周 珂 何泽云* 龙华君 左和宁 彭亚军

（1 湖南中医药大学第一附属医院肾内科，长沙410007；2 湖南省中医药研究院附属医院，长沙410006；）

怡肾丸Ⅰ号对UUO大鼠行为性状及肾组织形态学的影响※

周 珂1何泽云1* 龙华君2左和宁1彭亚军1

（1 湖南中医药大学第一附属医院肾内科，长沙410007；2 湖南省中医药研究院附属医院，长沙410006；）

目的 观察怡肾丸Ⅰ号对单侧输尿管结扎大鼠生活状态、体重及其肾脏病理的影响。方法 将50只SD大鼠分为怡肾丸Ⅰ号组、依那普利组、空白组、假手术组及模型组，连续灌胃14d后，观察各组大鼠的生活状态、体重及其肾组织的病理改变情况。结果 怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组生活状态、体重和肾组织的病理改变方面都明显轻于模型组（P＜0.01）。结论 怡肾丸Ⅰ号对UUO大鼠的生活状态、体重和肾组织都有明显改善。

怡肾丸Ⅰ号，UUO，大鼠，生活状态，肾组织形态学

肾间质纤维化程度与肾功能减退的相关性较肾小球硬化与肾功能减退的相关性更为密切[1]，大量实验证明，单侧输尿管结扎（UUO）大鼠是肾间质纤维化病变非常成功的动物模型。本研究采用此方法造模，观察自制药物怡肾丸Ⅰ号对UUO大鼠的生活状态、体重及肾组织病理形态学影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 50只体重为（200±20）g的健康Sprague-Dawlley（SD）雄性大鼠（湖南中医药大学实验动物中心提供）被分为怡肾丸Ⅰ号组、依那普利组、空白组，假手术组和模型组，每组10只，均饲养在通风、恒温、安静的环境中。

1.1.2 药物 怡肾丸Ⅰ号（批准文号：湘Y20101123，湖南中医药大学第一附属医院制剂室提供），组成药物：白花蛇舌草，熟地黄，生地黄，白术，砂仁，山茱萸，五味子，蝉蜕等。马来酸依那普利片（国药准字：H32026567，扬子江制药股份有限公司提供）。

1.1.3 实验试剂及仪器 美诚MW-30超纯水器、YD-1508R石蜡切片机、BX51T-72P01型OLYMP光学显微照相系统、T-214电子分析天平等。

1.2 实验方法 50只体重为（200±20）g的SD雄性大鼠被分为怡肾丸Ⅰ号组，依那普利组，空白组，假手术组，模型对照组，每组10只。假手术组SD大鼠仅仅将左侧输尿管分离，而不结扎和剪断。空白组大鼠不开腹。其余各组则按klahr S等[2]的方法造模：各组大鼠均以10%水合氯醛麻醉（0.35ml/100g）后分别将各组大鼠逐一俯卧位固定于固定板上，于大鼠左侧背部剪掉大概3 ×2cm范围的鼠毛，并用络合碘消毒后向尾部方向切开皮肤约2cm，铺无菌纱布，逐层钝性分离皮下组织及肌层，充分暴露左侧肾脏，沿肾蒂找到左输尿管，在中上1/3处以双4号手术线结扎两处，从结扎线之间切断输尿管，造成左侧输尿管完全梗阻，再逐层缝合。于第2天开始分组灌胃，分别上午8点和下午5点各灌胃1次，其中怡肾丸Ⅰ号组按（60kg重成人的剂量×0.018×5/Kg体重）计算，溶于4ml蒸馏水灌胃，依那普利组按10mg/kg•d溶于等体积蒸馏水灌胃，正常组、假手术组、模型组均予等体积蒸馏水灌胃，连续灌胃14天。

1.3 检测指标

1.3.1 大鼠行为性状变化比较 自造模前至处死时，每天观察各组大鼠的生活状态、体重、对外界刺激的反应。分别于造模前及造模后14天用电子秤称量各组大鼠体重。1.3.2 大鼠肾脏湿重比较 灌胃14d后，处死所有大鼠，分别用电子天枰称量各组大鼠左肾脏的湿重。

1.3.3 大鼠肾脏组织形态学比较 灌胃14d后，处死所有大鼠，取出左肾，将肾组织行冠状切面，取约绿豆大小肾组织放入4%多聚甲醛固定，再行常规梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片后分别进行HE及Masson染色。

