2.3 含药琼脂平板制备:药物制成1g/mL，按1:5、1:10、1:20、1:40配制成药物琼脂平板。琼脂厚度约4mm(90mm直径平板倾倒琼脂总量为25ml)。

2.4 接种物制备与接种:用直接菌落悬液法制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1:10稀释。含药琼脂平板使用前，从2～8。C冰箱取出置35。C孵箱30min，待琼脂平板表面水分干燥后进行接种。以接种环取制备好的菌液(约1～2μL)接种于琼脂平板表面，形成直径为5～8mm的菌斑，每个菌斑含菌数约为104CFU。接种顺序是先接种无药对照平板，而后从低药物浓度向高药物浓度平板。

2.5 孵育:琼脂平板接种好菌液后，将平板置室温待菌液被琼脂吸收后(一般不超过30分钟)把琼脂平板倒置放入(35±2)。C孵箱孵育20～24h。

2.6 结果判读:将平板置于暗色、无反光物体表面判读试验终点，以抑制细菌生长最低药物浓度为MIC。接种处出现单个菌落或模糊薄雾状可忽略不计。［2、3、4］

3 结果

对革兰氏阳性菌有较好的抑菌性，除9#空白对照1:5、1:10、1:20、1:40 均未生长;药物浓度为 1:5 时 1#、2#、3#、4#4株革兰氏阳性菌均未见生长，1:10时除3#、4#有较弱的生长外余2株均见明显生长，1:20时皆呈明显生长;其余菌株在药物浓度为1:5时即有明显生长。如表1所示:1#ATCC29213金黄色葡萄球菌、2#ATCC12228表皮葡萄球菌、3#ATCC29212粪肠球菌、4#蜡样芽胞杆菌(呕吐物标本分离)、5#ATCC27853铜绿假单胞菌、6#ATCC25922大肠埃希菌、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰标本分离)、8#铜绿假单胞菌(痰标本分离)、9#空白对照。药液浓度为1克/毫升生药。

表1 大山黄连抑菌试验结果

4 讨论

抗生素从发现至今已成为了人类抵御细菌感染的有力武器。［5、6、7］但随着抗生素的长期应用甚至滥用，越来越多的细菌对现有的抗生素产生了耐药性，降低了现有抗生素的效率。由于中药及民族药的特殊性，细菌较少对中药及民族药产生耐药性，并且中药及民族药具有毒副作用小，取材方便，经济实惠的优点，因此研究和开发中药及民族药抗生素对解决耐药菌株的问题具有重大意义，这也受到了众多学者的广泛关注。大山黄连抑菌实验表明，对部分革兰氏阳性菌有较好抑制作用，为治疗因革兰氏阳性菌感染引起的疾病提供了科学依据。大山黄连对其它菌株菌种无抑制作用。本次实验结果对中药及民族药抗生素的开发和临床的用药都有一定的参考价值。本次实验仅进行了单味民族药的体外抑菌实验，而中药及民族药在体内的作用机制及其有效成分都极为复杂，在人体内是否能达到体外实验的效果还有待进一步的研究。

［1］周慎，谭光波.湖南药物志(第七卷)［M］.长沙:湖南科学技术出版社，2004:5080～5081.

［2］周邦靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法［M］.重庆:科学技术文献出版社重庆分社，1987:289.

［3］王嵩.中草药抗细菌感染的研究［J］.北京中医杂志，20O2，21(4):249 ～2

［4］刘云波，郭丽华，邱世翠.等.黄芩体外抑菌作用研究［J］.时珍国医国药，2002，13(10):596 ～596

［5］左国营，韩峻，余 巍，等.47种中草药提取物的体外抗菌活性筛选研究［J］.中国药房，2005，16(1O):798～799

［6］张显忠，郭爱军，李艳玲，等.中草药提取物的体外抑菌活性研究［J］.医院感染学杂志，2006，16(5):563 ～565

［7］高静，刘培勋，龙伟.中药提取技术的研究进展［J］.医学导报，2007，26(9):1058～1060