APP下载

HPLC法测定多聚甲醛牙髓失活剂中盐酸可卡因含量

2011-05-21林瑶杨敏茹郭飞燕王荣王晓娟顾宜第四军医大学第三附属医院药剂科西安市7003陕西省新药评审中心西安市70065

中国药房 2011年25期
关键词:可卡因容量瓶制剂

林瑶,杨敏茹,郭飞燕,王荣,王晓娟#a,顾宜#b(.第四军医大学第三附属医院药剂科,西安市 7003;.陕西省新药评审中心,西安市 70065)

盐酸可卡因为局部麻醉药,具有麻醉止痛作用,应用广泛,是常用牙髓失活剂的主要成分,但同时也是一种具有成瘾作用的毒品。多聚甲醛牙髓失活剂主要有效成分为多聚甲醛和盐酸可卡因,具有破坏牙髓神经纤维素及髓鞘,使牙髓细胞坏死和止痛防腐等作用。其与砷失活剂相比,毒副作用小,制剂中盐酸可卡因每次使用量约1.5mg,且在牙髓失活后由操作医师取出,无成瘾性,临床使用多年,安全、方便,作为医院标准制剂收载于《中国人民解放军医疗机构制剂规范》(2002年版)[1]中。该制剂原质量标准中采用分光光度法测定盐酸可卡因含量,但因该制剂基质复杂,萃取步骤多,导致测定结果不稳定。为了更好地控制该制剂的质量,保证用药安全,本文采用高效液相色谱(HPLC)法测定盐酸可卡因的含量,结果表明,所建立的方法简便、灵敏、快速,结果准确、可靠。

1 仪器与试药

LC-2010A HT HPLC仪、UV-VIS检测器、LC-solution工作站(日本岛津公司);A210P电子天平(德国Sartorius公司)。

多聚甲醛牙髓失活剂(第四军医大学第三附属医院制,批号:100301、100402、100709,盐酸可卡因含量:7%);盐酸可卡因对照品(青海制药厂有限公司,批号:20090401,含量:99.8%);甲醇为色谱纯,水为纯化水,三乙胺、磷酸等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18(150mm×4.6mm,5µm);流动相:甲醇-0.5%三乙胺溶液(磷酸调pH值至4.5)=30∶70;检测波长:235 nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:25 ℃;进样量:10 µL。取“2.2”项下对照品、供试品和空白溶液进样分析,结果,盐酸可卡因在上述色谱条件下能有效分离,理论板数大于3000。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品;B.供试品;C.空白;1.盐酸可卡因Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control;B.test samples;C.blank sample;1.cocaine hydrochloride

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液。精密称定干燥至恒重的盐酸可卡因对照品20.26mg,加甲醇溶解并定容至50mL容量瓶中,制成浓度为405.2µg·mL-1的盐酸可卡因对照品贮备液。精密量取该贮备液10mL至50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得浓度为81.04 µg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液。取本品约0.3 g,精密称定,置于锥形瓶中,加甲醇溶解,过滤至50mL容量瓶中,加甲醇冲洗滤渣及锥形瓶,洗液滤过并入锥形瓶中,加甲醇至刻度,精密量取10mL,置于50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.2.3 空白溶液。根据该制剂处方制备不含盐酸可卡因的空白样品,按“2.2.2”项下方法制备空白溶液。

2.3 线性关系考察

分别精密量取对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0mL,置于25mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,进样10µL,按“2.1”项下色谱条件测定盐酸可卡因峰面积,以盐酸可卡因浓度(c)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程A=23006c+418.4(r=0.9997)。结果表明,盐酸可卡因检测浓度线性范围为16.208~129.664µg·mL-1。

2.4 精密度试验

精密吸取“2.2.1”项下制备的对照品溶液10µL,重复进样6次,测得盐酸可卡因峰面积的RSD为1.15%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密吸取“2.2”项下制备的对照品溶液及供试品溶液,各进样10 µL,考察其在0、2、4、8、12、24h内的稳定性,各进样6次。结果对照品峰面积的RSD为1.58%,供试品峰面积的RSD为1.18%(n=6),表明对照品和供试品溶液在24h内基本稳定。

2.6 重复性试验

取样品(批号:100709)6份,精密称定,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,进样10µL。计算得盐酸可卡因的平均含量为7.003%,RSD为1.36%(n=6),表明此方法重复性好。

