李世昌，季 浏，马 涛，罗 剑，李珍惜，郑庆云

前言

骨组织的正常生长及更新有赖于骨吸收与骨形成的动态平衡。由破骨细胞作用的骨吸收是骨重建的起点，它可以清除损伤或没有承载功能的骨组织，继而启动由成骨细胞作用的骨形成过程，使骨组织始终处在不断的动态更新过程中。在某些状态下，破骨细胞数量异常及功能紊乱，则发生骨量过分减少的疾病，如骨吸收功能亢进的骨质疏松症等。妇女绝经后骨质疏松症就是由于绝经后雌激素的迅速下降引起的破骨细胞大量生成及活化导致的。

在影响破骨细胞数量及活性的众多因素中，骨组织及骨髓微环境中的细胞因子越来越多地受到研究者的关注，其中，骨保护素（osteop rotegerin，OPG)、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL)和核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB， RANK)是近年来发现的肿瘤坏死因子家族中的3个新成员，也是破骨细胞分化的调节因子，主要存在于人的骨髓及其他部分组织中。在2000年美国骨与矿物质研究协会对它们进行了标准化命名，并统称为OPG-RANKL-RANK系统。成骨细胞及骨髓基质细胞表达的 M-CSF和RANKL，在M-CSF存在的条件下，RANKL与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合后，可促进破骨细胞的分化和激活，并抑制破骨细胞的凋亡，从而促进骨吸收。同时，成骨细胞和骨髓基质细胞表达的OPG一方面，促进破骨细胞凋亡，另一方面，可与RANKL竞争性结合RANK，抑制破骨细胞生成、成熟、终止骨吸收，并通过临近接触的成骨细胞促进骨形成[20]。M-CSF主要由巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞产生，也可由成骨细胞和间充质细胞产生。M-CSF一方面，可以促进骨髓造血干细胞向巨噬细胞/破骨细胞前体细胞的分化，另一方面，它通过与破骨细胞前体上的M-CSF受体结合发挥作用，促进破骨细胞的分化[10]。OPG-RANKL-RANK系统和破骨细胞的形成与活化密切相关，研究发现，许多激素、细胞因子等均通过直接或间接的调节OPG、RANKL和RANK的表达来影响骨代谢[1]。

近年来，有关运动对绝经期妇女骨骼影响的研究逐渐增多，动物和人体实验均表明，适当的运动可以减缓绝经期妇女的骨质流失，从而有效的预防骨质疏松[7，9]。然而运动类型多种多样，不同类型的运动产生的运动负荷不同，对骨的影响也不一样。Rubin等[21]研究发现，给6～8岁Warhill母羊后腿施加低强度、高频（30 Hz)机械刺激（与地面垂直的振动)，每天刺激20 min，5天/周，共1年，结果发现，与对照组相比，接受机械刺激的羊近端股骨的骨小梁密度增加了34.2％（P＜0.01)。此外，经未脱钙骨的组织学检查显示，骨小梁体积增加了32％，骨小梁网格数增加了45％，网格间距减小了36％。这提示每个骨小梁单元的平均宽度增加，并形成了新的骨小梁。Rubin认为，生物力学干预有助于加强骨质。Borer等[12]研究发现，-9°下坡运动组的运动强度虽只有45％˙VO2max，明显低于6°上坡运动组（75％˙VO2max)，但利用足底压力感受仪进行检测后发现，-9°下坡运动组相对于6°运动组能产生更大的足底压力，两组之间有显著差异，而且比较成骨指数（I型胶原羧基端前肽/I型胶原羧基末端肽的比值)， -9°下坡运动组与6°上坡运动组和安静对照组之间有显著差异。统计学分析显示，成骨指数与足底压力之间存在显著相关性。因此，通过对比研究不同的运动方式对骨组织的影响，并以此为依据制定出科学的健骨运动方案就显得尤为迫切。

目前，有关运动与骨健康关系的研究大多数只是停留在骨量、骨结构、骨生物力学指标以及骨代谢生化指标上，在运动对骨组织影响的细胞及分子机制研究则很少涉及，而有关运动对于破骨细胞影响的研究则更少报道。目前国内外仅有的运动对破骨细胞影响的研究，只是通过对体外培养的破骨细胞施加各种力学刺激来推测运动对破骨细胞的影响[16，17]，这与真实的体育运动对体内环境破骨细胞的影响仍有很大的差异。

