高丽杰,马兰芝,李 纲

（1.解放军总医院肝胆外科研究所,北京 100853;2.军事医学科学院实验动物中心;3.军事医学科学院生物安全中心实验室）

食蟹猴肾移植模型经过一定的显微外科训练后,可以获得较高的成功率,在技术上是成熟的。但术后并发症:如血栓、尿漏、输尿管梗阻、出血等也有着较高的发生率,其中尿漏与血栓发生都是几率比较大的,而且与发生血栓一样,发生尿漏对实验结果的影响也是非常严重的,一旦发生尿漏,必须尽快加以甄别,尽早进行诊断和治疗,否则会造成移植肾肾功能的损害,导致动物模型的失败,影响实验结果。本文旨在探讨尿漏形成的原因,总结手术成功与失败的得失,避免尿漏的形成,提高食蟹猴肾移植模型的成功率。

1 对象和方法

1.1 实验动物 食蟹猴154只,雄性,年龄3-5岁,体重（4.3±0.69 kg）。普通级,动物生产许可证号SCXK（军）2002-001,由军事医学科学院实验动物中心提供。

1.2 实验动物的选择 雄性食蟹猴,体重在3-6 kg。乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、猿猴免疫缺陷病毒（SIV）、及B病毒（BV）阴性。手术开始前对动物进行血型配对,以及混合淋巴细胞反应（MLR）大于2.5的动物互相配对。

受体和供体的配对:为了避免因为血型不配,造成溶血或术后血栓,在术前按照交叉配血的方法进行血型配对,供体红细胞与受体血清反应,受体红细胞与供体血清反应,只有正负交叉反应均为阴性,且混合淋巴细胞反应（Mixed Lymphocyte Reaction,,MLR）大于2.5的两只动物互相配对。

1.3 手术方法 配好型的两只动物互为供体和受体。使用盐酸氯胺酮和速眠新Ⅱ各0.1m l/kg肌注麻醉[1]。供体左肾被摘除,保留一段长的肾动脉、肾静脉和输尿管。供体肾摘除后使用4℃的Euro-Ccollins灌注并保存,时间不超过30 min。用8-0的缝合线将供体肾动脉端侧缝合到受体腹主动脉,供体肾静脉缝合到受体下腔静脉。8-0尼龙线将供体输尿管与受体右侧输尿管端端吻合,采用间断缝合。缝合完成后摘除受体右肾。关闭腹腔。使用抗生素预防感染,使用止痛剂预防应急过度反应。

2 结果

本次实验当中,为了有一个统一的判定标准,以动物的血液肌酐值为判定是否出现肾功能受损的标准,当肌酐值大于10mg/dl时即认为出现肾功能损害,处死动物进行尸检,探求受损原因。在180例动物当中,有术后并发症的共有24例,大多会出现肌酐值的突然升高,最后经尸检确认为尿漏的有7例,发生率29.17%。按照发生的时间看,第5天1例,第7天4例,第8天1例,第10天1例,肌酐值突然上升,从术前的1mg/dl上升到10mg/dl以上。

3 讨论

3.1 尿漏的表现 7例有尿漏形成的动物都是在术后第5至10天肌酐值显著升高,如果不加以辨别,容易误判为术后的急性排斥反应。但是器官移植术后的急性排斥多发生于移植后的第7-8天,动物本身不会表现出强烈疼痛等异常反应。多数形成尿漏的动物在血肌酐值快速上升的同时,一般都会伴有突然无尿,此时触诊可以发现腹部有积液或有明显膨大,并且动物表现出局部疼痛,有的动物会在切口部位有液体渗出,并且有典型的尿液的味道。术后并发血栓时也会伴有血肌酐值的快速上升,但是血栓引起的肌酐值的突然升高多发于术后2-4天[2],且无腹部示病症状,通过触诊一般可以与尿漏以及急性排斥相区别。

3.2 尿漏发生的原因 尸检结果发现7例发生尿漏的动物中,有3例是因为输尿管过长,放置输尿管时有成角（如图1、2所示）,尿液大量积聚导致穹隆破裂而发生尿漏。

有2例是因为输尿管保留的过短,吻合完成后输尿管呈紧张状态,遇有外力（如抓取动物时动物挣扎等）,导致吻合口破裂,尿液渗漏;有1例是因为输尿管吻合口过细,输尿管受到挤压,尿液大量积聚致穹隆破裂而发生尿漏;另有1例是因为吻合时不够严密,导致尿液由吻合口处渗漏。未见因为输尿管供血障碍的坏死脱落而导致的尿漏。

7例形成尿漏的动物,都发生于术后早期（术后5-10天内）,根据实际手术操作过程及尸检结果分析,认为此7例尿漏都与外科技术有关,尿漏发生是技术上的原因。

3.3 预防尿漏发生的措施

尿路并发症是非人灵长类肾移植中较为常见的外科并发症,主要为输尿管梗阻和尿瘘等。由于食蟹猴输尿管较细,较难有适合管径的输尿管内支架管,而且 ECKHOFF等[3]认为显微外科技术日益成熟后,输尿管内支架管对减少输尿管梗阻的作用已不大,而且会增加尿瘘的发生。在此实验中没有使用输尿管内支架,而是采取供体输尿管与受体右侧输尿管端端吻合的方式接通尿路,在180例动物中有7例发生尿漏,约为3.89%。根据尸检结果,结合手术操作技巧,认为尿漏的发生是可以预防的,主要措施有以下几点:①吻合时吻合口尽量紧密,吻合针与针之间的距离尽量均匀。②放置输尿管时,应注意不要使输尿管打折、受压,使其适度伸直。③对输尿管操作要轻柔,减少损伤,并且输尿管的长度要适当。④供体输尿管与受体输尿管端端吻合后,要确切止血。开放移植肾血流后,也应在直视下观察输尿管吻合效果,确保不渗漏。

[1]马兰芝,赵源,尚玉璞,等.氯胺酮联用速眠新Ⅱ对食蟹猴麻醉效果观察[J].实验动物科学,2009,（3）:60.

[2]李 纲,赵 源,尚玉璞,等.食蟹猴肾移植术后并发血栓的分析[J].实验动物与比较医学,2009,29（4）:264.

[3]Eckhoff DE,Haisch CE,Conttreras JL,et al.Experience with renal transplantation in nonhuman primat:amodified ureteroneocystostomy to prevent urologic complications[J].JInvest Surg,2000,13（5）:247.