王青 蔡永梅 魏军 陈耀平

浸润性子宫颈癌(invasional cervical cancer，ICC)是严重威胁妇女健康的最常见的恶性肿瘤之一，发病率和病死率都较高。我国每年有新发病例近10万［1］并呈现年轻化趋势，病死人数3万～5万。癌前病变筛查及早期诊断是降低ICC发病率和病死率的关键，也是治疗宫颈癌及预后监测的有效手段。近年来研究表明，高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomaviruses，HR-HPV)持续性感染是宫颈癌前病变和宫颈癌发生发展的主要因素［2］。巴氏涂片细胞学检查作为宫颈癌筛查的方法已运用50多年，明显降低了宫颈癌的病死率，但由于受取材、涂片、阅片等因素影响假阴性率较高，有文献报道为20% ～40%［3］。本研究通过采集宫颈病变患者子宫颈上皮脱落细胞，采用第二代杂交捕获实验(hybrid captureⅡ，HC-Ⅱ)检测HR-HPV感染，并使用新柏氏液基薄层细胞学检测系统(Thinprep Cytologic Test，TCT)进行细胞学检查;旨在探讨宫颈病变各阶段中HR-HPV的感染情况;并运用统计学分析，对TCT细胞学检查和HC-Ⅱ检测HR-HPV感染两种方法的敏感度和特异度进行评价，为临床提供更为准确可靠的宫颈癌筛查依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2008年1月至2009年6月在宁夏医科大学附属医院就诊的宫颈病变患者159例，年龄26～75岁;除外先天性遗传病、妊娠、生殖道急性炎症和严重内科疾病患者。病理学分组：采用2007年WHO宫颈癌病理分类标准，依据病理诊断结果分为正常、宫颈炎、子宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌(squamous cell carcinoma，SCC)六组。细胞学检查采用2001年子宫颈细胞学Bethesda报告系统(The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology，TBS)诊断标准，将TCT细胞学检查结果分为六类：正常范围(within normal limit，WNL)、意义不明的非典型鳞状上皮增生(atypical squamous cell of undetermined significance，ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions，LSIL)、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL)和鳞癌。

1.2 研究方法

1.2.1 HC-II方法检测HR-HPV DNA 使用美国Digene公司生产的DML 2000杂交捕获系统，可以一次性精确地检出13 种 HR-HPV 病毒亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。用专门HC宫颈采样器采集标本，常温下可保存两周;如在1周后进行检测，标本于-20℃可保存3个月。通过裂解、杂交、捕获、反应、冲洗和信号收集等步骤，在DML2000系统上进行判读，分析演绎结果。参考范围为0～1.00 pg/ml，检测结果大于1.00 pg/ml时，判定HR-HPV DNA检测阳性，表示存在HR-HPV感染。

1.2.2 TCT细胞学检查 使用意大利HOSPITEX公司生产的Cyto Fast赛涂液基薄层制片系统进行细胞学检查。使用TCT检查专用采样器采集子宫颈细胞标本后置入保存液中进行漂洗，获得全部细胞标本，常温下标本可保存2周。经过标本预处理、液基薄层细胞制片、染色和透明封固后，采用2001TBS描述性分类诊断系统进行阅片。

1.2.3 统计学方法 应用SPSS 11.5软件进行数据分析，多个样本率的比较采用检验，以P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 HR-HPV在宫颈病变各阶段中的感染情况 HR-HPV的感染率随着宫颈病变程度的加重而升高，各组HR-HPV感染率与正常组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);HR-HPV感染率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ各阶段中逐步增高，各组感染率经检验，差异无统计学意义(P ＞0.05)，=5.473，P=0.065;见表1。

2.2 TCT细胞学与病理学检查结果比较 以病理学诊断为金标准，TCT细胞学检查为LSIL的检出率为50.00%(9/18);HSIL的检出率为53.33%(40/75);鳞癌的检出率为83.33%(15/18)。TCT细胞学检查为ASCUS的17例中，病理学诊断为CIN者12例，占70.59%(12/17);CINⅡ/Ⅲ为7例，占41.18%(7/17);见表 2。