本研究以去卵巢小鼠模拟妇女绝经后骨质疏松症状，利用破骨细胞原代培养技术，研究在去卵巢小鼠骨质疏松的发生过程中破骨细胞分化的情况，并研究在其发生过程中与破骨细胞分化密切相关的骨组织及骨髓微环境中RANKL、OPG、M-CSF和RANK等因子的基因表达的变化；同时，比较研究上、下坡跑台运动对上述指标的影响。这对于深入揭示绝经后骨质疏松的发病机制及运动干预措施的选择将具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 实验动物

清洁级 C57 BL/6雌性小鼠 64只，约 8周龄，体重21.08±3.89 g（由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供)。动物购回后在本实验中心动物房适应性喂养1周，然后随机分为4组，即假手术安静组（SHAM)，去卵巢安静组（OVX)，去卵巢上坡跑组（OVX+UP)，去卵巢下坡跑组（OVX+DOWN)，每组16只。

1.2 主要试剂与仪器

α-MEM培养基、红细胞裂解液、Versene、SRB染料、TCA固定液、Tris、Citrate Solution、Acid Phosphatase，Leukocyte（TRAP)Kit购自 Sigma公司；刺激因子 M-CSF和RANKL购自R＆D公司；总RNA提取试剂 Trizol购自Invitrogen；氯仿、无水乙醇、异丙醇、DEPC水、戊巴比妥钠购自国药集团化学试剂有限公司；Agarose、Goldview染料购自 GENE company LTD；Gene ruler、PrimeScript RT reagent Kit、SYBR Premix Ex Taq、RNase Inhibitor购自 TaKaRa。台式高速冷冻离心机购自KUBOTA；酶标仪购自Tecan；Leica DM 4000电子显微镜购自Leica；二氧化碳培养箱、NANODROP 2000 spectrophotometer购自 Thermo；电泳槽、电泳仪、普通PCR仪、凝胶成像系统购自 Tanon；Applied Biosystem Step One Real-time PCR仪购自ABI；EW-6000微型离心机购自 EastWin；96孔板、12孔板、6孔板购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

1.3 去卵巢手术

动物以1％戊巴比妥钠（0.1 g/kg)经腹腔麻醉后，剪除长毛，分别在脊柱两侧切开背肌1 cm切口，SHAM组小鼠行去卵巢假手术，仅去除卵巢周围少量脂肪组织，其余3组小鼠均摘除卵巢，用可吸收的羊肠线缝合伤口，在伤口外涂少量红霉素软膏。

1.4 运动方案

SHAM组和OVX组在笼中正常饲养，没有进行任何训练；OVX+UP组和OVX+DOWN组于去卵巢手术后7天开始进行上坡跑或下坡跑训练，训练方案见表1。

表1 运动组小鼠训练方案一览表

1.5 破骨细胞原代培养及检测

于运动组小鼠最后一次训练结束后24 h，断颈椎处死小鼠。取出两侧股骨、胫骨和肱骨，放入 PBS中。用剪刀剪除股骨、胫骨和肱骨两端的关节。用2～3 mlα-MEM培养基、10 ml注射器和27G针头冲洗出骨髓。将骨髓收集在50 m l离心管里，1 000 rpm离心5 min，骨髓细胞集中于离心管底部，以5 ml不完全α-MEM培养基悬浮细胞。加入20 m l红细胞裂解液，上下颠倒若干次，在室温下孵育细胞1～2 min。加入25 ml完全α-M EM培养基（含10％血清)，1 200 rpm离心5 min。用完全α-M EM培养基悬浮细胞，加入5 ng/ml的M-CSF，在10 cm培养皿中培养过夜。收集上层漂浮的骨髓干细胞（造血干细胞)，加入10 ng/m l的M-CSF，在10 cm培养皿中孵育2天，干细胞布满整个培养皿。用 PBS冲洗细胞 2次，加入 3 mlVersene， 37℃孵育10 min，收集干细胞，用5 mlα-M EM培养基中和，离心后用3 m l完全培养基重悬细胞。把收集到的干细胞分成以下两份分别对骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的能力以及巨噬细胞向破骨细胞分化的能力进行检测。

