欧阳燕玲 陈玲 曾志定

UHPLC法测定食品中黄曲霉毒素的含量

欧阳燕玲 陈玲 曾志定

目的 建立一种同时测定食品中多种黄曲霉毒素含量的方法。方法 采用UHPLC法同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2，并建立回归方程，考察方法的准确度与精密度。结果 在各自的线性范围中，黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的浓度c(μg/L)与峰面积A呈现良好的线性关系(r>0.999)。食品样品的平均回收率为83.4%～107.5%。黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的相对标准偏差RSD为2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)。结论 UHPLC法操作简便、线性范围较广、灵敏度高、准确度和精密度良好，是实用的黄曲霉毒素检测方法。

超高效液相色谱法；UHPLC；食品；黄曲霉毒素；理化检验

黄曲霉毒素中的黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2毒性最强，黄曲霉毒素具有高致癌性，能引发人类多种癌变，尤其是肝癌[1-2]。粮油食品、热带与亚热带地区食品受到黄曲霉毒素的污染较为严重，食品中的黄曲霉毒素污染问题受到国内外政府主管部门的重视。近年来，检测食品中黄曲霉毒素的主要方法为高效液相色谱(HPLC)法与酶联免疫(ELISA)法[3-4]。ELISA法检验步骤简便，但假阳性结果较多。HPLC法操作简便、灵敏度高、准确率好，还可同时定量测定多种黄曲霉毒素。

1 材料与方法

1.1 仪器 1290 Infinity型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；净化萃取柱（美国Multisep romer labs公司）；分析天平；干燥箱；离心机；混匀器。

1.2 试剂 黄曲霉毒素（Sigm a公司）；三氟乙酸（Sigm a公司）；乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；水为纯化水；正己烷（分析纯）；其它试剂均为分析纯。

1.3 UHPLC条件 色谱柱：C 18柱(Zorbax Ex tend C 18,50mm×2.1mm id,1.8μm)（美国A gilen t公司）；柱温：35℃；进样量：20μL；检测器：G1321A型荧光检测器，激发波长：365nm，发射波长：450nm；流动相：乙腈:甲醇:水=1:3:6；流速1.0m L/m in。

1.4 标准溶液的配制方法 取黄曲霉毒素标准品配制质量浓度分别为10.0、5.0、2.5、1.25、0.625μg/L的标准溶液，吹氮气干燥，然后加0.1m L三氟乙酸溶液，放入混匀器快速振荡混匀。置室温暗处约20m in，再加0.9m L乙腈和水混合液（体积比88:12），2000 r/m in离心10 m in，保留上清液待测。

1.5 样品处理方法 将食品样品粉碎后，称取20g样品置250m L的三角瓶内，再加80m L乙腈和水混合液（体积比88:12），置摇床上振荡30m in混匀，抽滤得到样品提取液。精确量取8m L样品提取液，置净化柱中，慢速推柱，获得净化后的样品提取液。精确量取2m L净化液加入棕色具塞小口瓶中，置60℃水浴中，吹氮气干燥，加入100μL三氟乙酸衍生液与200μL正己烷，置混匀器上混匀，置干燥箱中40℃衍生20m in，置室温中蒸干，再加入200μL乙腈和水混合液（体积比88:12）溶解，置混匀器上混匀，2000r/m in离心10m in，保留上清液待测[5]。

2 结果

2.1 标准溶液的线性关系结果 通过检测黄曲霉毒素标准溶液，分别建立黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的标准曲线（见表1）。可见，在各自的线性范围中，黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的浓度c (μg/L)与峰面积A呈现良好的线性关系(r>0.999)。

表1 黄曲霉毒素标准溶液的线性关系结果

2.2 回收率和精密度 在食品样品中分别加入1.0μg/L黄曲霉毒素B2与G2，5.0μg/L黄曲霉毒素B1与G1，加样回收率结果表明：食品样品的平均回收率为83.4%～107.5%。黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的相对标准偏差RSD为2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)，这表明本检测方法的精密度良好。

3 讨论

UHPLC法与传统的高效液相色谱技术相比，UHPLC在分析的灵敏度、速度与分离度等多方面有显著的提升，目前已经逐步成为液相色谱技术发展的趋势。本文建立的UHPLC法同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1与G2的方法，检验的处理步骤简便，线性范围较广，灵敏度较高，准确度和精密度良好，是实用的黄曲霉毒素检测方法。黄曲霉毒素在光照下不稳定，标准品和样品应置4℃冰箱保存，检测时应注意避光。黄曲霉毒素具有剧毒和高致癌性，检测人员在样品处理和检测过程中应避免皮肤与黄曲霉毒素直接接触。检验使用结束的器皿、操作台与相关物品应置次氯酸钠溶液中进行浸泡消毒至少30m in，消毒后大量水反复洗涤。

[1] 高秀芬，计融，李燕俊，等.高效液相色谱法测定玉米中的黄曲霉毒素[J].中国食品卫生杂志，2007,19⑵:105-108.

[2] 柳洁，何碧英.高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素的方法研究[J].现代预防医学，2002,29⑵:891-896.

[3] 史莹华，许梓荣，冯建蕾，等.高效液相色谱法测定动物组织样品中黄曲霉毒素的残留量[J].分析化学，2005,33⑹:850-852.

[4] 柳洁，何碧英，孙俊红.粮油食品中黄曲霉毒素B1测定[J].中国公共卫生，2006,22⑴:122-123.

[5] 北京市质量技术监督局.食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法[S].GB/T 18979-2003.

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10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.115

362000 福建省泉州市疾病预防控制中心理化检验科 （欧阳燕玲 陈玲 曾志定）