韩 峰 周亚丽

1.内蒙古食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020；2.内蒙古自治区赤峰市红山区中医院，内蒙古 赤峰 024000

富马酸比索洛尔为新一代选择性β1受体阻滞剂，它具有选择性高、药理作用强、药效持续时间长及毒副作用小等优点。目前已在国内外广泛用于高血压、心绞痛及其他心血管疾病的治疗，疗效确切、安全性好。

1 实验与方法

1.1 试剂试药

富马酸比索洛尔对照品，纯度：99.7%；酒石酸美托洛尔对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号：100084-200101；富马酸比索洛尔片：市售，规格为5 mg/片。试验用水为纯化水，甲醇为色谱纯；其他试剂为AR级。

1.2 仪器及设备

Agilent 1100液相-质谱联用仪，柱温箱、四极杆质谱检测器。色谱工作站：Agilent Chem Station。

1.3 受试者及标本采集

健康成年男性19例。在受试前两周内未服过任何药物，无食物和药物过敏史，均为自愿参加试验。

受试者禁食过夜后于次日晨7：00空腹给药，用温开水送服，服药后4 h统一进食。口服药物前抽取空白血样4 mL，在服药后的 0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、14、24、36、48 h 分别采集静脉血 4 mL。

1.4 质谱条件

离子检测方式：选择性离子检测（SIM）；离子极性：正离子（positive）；离子化方式：气动辅助电喷雾离子化（ESI）；比索洛尔，[M+H]+离子，m/z 326.4；内标：美托洛尔，[M+H]+离子，m/z 268.4；传输区电压：70 V；干燥气流速：10 L/min；雾化室压力：40 psig；干燥气温度：350 ℃。

1.5 血浆样品的处理

于10 mL离心管中精密加入血浆样品1 mL，内标溶液（0.5040 μg/mL）50 μL，旋涡，加入 1M 氢氧化钠 100 μL，旋涡，加入乙酸乙酯5 mL，旋涡1 min，于4000 r/min离心5 min，取上层有机相转移至另一10 mL离心管中，于40 ℃水浴中氮气流吹干。残渣用100 μL流动相溶解，于16000 r/min离心3 min，吸取上清液进样10 μL，进行HPLC-MS分析。

1.6 方法学考察

1.6.1 标准曲线的制备 取10 mL离心管数支，分别精密加入不同量的比索洛尔对照品溶液后以氮气流吹干，加入空白血浆1 mL，旋涡，配成含比索洛尔的浓度分别为0.05071、0.09961、0.2998、0.9980、2.990、9.980、29.81，59.66，119.6 ng/mL 的标准含药血浆，计算比索洛尔As和内标Ai的比值（=As/Ai）。以血浆中比索洛尔浓度对比索洛尔峰As和内标Ai的比值进行线性回归，结果表明，在0.0507～119.6 ng/mL浓度范围内线性良好， 回归方程 = 0.0007099+ 0.04300C，r=0.9981，最低定量限为0.0507 ng/mL。

1.6.2 准确度及精密度试验 按标准曲线的制备方法配制含比索洛尔浓度分别为0.1494、14.94、99.60 ng/mL的低、中、高3种浓度的标准含药血浆，按标准曲线方法分别处理测定，分别精密加入不同量的比索洛尔对照品溶液，以氮气流吹干，精密加入1 mL空白血浆，旋涡30 s混匀，配成含比索洛尔浓度分别为0.1494、14.94、99.60 ng/mL的含药血浆，按标准曲线方法分别于日内和日间处理测定，并计算日内和日间精密度（n=5）。本研究建立的血药浓度测定方法准确度在93.6%～108.8%范围内，精密度RSD均不大于7.0%。

1.6.3 样本稳定性考察 按标准曲线的制备方法配制含比索洛尔浓度分别为0.1494和99.60 ng/mL的含药血浆，每种浓度各配制适量，然后每种浓度分取12份，每份1 mL。3份于配制好后按“血浆样品的处理”项下操作立即分析；3份于室温放置8 h后分析；3份于配制好后放入冰箱冰冻后取出化冻，反复冻融后分析；3份于配制好后放入冰箱中于-20℃冷冻保存4周后取出化冻，按“血浆样品的处理”项下操作分析，考察反复冻融条件下稳定性。结果表明，比索洛尔血浆样品在上述条件下稳定性均良好。

1.6.4 提取回收率试验 配制成0.1494、14.94、99.60 ng/mL的三种浓度的标准含药血浆，按1.6.3项下操作，进样。另取对照品溶液配制成浓度相同的比索洛尔标准样品进样。求得相应的提取回收率，平均回收率为94.6%，RSD=3.9%。

1.6.5 质量控制 在每批血浆样品测定的同时建立相应的标准曲线（即随行标准曲线）及质控样品，随行标准曲线的配制方法见“标准曲线的制备”项下，质控样品为含比索洛尔浓度分别为0.1494、14.94、99.60 ng/mL的标准含药血浆，每批血浆样品的浓度数据用随行标准曲线求得。在血浆样品测定过程中，于每日平行测定低、中、高3个浓度的质控样品，其测得值均维持在对应真实值的±20%范围内。

2 讨论

本试验中采用的参比药物为进口的富马酸比索洛尔片，并为原研发单位，在国内外同类上市的产品，占主导地位，其质量稳定可靠。试验方法采用两制剂双周期交叉试验设计，抵消了试验周期和个体差异对试验结果的影响。4批随行标准曲线的相关系数均达到0.997，质控样品均在真实值的基础加减20%，因此本试验的结果供试制剂与参比制剂生物等效的结论是可以信服。通过本方法质量控制实验，说明提取方法可行，能够考察人体内的药物代谢情况。

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