1.将干细胞接种于96孔板，密度为每孔10 000个细胞，加入10 ng/m l的M-CSF培养5天，干细胞将逐渐分化为巨噬细胞（巨噬细胞在M-CSF和RANKL的作用下可继续向破骨细胞前体分化，最终可分化为破骨细胞)，分别在第1、3、5天进行SRB染色，绘制骨髓干细胞生长曲线，以检测骨髓干细胞生长情况。SRB染色具体步骤为：加入25 m l预冷的 TCA固定液，4℃过夜，倒掉 TCA固定液，流水冲洗5遍，风干，加入30μl SRB染料，室温放置10 min，吸取SRB染料，用1％冰乙酸洗5遍，风干，加入100μl 10 mM的 Tris，溶解燃料，轻轻混匀，酶标仪515 nm处测OD值。

2.将干细胞接种于96孔板，密度为每孔8 000个细胞，加入10 ng/ml的M-CSF和50 ng/ml的RANKL培养5天，隔天换液，干细胞将依次分化为巨噬细胞、破骨细胞前体、破骨细胞，5天后进行破骨细胞 TRAP染色，以检测破骨细胞的分化情况。破骨细胞 TRAP染色具体步骤为：配制 TRAP染色固定液和染液，吸去96孔板中的培养基，加入固定液，室温固定30 s，用双蒸水洗3次，加入染液， 37℃摇床30 min，用双蒸水洗3次，Leica DM 4000电子显微镜拍照。

1.6 Real time PCR法测定骨组织 RANKL、OPG、M-CSF和RANK的基因表达

常规方法提取股骨总RNA，逆转录。根据所要检测的目的基因，在NCBI数据库查询各基因引物序列，由上海生工生物技术有限公司进行引物合成，各基因引物序列及扩增长度为：

RANKL：F 5′-CTCACCTCACCATCAATGCTGC-3′， R 5′

-GAAGGGTTGGACACCTGGACGC-3′，扩增长度394 bp；

OPG：F 5′-TCCTGGCACCTACCTAAAACAGCA-3′， R 5′

-CTACACTCTCGGCATTCACTTTGG-3′，扩增长度578 bp；

M-CSF：F 5′-CTGGCGAGCAGGAGTATCAC-3′，

R 5′-TCAGAGTCCTCCCAGGTCAA-3′，扩增长度606 bp；

RANK：F 5′-CTGCTCCTCTTCATCTCTGTG-3′，

R 5′-CTTCTGGAACCATCTTCTCCTC-3′，扩增长度316 bp；

β-actin：F 5′-CAATTCCATCATGAAGTGTGAC-3′，

R 5′-CCACACAGAGTACTTGCGCTC-3′，扩增长度184bp。

荧光定量 PCR扩增反应按照以下体系进行，SYBR Premix Ex Taq TM（2×)10μl、PCR Forward Primer（10 μM)0.4μl、PCR Reverse Primer（10μM)0.4μl、ROX Reference Dye（50×)0.4μl、DNA模板2μl、加 DEPC水使总反应体系达到20μl。Real time PCR分三阶段，扩增采用三步法进行，温度循环参数如下：Stage 1（1×)：95℃，1 min（预变性)。Stage 2（40×)：95℃，15 s；61℃，30s； 72℃，45 s（收集荧光)。Stage3（1×)：建立 PCR产物的熔解曲线，95℃，30 s；61℃，2 min；95℃，15 s；每1℃收集荧光。反应结束后，PCR仪给出各反应孔的Ct值，以β-actin基因为内参，根据公式2-ΔCt计算各基因的相对表达量。

1.7 统计学方法

2 实验结果

2.1 各组小鼠骨髓干细胞生长曲线

向骨髓干细胞中加入10 ng/ml的M-CSF后，干细胞将逐渐分化为巨噬细胞，如图1所示，在加入M-CSF后，各组小鼠骨髓干细胞向巨噬细胞分化的速度不同：当细胞培养至第3天时，OVX组干细胞分化数量已明显大于SHAM组，而且具有非常显著性差异（P＜0.01)，两运动组干细胞分化数量明显小于OVX组（P＜0.05)，但仍大于SHAM组（P＜0.05)，两运动组之间的干细胞分化速度没有显著性差异；当细胞培养至第5天时，OVX组干细胞分化数量仍然明显大于SHAM组，而且具有非常显著性差异（P＜0.01)，两运动组干细胞分化数量明显小于OVX组（P＜0.01)，但仍大于 SHAM组（P＜0.01)，而两运动组之间相比，OVX+DOWN组比OVX+UP组干细胞分化数量显著减少（P＜0.05)。

