张立世,姜 敏,杨树宝,姜云垒,栾维民

(11吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;21东丰县第三中学,吉林东丰 136300)

鸡盲肠扁桃体组织结构早期发育的动态观察

张立世1,姜 敏2,杨树宝1,姜云垒1,栾维民1

(11吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春 130118;21东丰县第三中学,吉林东丰 136300)

本研究利用HE染色方法结合图像分析软件和数据统计软件,观察雏鸡不同生长发育阶段盲肠扁桃体的组织学发育过程和结构特征。结果表明:随着日龄的增长,盲肠扁桃体特征结构不断发育成熟,并在21日龄时基本达到成熟水平。21日龄时,盲肠扁桃体粘膜层中下部形成生发中心,其数目在35日龄时达到稳定。证实,鸡出壳后初期,盲肠扁桃体免疫功能迅速增强,并在35日龄时达到成熟水平。

鸡;盲肠扁桃体;组织结构;发育

盲肠扁桃体位于直-盲-回肠连接处的盲肠基部,肉眼即可见该处略有膨大,其结构与回肠派氏结相似,由弥散型淋巴组织和密集型淋巴组织组成,是禽类最大的肠相关性淋巴组织[1]。在盲肠扁桃体的生发中心中,既有T细胞存在也有B细胞分布,浆细胞表达表面球蛋白IgG、IgM和IgA[2]。在固有层中部或深部的生发中心周围分布许多CD4+T淋巴细胞,CD8+T淋巴细胞主要分布在上皮下固有层中[3]。盲肠扁桃体作为禽类最大的肠相关性淋巴组织,对肠道内细菌和其它抗原物质起着局部免疫的作用:人为口服感染沙门氏菌后,IgA+和IgM+细胞的数量显著增加[4],并且鸡自然感染沙门氏菌后,盲肠扁桃体中的CD4+、CD8+和CD3+细胞的数量都不同程度的增加[5]。

目前关于鸡盲肠扁桃体组织结构发育的报道较少,虽然以往对特定时期盲肠扁桃体的组织学和免疫学特征有一些研究报道[6-7],但结论都有所不同。本研究旨在采用HE染色方法,观察不同生长发育阶段鸡盲肠扁桃体组织结构的发育情况,从而了解鸡肠相关性淋巴组织特别是盲肠扁桃体发育早期的免疫状态,并为进一步为确定肠道口服免疫的最佳时期和最佳途径的研究打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

海兰白鸡种蛋 (长春净月潭旅游开发区银河养殖场)。

1.1.2 试剂及器具

11主要试剂 伊红,苏木精 (中国医药上海化学试剂公司);冰冻切片用OCT组织包埋液 (美国Sakura公司)。

21器具 依爱EIF/C1DME3456出雏机/孵化机,Olympus CX41显微镜,Leica CM1850冰冻切片机,Pixera pro150ES图像采集器;Image-pro express 511图像分析软件 (美国Media Cybernetics公司)。

1.2 方法

1.2.1 取材

分别选择15、18、20日鸡胚及1、4、7、14、21、35、56日龄雏鸡,每个时期取5只鸡 (胚)的盲肠扁桃体,制成冰冻切片,片厚6μm。-80℃保存备用,以进行HE染色。

1.2.2 冰冻切片HE染色方法

10%甲醛固定1min;蒸馏水洗两次,2min/次;苏木素染色8min;1%盐酸酒精分化20s;自来水返蓝10min;伊红复染30s;梯度酒精脱水:75%酒精20s→85%酒精20s→95%酒精两次 (1min/次) →无水酒精两次 (2min/次);二甲苯透明两次,5min/次;中性树胶封片;照相。

2 结果

胚胎期时,盲肠肠绒毛的粘膜层细胞较稀疏 (图1-a),出壳后1日龄时细胞排列较胚胎期更为紧密,肠绒毛变粗并增长,肠腺也较为明显 (图1-b)。

图1 胚胎时期鸡盲肠扁桃体组织结构的发育

4日龄时,粘膜结构同样发生较大变化,肠绒毛固有层明显增宽、增厚,从而使部分肠绒毛互相融合形成大的粘膜皱襞,而且可以明显观察到在这较大的粘膜皱襞中有大量淋巴细胞聚集,形成密集的淋巴组织(图1-c)。随着日龄增长,肠腺深度和皱襞高度显著增加 (P<0105),并且淋巴组织的面积逐渐增加,盲肠扁桃体的这些特征性结构基本在21日龄时达到稳定 (表1),但生发中心有较大变化。

