一株多重耐药鸡金黄色葡萄球菌的分离鉴定

王 群 （山东省邹平县畜牧兽医局 256200）

金黄色葡萄球菌(MRSA)是自然界中分布最广泛的微生物之一，其致病菌常给人类和动物造成很大的危害。由于长期使用以致滥用抗生素等抗菌药物进行疾病的预防和治疗，葡萄球菌的耐药性不断被强化，耐药株越来越多，对各种抗生素的敏感性越来越差。为防止金黄色葡萄球菌对抗生素耐药性所造成的影响，采集当地发病鸡群分离到的葡萄球菌进行药敏试验，确定敏感药物，为其诊治提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 病料来源 病例来源于滨州某鸡场急性死亡的产蛋鸡和同场发病的鸡。

1.1.2 普通培养基 用市售普通营养琼脂(由普天试剂有限公司生产)经高压灭菌制成。

1.1.3 MH琼脂平板 MH琼脂由泰安博傲生物有限公司提供。

1 .2 试验方法

1.2.1 细菌的分离培养与鉴定 无菌取病料接种到5%绵羊血琼脂培养板中，经37℃培养24h，观察菌落形态、生长情况和溶血现象。将纯培养菌株进行革兰氏染色镜检。依据菌落形态和镜检情况，将分离纯培养的菌株中疑是葡萄球菌属的菌株做生化反应并用标准菌株金黄色葡萄球菌作参照，37℃培养24~72h，观察其生化特性、培养特性，进一步鉴定。

1.2.2 金黄色葡萄球菌溶血型的判定 将分离纯化鉴定好的金葡菌分别接种5%绵羊血琼脂培养板中，37℃培养24h后，观察溶血型，菌落周围有1~2mm宽的草绿溶血环为溶血，菌落周围形成一个2~4mm宽，界限分明、完全透明的溶血环的为溶血，菌落周围形成一个约2mm宽不完全透明颜色较浅的溶血环为溶血，菌落周围没有溶血环的为不溶血。

1.2.3 药敏试验 对已鉴定溶血型的金黄色葡萄球菌用纸片法进行药物敏感试验。所选抗菌药有：万古霉素、庆大霉素、红霉素、链霉素、青霉素G、氨苄青霉素、磺胺、阿莫西林、林可霉素、安灭菌、卡那霉素、先锋霉素V、硫酸新霉素、恩诺沙星、强力霉素、复方新诺明、氟哌酸、头孢氨苄、乙酰螺旋霉素、痢特灵、四环素等21种，均购北京康农兴牧科技发展中心。（1）将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16~18h，挑取菌落悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。调整浊度与比浊管(0.5麦氏单位)相同。（2）用无菌棉拭子蘸取茵液，在管壁上挤压去掉多余菌液，后用棉拭子涂布整个MH培养基表面，反复几次，保证涂布均匀。（3）待平板上的水分被琼脂完全吸收后放置药敏纸片，每个平板等间距放置5张，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在接种后15min内贴完纸片。每种药敏片设3个重复。（4）将平板倒置，37℃培养20h后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径并记录，取其平均值，参考NCCLS判断标准(抑菌圈直径大于20mm，表现为极敏；抑菌圈直径在15~20mm，表现为高敏；抑菌圈直径在10"~14mm，表现为中敏；抑菌圈直径小于10mm，表现为低敏；无明显的抑菌圈，表现为耐药)判断供试菌株的抑菌效果。

附表 药敏纸片对鸡金黄色葡萄球菌的抑菌效果 （mm）

抗生素抑菌圈直径抗生素抑菌圈直径抗生素抑菌圈直径 万古霉素12阿莫西林12强力霉素15 庆大霉素9林可霉素20复方新诺明不明显 红霉素不明显安灭菌8氟哌酸不明显 链霉素不明显卡那霉素10头孢氨苄23 青霉素G15先锋霉素V21乙酰螺旋霉素不明显 氨苄青霉素14硫酸新霉素21痢特灵15 磺胺不明显恩诺沙星18四环素7

2 结果与分析

从表看出，21种抗菌药物中，头孢氨苄、先锋霉素V、硫酸新霉素3种药物的抑菌圈直径大于20mm，对供试菌株表现为极敏；青霉素G、林可霉素、恩诺沙星、强力霉素痢特灵5种药物，抑菌圈直径在15~20mm，对供试菌株表现为高敏；万古霉素、氨苄青霉素、阿莫西林、卡那霉素4种药物，抑菌圈直径在10~14mm，对供试菌株表现为中敏；庆大霉素、安灭菌、四环素3种药物，抑菌圈直径小于10mm，对供试菌株表现为低敏；红霉素、链霉素、磺胺、复方新诺明、氟哌酸、乙酰螺旋霉素6种药物均无明显的抑菌圈，对供试菌株表现为耐药。

（2011–09–16）

S852.61+1

A

1007-1733(2011)12-0041-02