图1 各组小鼠骨髓干细胞生长曲线图

2.2 不同方式跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化的影响

图2为破骨细胞 TRAP染色结果，从图中可以看出，破骨细胞是一种空泡状、类似巨噬细胞的细胞。在空泡状的破骨细胞中颜色较深处为破骨细胞的多个细胞核聚集的部位。破骨细胞的多个细胞核聚集在一起并极化到破骨细胞的一侧，而不是在中央位置，而正是由于破骨细胞的这种空泡状和极化的结构为其发挥骨吸收的功能奠定了形态学基础。在本研究中，向骨髓干细胞中加入10 ng/ m l的M-CSF和50 ng/m l的RANKL继续培养，干细胞将依次分化为巨噬细胞、破骨细胞前体、破骨细胞。如图2和图3所示，在加入M-CSF和RANKL 5天后进行TRAP染色并对破骨细胞计数，结果显示，各组小鼠骨髓干细胞向破骨细胞分化的速度明显不同：OVX组破骨细胞数量明显大于SHAM组（P＜0.01)；两运动组破骨细胞数量明显小于OVX组（P＜0.05)，但仍大于 SHAM组（P＜0. 05)；两运动组之间相比，OVX+DOWN组破骨细胞数量明显小于OVX+UP组（P＜0.05)。

图2 各组小鼠破骨细胞分化的形态图（×400倍)

图3 各组小鼠破骨细胞分化的计数图

2.3 OPG-RANKL-RANK系统各因子mRNA相对表达量

OVX组与SHAM组相比较，则OVX组比SHAM组RANKL、M-CSF和RANK mRNA的相对表达量均显著升高（P＜0.01)；而OPG mRNA的相对表达量显著下降（P＜0.01)。两运动组与OVX组相比较，则OVX+UP组比OVX组的RANKL mRNA相对表达量显著性降低（P＜ 0.01)，而OPG相对表达量显著性升高（P＜0.05)，OVX+ UP组与OVX组的M-CSF和RANK mRNA相对表达量没有显著性差异（P＞0.05和P＞0.05)；OVX+DOWN组比OVX组的RANKL和M-CSFmRNA相对表达量显著性降低（P＜0.01和P＜0.05)，而OPG相对表达量显著性升高（P＜0.01)，OVX+DOWN组与OVX组的RANK mRNA相对表达量没有显著性差异（P＞0.05)。两运动组之间相比较，则OVX+DOWN组比OVX+UP组的RANKL和M-CSFmRNA的相对表达量显著降低（P＜0.05和P＜0.05)，而 OPG mRNA的相对表达量显著升高（P＜ 0.01)，两运动组之间的RANK mRNA的相对表达量没有显著性差异（P＞0.05)（图4)。

图4 OPG-RANKL-RANK系统各因子m RNA相对表达量示意图

3 分析与讨论

3.1 不同方式跑台运动对去卵巢小鼠骨髓干细胞生长的影响

巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF)主要由巨噬细胞、内皮细胞和成纤维细胞产生，也可由成骨细胞和间充质细胞产生，它既是破骨细胞分化早期的关键调节因子，也是破骨细胞增殖分化的必要条件[10]。M-CSF通过与破骨细胞前体上的M-CSF受体（c-fms)结合发挥作用。实验发现，缺乏M-CSF的大鼠由于缺少破骨细胞出现骨骼硬化症；而过度表达M-CSF的基因改造鼠则由于破骨细胞数目增多，出现严重的骨量减少[15]。破骨细胞来源于骨髓造血干细胞，在M-CSF和核因子κB受体活化因子配体（RANKL)等细胞因子的刺激下，造血干细胞可向巨噬细胞分化、融合并最终形成破骨细胞[19]。本研究向含有骨髓干细胞的培养基中加入M-CSF进行刺激，培养过夜后，上层漂浮的骨髓干细胞即为造血干细胞，而下层的贴壁细胞主要是骨髓基质细胞（在某些刺激条件下可分化为成骨细胞)。对收集到的造血干细胞继续加入M-CSF进行刺激，造血干细胞将逐渐分化为巨噬细胞（巨噬细胞在 M-CSF和RANKL的作用下可继续向破骨细胞前体分化，最终可分化为破骨细胞)[22]。通过SRB染色，检测造血干细胞向巨噬细胞分化的不同时段的光密度，就可以了解各组小鼠骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的能力，并预示着进一步向破骨细胞分化的能力。

