程宝琦，黄文华 ，余竞光，郭宝林，张 晶

1吉林农业大学中药材学院，长春130118;2 中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京100193

番荔枝科(Annonaceae)番荔枝属(Annona)植物约有120 种，主要分布于美洲热带地区，少数分布于热带非洲，我国现有的6 种番荔枝属植物均为从热带美洲引入栽培。本属植物含有番荔枝内酯(polyketides)、萜类、环肽及生物碱等多种成分，它们在抗肿瘤、抗疟、抗菌、免疫抑制、拒食及杀虫等方面具有较强的生物学活性［1-3］。密毛番荔枝(Annona densicoma Mart. )分布于南美洲亚马逊热带雨林，当地人称之为graviola-brava［4］。前人从密毛番荔枝分离到8 个polyketides 成分，其茎皮的醇提取物及其所含番荔枝内酯类成分体外试验对P388、A549、HT29 等多种细胞瘤株有很强的抑制活性［5-7］。为进一步寻找其抗肿瘤的活性成分，我们对采自秘鲁的密毛番荔枝茎枝进行了化学成分研究，从中分得9 个化合物，包括黄酮、有机酸、生物碱、polyketides 类化合物等。其中化合物3 为首次从该属植物中分离得到，化合物1、2、4、5、8、9 首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker Avance DRX-600 型超导核磁共振仪;Ultima-TOF(Micromass，UK)质谱仪;中压系统(艾杰尔公司);Buchi RE-121 旋转蒸发仪(瑞士步琪公司);Fisher-Johns Melting Point Apparatus 熔点测定仪(温度未校正);ZF-I 型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);薄层硅胶GF254、柱色谱硅胶(烟台市化学工业研究所);Sephadex LH-20(GE Healthcare 产品，北京绿百草科技有限公司分装);YMCPack ODS-A 半制备液相色谱柱(日本YMC 公司);MCI GEL CHP 20P(日本三菱化工)。

植物材料密毛番荔枝(Annona densicoma Mart. )茎枝于1981 年采自秘鲁，由美国农业部经济植物实验室鉴定并保存凭证标本［5］。

2 提取与分离

干燥的密毛番荔枝茎枝6.5 kg 粉碎，用95%乙醇渗漉及回流提取，合并提取液，减压浓缩得浸膏221.06 g，水混悬后，分别用二氯甲烷、正丁醇萃取，回收溶剂得二氯甲烷浸膏70.40 g 和正丁醇浸膏29.75 g。取二氯甲烷浸膏70 g，用84 g(60～100目)硅胶拌样，经200～300 目硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯系统(v/v，95∶5;9∶1;8∶2;7∶3;6∶4)梯度洗脱，通过薄层层析检测合并相同的部分，得到8 个组分(Fr.1～Fr.8)。Fr.2 上硅胶柱以氯仿-甲醇(v/v，98∶2)等度洗脱，再经Sephadex LH-20 凝胶(氯仿:甲醇=1∶1)和RP-18 柱分离得到化合物6(6 mg)，7(39 mg)和8(218mg);Fr.4 经MCI 和Sephadex LH-20 凝胶反复柱层析得到化合物1(8 mg)、2(5 mg)、3(49 mg)和4(109 mg);Fr.5 经MCI 柱层析和RP-18 柱制备得到化合物5(42 mg)，从Fr.6 部分得到化合物9(442mg)。

3 结构鉴定

化合物1 黄色粉末(甲醇)，紫外365 nm 波长下有蓝绿色荧光，mp.311～312 ℃;ESI-MS (m/z):325［M + Na］+，303 ［M + H］+;1H NMR (DMSOd6，600 MHz)δ:6.18 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-6)，6.40 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-8)，6.88 (1H，d，J =8.4 Hz，H-5')，7.53 (1H，dd，J = 2.4，8.4 Hz，H-6')，7.67 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-2')，12.48，10.79，9.59，9.34，9.29 (5H，s，5 ×OH)。13C NMR (DMSOd6，150 MHz)δ:147.68 (C-2)，135.70 (C-3)，175.82 (C-4)，160.69 (C-5)，98.15 (C-6)，163.86(C-7)，93.33 (C-8)，156.12 (C-9)，102.99 (C-10)，121.93 (C-1')，115.04 (C-2')，145.03 (C-3')，146.79 (C-4')，115.58 (C-5')，119.96 (C-6')。以上数据与文献［8］报道槲皮素(quercetin)光谱数据一致。

化合物2 淡黄色针晶(氯仿-甲醇)，紫外365 nm 波长下有蓝色荧光，mp.262～263 ℃;ESI-MS(m/z):311 ［M + Na］+，289 ［M + H］+;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:2.68 (1H，dd，J = 15.6，3.6 Hz，H-3a)，3.15 (1H，dd，J = 15.6，14.4 Hz，H-3b)，5.36 (1H，dd，J = 14.4，3.6 Hz，H-2)，5.87(2H，d，J = 2.4 Hz，H-6，8)，6.74 (2H，s，H-5'，6')，6.87 (1H，s，H-2);13C NMR (CD3OD，150 MHz)δ:196.74 (C-4)，167.45 (C-7)，163.95 (C-5)，163.37 (C-9)，146.19 (C-4')，145.67 (C-3')，129.95 (C-1')，118.40 (C-6')，115.82 (C-5')，114.81 (C-2')，102.22 (C-10)，96.26 (C-6)，95.47(C-8)，78.91 (C-2)，42.55 (C-3)以上数据与文献［9］报道圣草酚(eriodictyol)光谱数据一致。