2.7 加样回收率试验[2]

精密称定本品0.3 g,置于锥形瓶中,分别精密加入相当于所称样品中盐酸可卡因理论含量(经测定,批号为100709的样品中盐酸可卡因含量为7.003%)80%、100%、120%的盐酸可卡因对照品,每个浓度制样3份,共9份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,进样、测定,计算回收率及RSD,结果见表1。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery tests

2.8 样品含量测定

取3批多聚甲醛牙髓失活剂样品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样10µL测定,记录色谱,按外标法计算含量。结果,3批样品中盐酸可卡因含量分别为7.164%、7.029%、7.011%(分别为标示量的102.34%、100.41%、100.16%),平均含量为7.068%(为标示量的100.97%)。

3 讨论

盐酸可卡因的测定方法有非水滴定法、间接原子吸收分光光度法、旋光法、毛细管区带电泳法、三阶倒数光谱法、一阶导数光谱法等[3~8]。因上述方法操作复杂,计算方法烦琐,本文选择操作过程简便、直观、快捷的HPLC法测定制剂中盐酸可卡因含量。根据文献[9],盐酸可卡因在235 nm波长处有较大吸收,经测定在该波长下盐酸可卡因检测灵敏度高,故选择235 nm为检测波长。该文献应用流动相0.04 mol·L-1磷酸盐缓冲液(含有0.26mmol·L-1四丁基铵盐,pH3.2)-乙腈=83∶17测定动物血清中可卡因的含量。另有文献[10]采用流动相为乙腈-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用0.1 mol·L-1氢氧化钾溶液调节pH值至4.6)=40∶60,测定可卡因类似物盐酸辛可卡因的含量。笔者试用上述流动相,但即使调整各流动相组分比例,效果也均不是很理想,且成本较高。考虑到可卡因为含氮碱性化合物,在流动相中添加扫尾剂三乙胺可改善峰形,经试验不同比例三乙胺和pH值,最终采用甲醇-0.5%三乙胺溶液(磷酸调pH值至4.5)=30∶70作为流动相,结果所得峰形、理论板数、分离度等均较好。试验中发现,制备对照品、供试品溶液,用水为溶剂时稳定性不好,溶液放置8 h浓度下降约8%。考虑到盐酸可卡因在甲醇中溶解度也较好,因此采用甲醇作溶剂,以克服溶液稳定性差的问题。另外,试验中发现,进样量大于12µL时,峰形开始变差,进样量为20µL时,峰形难以确认,但原因不明,因此,本文试验选用进样量为10µL。

[1]中国人民解放军总后勤部卫生部编.中国人民解放军医疗机构制剂规范[S].2002年版.北京:人民军医出版社,2003:278.

[2]吴 阳,郭伟英.HPLC法同时测定黄连羊肝丸中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国药房,2010,21(36):3442.

[3]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010:645.

[4]李先强.间接原子吸收分光光度法测定盐酸可卡因的含量[J].理化检验-化学分册,1992,28(6):366.

[5]李 君,张良志,邓文章.旋光法测定盐酸可卡因溶液的含量[J].中国药学杂志,1993,28(1):30.

[6]霍秀敏.毛细管区带电泳法分离八种成瘾药物[J].西北药学杂志,1995,10(2):54.

[7]原永芳,袁 芳,黄 瑾,等.三阶倒数光谱法同时测定鲍宁氏液中盐酸可卡因和苯酚的含量[J].华西药学杂志,2000,15(5):375.

[8]杨翰春,原永芳,王增福.牙髓失活剂的制备及质量标准的研究[J].总装备部医学学报,2003,12(3):45.

[9]孙 林,宋 君,何 威,等.高效液相色谱法测定小鼠血清中可卡因的含量[J].中国法医学杂志,2002,17(3):165.

[10]黄 澜,黄剑英.HPLC法测定复方聚甲酚磺醛软膏中盐酸辛可卡因的含量[J].海峡药学,2008,20(8):48.

猜你喜欢

可卡因容量瓶制剂
谈如何降低容量瓶的容量误差
中草药制剂育肥猪
配制一定物质的量浓度的溶液实验要点剖析
对容量瓶几个实验问题的探讨
高中化学实验探究教学设计实践
可卡因危害大
元胡止痛系列制剂4种工艺比较
固体制剂常用设备清洁验证研究
可卡因成瘾之谜