本研究的结果显示，OVX组骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的数量明显大于SHAM组，这说明小鼠去卵巢手术后，由于雌激素的迅速下降，导致骨髓造血干细胞向巨噬细胞大量分化，这是破骨细胞大量形成和发挥骨吸收作用的前提条件，大大增加了骨质疏松症的发病几率；而两运动组骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的数量明显小于OVX组，但仍大于SHAM组，说明跑台运动可以有效地抑制小鼠去卵巢后骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的能力，对于雌激素缺乏引起的骨质疏松症可以起到有效的预防作用，但仍不能达到正常水平；两运动组之间相比，OVX+ DOWN组比OVX+UP组骨髓造血干细胞向巨噬细胞分化的数量明显减少，说明在预防雌激素缺乏引起的骨质疏松症方面，下坡跑运动比上坡跑运动更有效。

3.2 不同方式跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化的影响

破骨细胞来源于骨髓造血干细胞，其具体分化过程为：造血干细胞在M-CSF的作用下，可分化为巨噬细胞，而巨噬细胞在M-CSF和RANKL的共同作用下可分化为破骨细胞前体并继而分化为破骨细胞（图5)[13]。

本研究将各组小鼠造血干细胞进行培养，在M-CSF和RANKL的共同刺激下，造血干细胞将逐渐分化为破骨细胞，5天后进行破骨细胞 TRAP染色，对各组破骨细胞进行计数，就可以检测各组小鼠造血干细胞向破骨细胞分化的能力。本研究结果表明，去卵巢手术组由于雌激素的迅速下降，使骨髓造血干细胞向破骨细胞分化的能力大大增加，破骨细胞形成增多，预示着发生骨质疏松症的危险性大大增加；而跑台运动可以有效地抑制去卵巢手术所引起的造血干细胞向破骨细胞分化能力的增强，对雌激素缺乏引起的破骨细胞大量分化起到有效的抑制作用，大大降低了发生骨质疏松症的危险性，且下坡跑运动的效果优于上坡跑运动。

3.3 不同方式跑台运动对去卵巢小鼠骨组织 OPGRANKL-RANK系统的影响

OPG-RANKL-RANK系统是调节破骨细胞分化和骨吸收功能发挥的一个重要信号通路，研究发现，许多激素和细胞因子都是通过影响这条通路，从而间接的参与调节骨代谢的。此外，OPG-RANKL-RANK系统还是联系成骨细胞与破骨细胞之间通讯的重要纽带，成骨细胞及骨髓基质细胞表达OPG和RANKL，RANKL可与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合，从而促进破骨细胞的分化和激活，并抑制破骨细胞的凋亡；而OPG一方面，促进破骨细胞凋亡，另一方面，可与RANKL竞争性结合RANK，抑制破骨细胞分化和骨吸收，并通过临近接触的成骨细胞促进骨形成[18]。许多激素和细胞因子正是通过调节成骨细胞RANKL和OPG的分泌，从而参与调节破骨细胞的形成和功能发挥的。M-CSF在破骨细胞的分化和骨吸收的过程中发挥重要作用，骨髓造血干细胞向巨噬细胞/破骨细胞前体细胞的分化需有M-CSF的存在，同时， RANKL与破骨细胞前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合也离不开M-CSF的作用。实验发现，缺乏M-CSF的大鼠由于缺少破骨细胞出现骨骼硬化症；而过度表达MCSF的基因改造鼠则由于破骨细胞数目增多出现严重的骨量减少[15]。

