(1.吉林师范大学化学学院，四平 136000； 2.长春师范学院，长春 130032)

红景天为景天科(Crassulaceae)植物大花红景天属(Rhodiola S achalinensis L.)的干燥根及根茎,它是在青藏高原海拔3 400～5 700 m纯净无污染环境下生长的一种珍贵药用植物。红景天的药理学研究及临床实践表明,其具有较好的抗疲劳和抗缺氧[1,2]、抗微波辐射[3]、抗肿瘤[4]、解毒、提高人体免疫力[5]、增强记忆力、强心活血[6,7]、平衡血糖等作用，是人体细胞的潜能激活剂，对人体神经系统、血液循环系统、代谢系统、内分泌系统等具有极好的整体调理作用。红景天的有效成分为红景天苷(Salidroside，结构式如图1)，红景天苷常被用来评价红景天属植物的药用价值，是迄今为止研究最多的有效成分之一[8]。已有许多文献报道利用HPLC法测定红景天中红景天苷的含量[9-13]，但是利用荧光光谱法测定红景天中红景天苷的含量尚未见报道。笔者建立了测定红景天苷的荧光光谱方法，并优化了实验条件，取得了满意的实验结果。

图1 红景天苷的分子结构式

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

荧光光谱仪:RF-5301PC型,日本岛津公司；

分光光度计:Shimadzu UV-1700型,日本岛津公司；

数字酸度计：pHS-3C型,杭州东兴设备仪器厂；

红景天苷标准品：编号110818-200404，中国药品生物制品检定所；

实验所用试剂均为分析纯；

实验用水均为二次蒸馏水。

1.2 溶液的配制

红景天苷溶液：称取适量的红景天苷标准品，用水溶解后定容于10 mL容量瓶中，浓度为5×10-4mol/L。

不同pH值的Britton-Robinson缓冲液：将1.33 mL磷酸、1.18 mL冰乙酸和1.24 g硼酸(用适量水溶解)混合后定容于500 mL容量瓶中，该酸混合液(A液)中酸的浓度约为0.04 mol/L；称取4.0 g NaOH，用水溶解后定容于500 mL的容量瓶中，则该碱液(B液)中碱的浓度约为0.20 mol/L；将A液和B液按一定比例混合，并用酸度计调节其pH值分别为2.32、2.61、3.39、4.63、5.39、6.52、7.31、8.60、9.43、10.69、11.61和12.71。

1.3 测定条件的优化

于4 mL比色管中加入50 μL 2.5×10-4mol/L红景天苷溶液，然后用缓冲溶液(pH 7.31)配制成2.5 mL溶液，药物的浓度为5 μmol/L，平行配制5份，考查时间、酸度、激发光和温度对体系荧光强度的影响。

1.4 标准曲线

配制红景天苷标准溶液系列：0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、10、20、40、60、80、100 μg/mL，在310 nm处测定红景天苷荧光强度，以荧光强度F为纵坐标，以红景天苷浓度c为横坐标进行线性回归。

1.5 共存物质的影响

在浓度为2 μmol/L的红景天苷溶液中加入4种常见金属离子Cu2+、Mg2+、Al3+和Fe3+，考查共存离子对荧光强度的影响。

2 结果与讨论

2.1 激发光谱和发射光谱

激发和发射狭缝均为5 nm，以被测物的最大紫外吸收波长作为激发波长测量荧光发射光谱，确定最佳发射波长；在选定的最佳发射波长下，改变激发波长，测量荧光激发光谱，确定最佳激发波长。

浓度为5 μmol/L的红景天苷溶液的荧光光谱如图2所示。激发波长为275 nm，发射光谱在280～500 nm范围内，发射峰波长在310 nm处。

图2 红景天苷的激发光谱和发射光谱

2.2 荧光强度随时间的变化

将新配制的浓度为5 μmol/L的红景天苷溶液在48 h内进行连续测量，间隔一定时间记录荧光强度，结果列于表1。从表1中看出红景天苷的荧光强度稳定，在48 h内变化很小。

表1 放置时间对红景天苷荧光强度的影响

2.3 温度的影响

温度对于溶液的荧光强度有着一定的影响，在溶液温度下降的过程中，介质的黏度逐渐增大，荧光物质分子与溶剂分子的碰撞也随之减少，这会给荧光效率造成一定的影响；而溶液温度上升过程中，一方面分子内部能量发生转换作用，另一方面激发分子可能与溶剂分子发生某些可逆的光化学反应，从而导致荧光强度降低。

考察浓度为10 μmol/L红景天苷溶液在20～60℃范围内荧光强度的变化，结果如表2所示。由表2可以看出，随温度的升高荧光强度降低，红景天苷在温度为60℃时的荧光强度几乎是常温条件下的一半。在20℃时，荧光值较大且比较稳定，是测定的合适温度，因此本实验选在常温条件下测定。

表2 温度对红景天苷荧光强度的影响

2.4 酸度的影响

室温条件下，固定红景天苷浓度为5 μmol/L，在不同酸度范围内测定荧光强度，结果见图3。从图3可以看出，随pH值的增加荧光强度逐渐降低，在pH<7时，降低不明显；当pH>7时，荧光强度随pH值的增加而明显降低；当pH>11时，荧光强度几乎观察不到。实验最终确定在溶液酸度为pH 7的条件下进行测定。

图3 溶液酸度对红景天苷荧光强度的影响

2.5 乙醇浓度的影响

考查了乙醇浓度对体系荧光强度的影响，见图4。由图4可知，随乙醇含量增加红景天苷荧光强度随之增大，当乙醇含量大于50%时，红景天苷荧光强度几乎不再随乙醇含量的增加而增大。实验结果表明，乙醇浓度对药物荧光值影响较大。由于乙醇溶剂易挥发，且乙醇对荧光增强的影响不是很大，因此实验选择在水溶液中进行测定。

图4 乙醇对红景天苷荧光强度的影响

2.6 标准曲线

红景天苷浓度在0.04～18.03 μg/mL的范围内，线性回归方程为F=19.22c+3.365，r=0.999 6，回归曲线见图5。光学分析法的检出限按DL=3s/k计算，其中s为空白溶液信号的标准偏差，k为灵敏度(即标准曲线的斜率)。经计算红景天苷的检出限为0.019 μg/mL。

图5 红景天苷标准曲线图

2.7 精密度试验

精密吸取标准溶液，连续取样5次进行测定，其荧光强度为319.06、316.59、318.95、317.88、317.53，相对标准偏差为0.33%(n=5),表明方法的精密度良好。

2.8 准确度试验

浓度为6.01 μg/mL红景天苷标准品溶液其理论荧光值为118.09，实际测得值为122.81，其相对误差为4.0%，表明方法的准确度良好。

2.9 共存物的影响

血浆中存在多种金属离子，虽然浓度较低，但是却起着非常重要的生理作用。在选定的实验条件下，研究了4种常见金属离子对红景天苷测定结果的影响。研究了红景天苷浓度为2 μmol/L、测定的相对误差在±5%之内时，共存离子的最大允许浓度，结果见表3。

表3 共存物的影响(n=5)

3 结论

建立了测定红景天苷的荧光光谱方法。考察了溶剂极性、放置时间、溶液pH值和共存离子对红景天苷荧光强度测定的影响。实验结果表明，荧光光谱法具有仪器设备简单、灵敏度高等优点。该法的建立为红景天苷含量测定提供了一种新的方法。

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