化合物3 白色针状结晶(甲醇)，mp.197 ℃;EI-MS (m/z):154 ［M］+;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ:6.78(1H，d，J = 7.8 Hz，H-5)，7.28 (1H，dd，J = 2.4，7.8 Hz，H-6)，7.33 (1H，d，J = 1.8 Hz，H-2);13C NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ:115.20(C-5)，116.60 (C-2)，121.71 (C-1)，121.95 (C-6)，144.92 (C-3)，150.04 (C-4)，167.36 (C-7)。与文献［10］报道的波谱学数据相一致，故鉴定为原儿茶酸(protocatechuic acid)。

化合物4 白色片状晶体，mp.208～209 ℃;EIMS (m/z):198［M］+;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.20 (2H，s，H-2，6)，3.80 (6H，s，2 × OCH3)，9.19 (1H，s，COOH);13C NMR (CD3OD，150 MHz)δ:120.37 (C-1)，106.87 (C-2)，147.42 (C-3)，140.20 (C-4)，147.42 (C-5)，106.87 (C-6)，167.20 (COOH)，55.97 (OCH3)。以上数据与文献［11］报道的波谱学数据一致，故鉴定为丁香酸(syringic acid)。

化合物5 白色粉末，mp.261～262 ℃;ESI-MS(m/z):284［M+H］+;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:2.74 (2H，t，J = 7.2 Hz，H-2')，3.45 (2H，t，J =7.2 Hz，H-1')，6.38 (1H，d，J = 16.2 Hz，H-2)，6.71 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-5')，6.72 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-7')，6.78 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-6)，6.79 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-8)，7.05 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-4')，7.06(1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-8')，7.39 (1H，dd，J =1.8，6.6 Hz，H-5)，7.39 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-9)，7.44 (1H，d，J = 15.6 Hz，H-3)。13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:169.45 (C-1)，118.66 (C-2)，141.96 (C-3)，127.94 (C-4)，130.92 (C-5，C-9)，116.92 (C-6，C-8)，160.71 (C-7)，42.73 (C-1')，36.01 (C-2')，131.53 (C-3')，130.74 (C-4'，C-8')，116.47 (C-5'，C-7')，157.12 (C-6')。以上数据与文献［12，13］报道的化合物的波谱数据基本一致，故确定为N-p-hydroxy-cis-coumaroyltyramine。

化合物6 白色蜡状物，mp.52～53 ℃;ESI-MS(m/z):597［M + H］+，619 ［M + Na］+，分子式为C35H64O7;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:0.88 (3H，t，J = 6.6 Hz，H-32)，1.42 (3H，d，J = 6.6Hz，H-35)，1.66 (2H，m，H-17，18)，1.97 (2H，m，H-17，18)，2.40(1H，m，H-3a)，2.51 (1H，brd，J = 15.6 Hz，H-3b)，3.39 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-15)，3.40 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-20)，3.58 (1H，m，H-10)，3.79 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-16)，3.80 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-19)，3.84 (1H，m，H-4)，5.05 (1H，qd，J = 6.9，1.2Hz，H-34)，7.18 (1H，d，J = 1.2Hz，H-33)。13C NMR (CDCl3，150MHz)δ:174.46 (C-1)，131.35 (C-2)，32.11(C-3)，70.12 (C-4)，37.45 (C-5)，71.97 (C-10)，74.18 (C-15)，82.77 (C-16)，82.86 (C-19)，74.28(C-20)，22.87 (C-31)，14.07 (C-32)，152.05 (C-33)。以上数据与文献［14，15］报道相一致，为annonacin。

化合物7 白色蜡状固体，mp.73～75 ℃;ESIMS (m/z):595［M+H］+，617［M+Na］+，633［M+K］+，分子式为C35H62O7;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:0.87 (3H，t，J = 6.6 Hz，H-32)，1.42(3H，d，J = 7.2 Hz，H-35)，1.67 (2H，m，H-17，18)，1.98 (2H，m，H-17，18)，2.40(2H，t，J = 7.2 Hz H-11)，2.41(2H，t，J = 7.2 Hz H-9)，2.41(1H，m，H-3a)，2.51 (1H，brd，J = 14.4 Hz，H-3b)，3.40 (1H，m，H-15)，3.40 (1H，m，H-20)，3.77(1H，dd，J = 12.6，6.6 Hz，H-16)，3.79 (1H，dd，J= 12.6，6.6 Hz，H-19)，3.83 (1H，m，H-4)，5.05(1H，qd，J = 6.6，1.2Hz，H-34)，7.18 (1H，d，J =1.2Hz，H-33)。13C NMR (CDCl3，150 MHz)δ:175.19 (C-1)，131.72 (C-2)，32.50 (C-3)，70.41(C-4)，37.70 (C-5)，43.17 (C-9)，211.91 (C-10)，43.27 (C-11)，74.35 (C-15)，83.14 (C-16)，83.28(C-19)，74.65 (C-20)，23.26 (C-31)，14.69 (C-32)，152.46 (C-33)。根据以上1H NMR 和13C NMR的数据确定为已知化合物annonacin-10-one［6，15］。

化合物8 白色结晶(甲醇)，mp.141 ℃。与β-谷甾醇标准品对照，混合熔点不下降，经TLC 检识与β-谷甾醇标准品显色行为及Rf值一致，故化合物8 鉴定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物9 白色粉末(甲醇)，mp.287 -289 ℃，Liebermann-Burchard 反应阳性，Molisch 反应阳性，与胡萝卜苷标准品对照，混合熔点不下降，经TLC检识与胡萝卜苷标准品显色行为及Rf值一致［16］，故化合物9 鉴定为胡萝卜苷(daucosterol)。

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