运动训练对于骨代谢的影响，主要是通过骨组织受到的应力、激素的分泌、运动造成营养吸收的改变等方面来发挥作用的，其中骨组织在运动过程中受到的应力对骨代谢的影响作用最明显[5，23]。骨组织在运动过程中受到地面的反作用力以及骨骼肌施加的各种应力，骨细胞感受到这种应力，通过机械―化学偶联将机械信号转变为化学信号来发挥作用。遍布于整个骨陷窝—骨小管网络内的骨细胞是骨的初级机械感应细胞，骨细胞通过间隙连接与骨表面细胞和临近骨细胞保持信息联系，他们对机械刺激的反应是加快代谢、激活基因和产生生长因子和基质等[6，8]。机械信号转化为化学信号是多个信号转导途径的共同结果，可导致骨细胞膜或细胞骨架水平被激活[11]，如切应力激活 G蛋白偶联的机械刺激感受器，可引起胞内钙、前列腺素（Prostaglandin，PG)和一氧化氮水平的提高。一氧化氮和前列腺素 E2（Prostaglandin E2，PGE2)作为中间信号，参与将机械信号转化为生化信号过程，引起机体多种激素和细胞因子发生变化，这些激素和细胞因子相互调节并构成一个复杂的网络系统，最终直接或间接地通过OPGRANKL-RANK系统调控骨代谢[3]。在 Kobayashi Y等人[14]的活体实验中，利用正畸矫正器对大鼠上颌磨牙施加应力，结果发现，应力导致骨吸收向骨形成的转换，使破骨细胞发生程序性死亡，同时原位杂交实验显示，在应力末端的骨表面OPGm RNA的表达增加。

本研究的结果表明，与OVX组相比，OVX+UP组比OVX组RANKL mRNA相对表达量显著性降低，而OPG相对表达量显著性升高；OVX+DOWN组比OVX组RANKL和M-CSFmRNA相对表达量显著性降低，而OPG相对表达量显著性升高。这表明，跑台运动对骨组织起到了较好的刺激作用，骨组织在运动过程中受到了较理想的应力，通过机械—化学偶联将机械信号转变为化学信号，使骨组织局部RANKL和M-CSF基因表达降低，而OPG基因表达升高，从而改善了雌激素缺乏导致的骨代谢失衡，部分阻止了骨量的下降。两运动组之间相比较，则OVX+DOWN组比OVX+UP组RANKL和M-CSF mRNA基因的相对表达量显著降低，而OPG基因的相对表达量显著升高。表明在改善雌激素缺乏引起的骨代谢失衡方面，下坡跑运动比上坡跑运动的效果更显著。另外，两跑台运动组与OVX组之间以及两跑台运动组之间的RANK基因的相对表达量均没有显著性差异，说明跑台运动对骨组织RANK基因的表达没有显著性影响，RANK基因表达量变化可能不是一个限制因素；运动对于骨组织OPG-RANKL-RANK系统的影响主要是通过改变OPG、RANKL和M-CSF等因子的基因表达实现的。

3.4 不同方式跑台运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化影响的对比分析

通过对比上坡跑运动与下坡跑运动对去卵巢小鼠破骨细胞分化及OPG-RANKL-RANK系统的影响，本研究发现，上、下坡跑台运动对去卵巢引起的破骨细胞的分化具有较好的抑制作用，且下坡跑运动比上坡跑运动具有更好的效果，究其原因，主要是上坡跑运动和下坡跑运动在运动时对于骨的力学刺激不同。下坡跑运动每一步跑动在下落过程中所克服的垂直方向的冲量比上坡跑运动大，其骨组织所受到的地面应力也比上坡跑运动大。此数据结果与原因分析在本实验室前期已发表论文中已有阐述[3]，这里就不再详细展开。另外，此结果和本实验室前期有关纵跳运动对于骨密度影响的研究结果相吻合[2，4]。

4 结论

1.跑台运动通过改变骨组织OPG-RANKL-RANK系统相关因子的基因表达，可有效抑制小鼠去卵巢后破骨细胞的大量分化，从而有利于预防骨质疏松症的发生。

2.下坡跑运动比上坡跑运动对于小鼠去卵巢后破骨细胞分化的抑制作用更有效，这主要是由于两种运动方式在运动中骨组织所受到的应力不同所致。

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