高效液相色谱-紫外检测器法测定化妆品中的苯甲醇

2011-01-22田富饶王旭强

化学分析计量 2011年5期

田富饶王旭强郑瀚

(义乌出入境检验检疫局综合技术服务中心，义乌 322000)

苯甲醇又称苄醇 (benzyl alcohol) 是一种芳香族醇，在多种化妆品中用作芳香族组分、防腐剂、溶剂和降粘剂，是近几年来新增的防腐剂。我国和欧共体规定化妆品中最大允许质量分数为1.0%。苯甲醇有麻醉作用，对眼部、皮肤和呼吸系统有强烈的刺激作用，吞食、吸入或皮肤接触均对身体有害，摄入后引起头痛、恶心、呕吐、胃肠道刺激、惊厥、昏迷，严重时可导致死亡。目前苯甲醇的检测主要集中在药品(注射液)方面[1-6]，苯甲醇常用的检测方法有高效液相色谱法[7，8]和气相色谱法[9]。

笔者采用高效液相色谱技术建立了一种测定化妆品中苯甲醇含量的方法，该方法简便、快速，所用试剂毒性小，能满足对进出口化妆品中苯甲醇含量的监管要求。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Agilent 1200型，配带紫外检测器(VWD)，美国安捷伦公司；

超声波清洗器：D-78224型，德国Elma公司；

高速离心机：3-30K型，德国Sigma公司；

分析天平：AL204型，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；

超纯水仪：Milli-Q型，美国密理博公司；

有机性样品滤膜：0.45 μm；

甲醇：色谱纯；

苯甲醇标准物质(Lot：00907)：纯度99.0%，德国Dr．Ehrenstorfer公司。

1.2 标准溶液的配制

精密称取苯甲醇标准品0.111 6 g，用甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶中，得到1.116 mg/mL的苯甲醇标准储备液，于0～4℃冰箱保存。

分别精密量取一定体积的标准储备液用甲醇稀释成浓度为0.046 4、0.092 8、0.185 6、0.232、0.464 mg/mL标准工作溶液。

1.3 样品前处理

以不含蜡质的化妆品如护肤类、香波、粉类等作为样品。准确称取样品1.000 g于25.0 mL具塞比色管中，加入甲醇至10.0 mL，震摇，使试样与提取溶剂充分混匀，置于50℃水浴中加热5 min(液体类样品不需水浴加热)，超声波提取20 min，冷却至室温，转移至10 mL离心管中，以5 000 r/min离心5 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用，同时做试剂空白。

1.4 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX ODS (4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流动相：水-甲醇(体积比65∶35)；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；进样量：10 μL；紫外(VWD)检测器，检测波长：210 nm。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

在190～400 nm 波长范围内进行全波长扫描，苯甲醇在200 nm处有最大吸收，但是在检测过程中发现过低的波长会造成基线漂移较大，从而影响定量的准确性；另外，甲醇的紫外透明界限是202 nm，水的透明界限是205 nm，同时本实验以甲醇-水作为流动相和采用紫外检测器检测，紫外检测器在低波长范围内较不稳定，因为很多物质在此区域的吸收会变大，直接表现为基线不稳噪音较大，因此检测波长选择在有较大吸收的210 nm处[10]。在此条件下有较好的分离效果，干扰少，灵敏度高，分析速度快。

2.2 色谱柱及流动相的选择

实验选择了Agilent ZORBAX Eclipse XDB -C18( 4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱和Agilent ZORBAX ODS ( 4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱及甲醇和不同比例的甲醇-水为流动相。试验结果表明，在ZORBAX ODS柱上，少量调节两相(甲醇-水)的比例，苯甲醇峰的保留时间变化不大，且理论塔板数、分离度和拖尾因子相近，符合系统适用性试验的要求。在流动相为甲醇-水(体积比35∶65) 条件下分离效果最好，且分析时间短、峰型好、灵敏度高。因此实验选择Agilent ZORBAX ODS色谱柱和甲醇-水(体积比35∶65) 作为流动相。苯甲醇标准溶液色谱图和润肤乳样品中苯甲醇的色谱图分别见图1、图2。

图1 苯甲醇标准溶液色谱图

图2 润肤乳样品中苯甲醇色谱图

2.3 提取溶剂的选择

根据苯甲醇稍溶于水，可与乙醇、乙醚、苯、氯仿、甲醇等有机溶剂混溶的性质，同时兼顾本实验所选择的流动相系统，选择了甲醇、甲醇-水作为提取溶剂。由于甲醇-水系统的提取会引入大量的水溶性杂质，干扰检测结果，经试验发现，甲醇是理想的提取溶剂，且毒性相对较小，易于操作。

2.4 提取时间的确定

按照1.3样品前处理方法，分别在10、15、20、25、30 min测定提取物的峰面积，结果见表1。

表1 提取时间的确定

根据表1数据，确定最佳提取时间为20 min。

2.5 线性方程和检出限

将配制好的标准工作溶液(0.046 4～0.464 mg/mL)按照1.4条件进行高效液相色谱分析，以峰面积y与浓度x进行线性回归，线性方程为y= 36.236x+84.964，相关系数为0.999 92。以3倍信噪比(S/N=3) 计算方法的检出限为0.10 mg/kg。

2.6 精密度和加标回收率

取同一对照品溶液按1.4条件重复进样测定6次，测得的苯甲醇含量分别为94.09、94.42、94.42、94.43、94.36、94.44 μg/mL，其相对标准偏差为0.14%，表明方法的精密度良好。

为验证该方法的可靠性和准确性，以香水为样品进行了加标回收试验，经反复检测得出该样品中苯甲醇的含量为65.77 mg/kg。称取试样0.950～1.050 g，加入3个不同浓度的标准溶液，每个浓度平行测定6次，按1.3方法进行样品处理及1.4条件进行测定，加标回收率为82.3%～118.4%，结果见表2。

表2 香水的回收试验结果(n=6)

2.7 样品测定

按1.3方法进行样品处理及1.4条件对来自6个不同企业的6款产品进行了苯甲醇含量的测定，结果见表3。

3 结语

采用高效液相色谱-紫外检测器法，以水-甲醇体系作为流动相,对膏、乳、液、粉状化妆品中苯甲醇的含量进行了测定。结果表明方法简便易行，精密度好，色谱峰对称性好，结果准确、可靠，而且未采用磷酸盐及强酸体系，可以避免对仪器设备的损坏和腐蚀，能够准确有效地检测化妆品中苯甲醇的含量。该法的建立可为化妆品质量监督提供有力的技术支撑。