1.4 统计学方法 采用SPSS 15.0统计软件处理数据。组间差异采用单因素方差分析比较，组内差异采用成组t检验比较。以P＜0.05为差异有统计学意义。计量资料以“平均数±标准差”表示。

2 结果

2.1 实验前后各组大鼠生活状态的比较 造模前各组大鼠均饮食正常，皮毛光亮、对噪声刺激反应敏捷。造模后第14天各组大鼠均无死亡。但是，模型组大鼠明显食欲下降，皮毛无光并且脱毛明显，对噪声刺激反应迟钝。而在造模后第14天，从饮食、毛色及对外界的反应情况看，怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组大鼠明显优于模型组大鼠，而空白组和假手术组在实验前后直观上均无明显差异且优于模型组。

2.2 实验前后各组大鼠体重变化比较 各组大鼠体重均随着时间延长而增加。但空白组、假手术组和模型组与怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组比较有显著性差异（P＜0.01），而怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组在灌胃14d后比较无明显差异（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠体重变化情况 (g，±s)

表2 造模14d各组大鼠左肾湿体重比较 (g，±s )

由表1可以看出造模14d后。

2.3 各组大鼠左肾湿重比较 各组大鼠左肾湿重对比：假手术组、模型组、怡肾丸Ⅰ号组、依那普利组大鼠与空白组大鼠左肾湿重比较差异有统计学意义（P＜0.01）；治疗组、假手术组、怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组与模型组比较也有统计学差异（P＜0.05），但依那普利组和怡肾丸Ⅰ号组大鼠左肾湿重无统计学差异（P＞0.05）。见表2。

2.3 各组大鼠肾组织HE染色及Masson染色病理形态学比较 怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组大鼠左肾较空白组和假手术组大鼠肿胀，颜色变浅，结扎处以上的输尿管粗大，冠状面颜色较浅，肾皮质尤甚，而肾盂、肾盏均有所扩张，其中有些标本还可见混浊尿液，肾乳头变平，肾实质变薄，皮髓交界处欠清。模型组大鼠左肾普遍又比怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组大鼠左肾大，颜色更暗，肾盂、肾盏内可见纤维组织粘连，肾皮质萎缩更明显。而空白组和假手术组大鼠左肾大小差异不明显，颜色暗红，输尿管无明显增粗，肾盂、肾盏未见扩张，肾乳头清晰，皮髓分界也较明显。HE染色及Masson染色发现，空白组和假手术组大鼠的肾间质无异常改变，无纤维组织增，肾小管、肾小球基本正常；模型组可见肾小管高度扩张，小管基底膜较薄，间质区细胞大量增生，肾间质纤维化，肾间质可见大量炎细胞浸润；怡肾丸Ⅰ号组肾小管轻度扩张，肾间质轻度纤维化，见间质区局灶性细胞增生，部分肾小管轻度扩张，病变程度较模型组轻。（见附图1-10）

3 讨论

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进行性发展的共同病理基础，主要表现为细胞外基质（ECM）在肾间质内过度沉积，是肾脏结构毁损的必由之路，因而如何阻止或延缓肾间质纤维化就成了延缓或阻止肾功能进行性恶化的关键。长期以来，广大医务工作者一直致力于研究如何延缓肾间质纤维化的发生发展，希望籍此达到延缓肾功能进行性恶化的目的。由于临床研究的受限，人们在延缓肾间质纤维化方面做了大量的实验研究，其中较为成熟的单侧输尿管结扎模型（UUO）就是人为的造成尿液排出受阻，使肾盂、肾小管内压力升高，肾盂等集合管系统扩张，使得肾间质水肿，同时可出现局灶性炎症细胞浸润，最终导致了肾间质纤维化及肾萎缩的发生。现已有很多对UUO大鼠的研究报道[3-5]，既反映了UUO大鼠在肾间质纤维化研究中所起的重要作用，也反映了广大医务工作者目前仍在寻求对肾间质纤维化安全有效的治疗方法。