表1 不同日龄鸡盲肠扁桃体组织结构的变化

21日龄时可观察到由网状细胞包裹的形态结构完整的生发中心,而在21日龄之前并未观察到生发中心的出现。随日龄增长生发中心的直径显著增加 (P<0105),且数目也逐渐增多 (表1),并基本在35日龄时达到稳定。各日龄生发中心大多数分布在粘膜层的中下部区域 (图1-d)。

3 讨论

本课题组此前应用免疫组织化学方法在14日龄时观察到由B淋巴细胞聚集的生发中心,21日龄时在粘膜固有层中下部区域存在轮廓清晰的生发中心[2]。而本研究应用HE染色方法观察14日龄时盲肠扁桃体中未见生发中心,这与Jeurissen等利用一般组织学方法在14日龄时并未发现有生发中心出现相一致[7],但与Hoshi报道的2周龄[8]和 G omez报道的4日龄[9]却存在着差异。

在外周淋巴组织中,生发中心的出现在一定程度上与外界抗原的刺激直接相关[4]。因此,生发中心在盲肠扁桃体内出现的时间及数量的变化在很大程度上受到肠道中正常菌群的种类、出现的时间、数量的多少以及是否被感染感染等多方面因素的影响。另外,鸡的饲养条件、品种和免疫程序等也都是生发中心变化的影响因素。但可以确定的是,盲肠扁桃体中的生发中心基本出现在1至3周龄之间。本研究中试验鸡的饲养环境相对较清洁,受到外界抗原的刺激相对较少,因而组织结构成熟较晚。而Hoshi报道由于试验鸡感染隐孢子虫病,盲肠扁桃体在14日龄时就出现生发中心,而且盲肠扁桃体的组织结构基本发育成熟[8],这说明盲肠扁桃体持续受泄殖腔回流内容物抗原的刺激,从而促进了盲肠扁桃体组织结构的提早成熟。

本研究发现盲肠扁桃体组织结构的发育在出壳之后才比较明显,尤其是在4日龄时,皱襞高度明显增加。至35日龄,各种组织结构基本达到成熟水平,也就证明此时盲肠扁桃体的免疫功能基本成熟,可以提供足够的免疫保护作用。

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[2]杨树宝,张英楠,高晶晶,等.鸡盲肠扁桃体中B淋巴细胞的发育[J].中国兽医科学,2009,39(11):999-1002.

[3]栾维民,杨树宝,杨丽华,等.鸡盲肠扁桃体中T淋巴细胞及其亚群的发育[J].中国兽医科学,2008,38(4):338-341.

[4]Berndt A,Methner U.B cell and macrophage response in chicks after oral administrationof Salmonella typhimurium strains[J].Comp Im2 munol Microbiol Infect Dis,2004,27(4):235-246.

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[6]Bucy R P,Chen CL,CihakJ,et al.Avian Tcells expressing gamma delta receptors localize in the splenic sinusoids and the intestinal ep2 ithelium[J].J Immunol,1988,141(7):2200-2205.

[7]Jeurissen S H,Janse E M,K och G,et al.Postnatal development of mucosa-associated lymphoid tissues in chickens.[J].Cell Tissue Res,1989,258(1):119-124.

[8]Hoshi H,Mori T.Identification of the bursa-dependent and thymus-dependent areas in the tonsilla caecalis of chickens[J].T ohoku J Exp Med.1973,111(4):309-322.

[9]G omez D M,Fonfria J,Varas A,et al.Appearance and development of lymphoid cells in the chicken(Gallus gallus)caecal tonsil[J].Anat Rec,1998,250(2):182-189.

Dynamic Observation on the Early Development of Histological Structure of Cecal Tonsil in Chickens

ZHANGLi-shi1,JIANGMin2,Y ANG Shu-bao1,JIANG Yun-lei1,LUAN Wei-min1
(1.College of Animal Science and Technology,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;2.Dongfeng No.3 Middle School,Dongfeng 136300,China)

This study investigated the development process and structural features of cecal tonsil in chickens of different growth stages by the method of HE staining combining with image analysis software and data statistics software.The findings showed that the characteristic structure are mature gradually with the increase of day old,and reach mature level at 21 days old.The germinal center firstly emerges in the middle and inferior part of mucous at 21 days old,and the number is stable at 35 days old.The results reveal that the cellular immune function of cecal tonsil in chickens are enhanced rapidly after hatch2 ing,and reach mature level at 35 days old.

chicken;cecal tonsil;histological structure;development

S831

A

1008-178X(2011)02-0072-03

2010-10-09

国家自然科学基金资助项目 (30901065)。

张立世 (1982-),男,陕西榆林人,吉林农业大学动物科学技术学院助理实验师,从事动物形态和鸟类生态学研究。