2.3 HC-II方法检测HR-HPV感染和TCT细胞学检查两种方法筛查高级别CIN(CINⅡ/Ⅲ)的比较 在高级别CIN中，HC-Ⅱ检测HR-HPV感染的灵敏度为86.67% 、特异度为51.19%;TCT细胞学检查的灵敏度为53.33%、特异度为89.29%，见表3。

表1 宫颈病变各阶段中HR-HPV感染的比较

表2 TCT细胞学与病理学检查结果比较

表3 两种方法筛查高级别CIN(CINⅡ/Ⅲ)的比较(%)

3 讨论

宫颈癌是引起女性死亡最常见的、对社会和家庭影响极大的恶性肿瘤，属于多病因、多因素、多阶段性的疾病，其发病机理目前尚不明确。宫颈癌的发病是从正常宫颈→宫颈上皮内瘤变→宫颈癌的一个渐进过程，存在较长的可逆转的癌前病变期。研究证明未经治疗的宫颈癌前病变的自然病程可表现为三种结局，即病变消退、持续不变或病变进展，及时发现早期宫颈癌，并进行恰当的处理，其治愈率几乎达100%［4］。因此，宫颈癌是一种可以预防和治愈的疾病，其筛查和预防具有重要意义。

1996美国FDA批准了改良的制片技术-液基薄层细胞学检测系统，避免了细胞易随器材丢失、过度干燥的假象;使上皮细胞与粘液、血液等分离，制成薄层涂片后具有异常细胞易于被辨认等优点，成为国内外妇产科宫颈阴道细胞学疾病检查的常规方法［5］。本研究结果显示：LSIL检出率为50.00%(9/18);HSIL检出率为53.33%(40/75);鳞癌检出率为83.33%(15/18)。TCT细胞学检查为ASCUS的结果，并不代表单一的诊断，它可以提示HPV感染、CIN、甚至是宫颈癌，也可能与炎症或制片质量有关，因此，筛查出ASCUS并进一步予以诊断，找出其中潜在的高度病变，在宫颈癌筛查中具有重要意义。以上结果说明，仅凭细胞学检查，很难完全达到早期筛查的目的，需要结合其他方法检查。

自1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒颗粒以来，目前世界上已发现120余种HPV，其中30多种与宫颈病变有关。HR-HPV有16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82 等 15 种，主要导致CINⅡ、Ⅲ和宫颈癌的发生，尤其是 HPV16和18型［6］，HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。本研究结果证实了HR-HPV感染对于CIN和宫颈癌有着高度的一致性，是宫颈癌发生的必要因素;同时以组织病理学诊断为金标准方法，对TCT细胞学检查和HC-Ⅱ方法检测HR-HPV两种方法筛查高级别CIN(Ⅱ/Ⅲ)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值进行比较，研究表明，HC-Ⅱ检测HR-HPV感染的灵敏度和阴性预测值高于TCT细胞学检查，而TCT细胞学检查的特异度和阳性预测值，两者联合检查可增加高级别CIN的检出率，从而有效预防和减少宫颈癌的发生，在临床诊断和治疗中有重要的应用价值。

［1］李广灿，张玉玲，张敏.1999～2002年全球癌症发病与死亡趋势分析．中国肿瘤，2008，17(8)：646-649．

［2］Walboomers JM，Jaclbs MV，Manos MM，et al.Hunman papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical worldwide．Pathol，1999，189：12-19．

［3］邬素芳，王薇，何福仙，等.宫颈癌早期诊断4种方法的比较和意义．中国实用妇科与产科杂志，2004，20(10)：612-614．

［4］Schiffman MH，Brinton LA.The epidemiology of cervical carcinogenesis．Cancer，1995，76(10 Suppl)：1888-1901．

［5］Bernstein SJ，Ramos LS，NdubisiB.Liquid-based cercical cytologic smear study and conventional Papanicolaou smears．AM J Obstet Gynecol，2001，85(2)：308-317．

［6］Woodman C B，Stuart Collins，Heather Winter，et al.Natural history of cervical human papillomaviruses infection in young women：alongitudinal cohortstudy．Lancet，2001，357(9271)：1831-1836．