已有研究发现[6]，依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化。而怡肾丸Ⅰ号是我院何泽云教授经过长期临床实践和反复总结研制而成，在长期临床应用中表现出降尿蛋白，改善肾功能的作用。本研究以UUO大鼠作为肾间质纤维化的观察对象，探寻怡肾丸Ⅰ号的效应点。本研究发现怡肾丸Ⅰ号组大鼠的生活状态、体重及对外界刺激反应都明显优于模型组，而在实验完成前后怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组相比较并无明显差异。观察发现，各组大鼠体重均随着时间延长而增加，但模型组体重明显低于怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组。ACEI类药物对肾脏的保护作用已是一不争事实，2组在生活状态方面的相似表现也就证实了怡肾丸Ⅰ号对肾脏的保护作用。同时，各组大鼠肾组织病理切片显示：怡肾丸Ⅰ号组和依那普利组肾间质纤维化程度明显低于模型组，这从病理形态学方面阐明了怡肾丸Ⅰ号对肾间质纤维化的改善作用。怡肾丸Ⅰ号组方中的熟地黄、白花蛇舌草共为君药，体现了补肾泻浊之意。白术、山茱萸、生地黄补脾益肾涩精，同为臣药。五味子收敛固涩，益气生津，补肾宁心；砂仁行气止痛、温胃止呕；蝉蜕散风除热共为佐药。这些药物组合在一起脾肾兼顾，补泻兼施，具扶正排毒之功，具有临床使用价值，也值得进一步研究完善。

附图：HE染色（200倍）：

图1 空白组：肾小管正常，肾间质无增生

图2 假手术组肾小管正常，肾间质无增生

图3 模型组：肾小管高度扩张，小管基底膜较薄,间质区细胞大量增生，肾间质纤维化

图4 怡肾丸Ⅰ号组：部分肾小管轻度扩张，局灶性间质区细胞增生

图5 依那普利组: 部分肾小管扩张， 管壁变薄，肾间质轻度细胞增生

Masson染色（400倍）：

图6 空白组：肾小管、肾小球基本正常，间质未见增生

图7 假手术组：肾小管、肾小球基本正常，间质未见增生

图8 模型组：肾小管纤维组织增生，小管扩张，伴大量间质纤维增生

图9 怡肾丸Ⅰ号组：局灶性间质纤维增生，部分小管纤维化，伴小管扩张

图10 依那普利组：部分小管纤维化，局灶性间质纤维化，部 分小管塌陷

[1] 刘娜,严海东.肾小管上皮细胞转分化在肾间质纤维化中的研究进展[J].国际泌尿系统杂志,2006,26(6):854.

[2] klahr S, MorrisseyJ. Obstructive ephropathy and renal fibrosis [J]. Am J Physiol, 2002,283(5):861-875.

[3] 马晓鹏,宋立群,于思明,等.虫草肾茶颗粒对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化模型CTGFmRNA的影响[J].中国临床保健,2010,13(3):271-274.

[4] 丁庆余,宋恩峰,贾汝汉.杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响[J].中国中西医结合肾病杂志,2010,1l(2):109-111.

[5] 孙培荣,石永兵,施晓松.银杏达莫对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的作用[J].现代临床医学,2010,36(3):171-173.

[6] 王琳娜,宁旺斌, 陶立坚,等.动态观察依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1, CTGF, Smad7和α-SMA的影响[J].中南大学学报(医学版),2009,34(03) 252-258.

Effects of Yishenwan Ⅰon Behavior and Renal Morphology in UUO Rats

Zhou Ke1He Zeyun1Long Huajun2Zuo Hening1Peng Yajun1(1 Department of Nephrology ,First Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical University , Changsha 410007,China; 2 The Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medicine Institute, Changsha 410006, China)

Objective To evaluate the effect of Yishenwan Ⅰon life station, body weight and renal pathological on unilateral ureteral ligation rats. Methods 50 SD rats were divided Yishenwan Ⅰgroup, enalapril group, control group, sham operation group and model group, respectively. After continuously being intragastriced 14 days, the life sttation, body weight and kidney tissue pathological of rats in each group were observated. Results After 14 days, the life station, weight and pathology of Yishenwan Ⅰgroup and enalapril group were significantly different from the other groups rats (P＜0.01). Conclusion It is a significent improvement of Yi shenwan Ⅰon the life station, body weight and renal pathological UUO rats.

YishenwanⅠ; UUO; rats; life station, Renal morphology

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.15.106

1672-2779（2012）-15-0161-03

韩世辉

2012-05-14）

湖南省科技厅资助项目[No：（2009）42]

湖南省自然科学基金（重点）[No：09JJ3064]

湖南省高校创新平台[No：09K059]