肖开提,阿曼古丽·夏依扎,卡那提白克

(1.新疆维吾尔自治区动物卫生监督所,新疆 乌鲁木齐 830063;2.新疆维吾尔自治区塔城地区动物疫病控制与诊断中心,新疆 塔城 834700)

1 发病情况及临床症状

乌鲁木齐市某娱乐场所先后从内地引进两批共4只海豹。第一批海豹在2008年6月下旬开始出现游动缓慢、食欲减退、腹泻等为主要症状的疾病。第二批海豹在同年11月下旬开始出现以游动缓慢、食欲减退、腹泻带血等为主要症状的疾病。娱乐场两次都是拿着海豹的排泄物要求诊断治疗,笔者对两起病例都进行了实验室诊断,通过病原菌分离、培养及生化鉴定,结合流行病学、临床症状,确诊第一批为嗜水/貂鼠气单胞菌和大肠杆菌混合感染,第二批为荧光假单胞菌和大肠杆菌混合感染。

2 细菌学鉴定

2.1 镜检 在无菌环境中取病海豹的粪便作触片固定后,进行革兰染色镜检。

2.2 细菌的分离培养 无菌取病海豹的粪便,接种于普通肉汤培养基和厌氧肝汤培养基,37℃培养24 h观察并进行镜检,将普通肉汤培养基中的培养物分别接种于普通培养基、麦康凯培养基和鲜血琼脂培养基上经37℃培养24 h分离培养,观察培养特性并进行染色镜检,挑取两个菌株的两个菌落,分别接种于普通肉汤培养基上,37℃培养24 h培养,进行纯培养,并备用。

2.3 动物试验 将上述两株菌的纯培养物镜检,按0.2mL/只,分别腹腔注射两组小鼠(每组2只,体重16 g左右,由新疆医科大学实验动物中心提供),并设对照组进行观察。

2.4 生化试验 分别取上述两株致病菌在普通琼脂培养物进行氧化酶试验,结果都为阴性。将2株培养物分别接种于ATB EXPESSION(细菌自动鉴定及药敏测试仪)ID 32E和ID 32ENG试条上37℃培养24 h。

2.5 血清型鉴定 分别用大肠杆菌肠道致病性埃希氏菌诊断血清(中国生物技术集团公司兰州生物制品研究所提供,国药准字S10820097)进行分型。

2.6 药敏试验 取上述2株革兰阴性致病菌的纯培养物混合作药敏试验(药敏纸片由北京天坛药物生物技术开发公司提供,批号200404)。药敏试验根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B琼脂法进行,试验所选用药物包括下列抗生素:氨苄西林,阿莫西林/克拉维酸,头孢噻吩,头孢噻肟,庆大霉素,环丙沙星,青霉素,链霉素,利福平,复方新诺敏。药敏结果判定标准参照NCCLS手册(2005版)。

3 结果

3.1 镜检结果 在第1批样品中可见两端钝圆、直形或略弯,呈单个或成双排列,没有芽孢和荚膜的革兰阴性短小杆菌和两端钝圆、散在或成对,有微荚膜的比前者较大的直杆菌,以下简称1号菌株和2号菌株。在第2批样品中可见两端钝圆、直形或略弯,呈单个或成双排列,没有芽孢和荚膜的革兰阴性较小杆菌和两端钝圆,散在或成对,有微荚膜的比前者较大的直杆菌,以下简称3号菌株和4号菌株。

3.2 细菌的分离培养

3.2.1 在第1批样品中经普通培养基37℃培养18～20 h后,有凸起、光滑、湿润、乳白色、边缘整齐的中等偏大菌落和白色至浅黄色、圆形、表面光滑、边缘整齐半透明、微隆起的菌落。在麦康凯培养基上可见较大圆整或不规则、扁平或突起的深红的湿润菌落和露滴状、帽针头大小,呈桔黄色的菌落。在鲜血琼脂培养基上可见灰白色、不透明、圆而隆起、边缘整齐或不规则、大而湿润但不溶血的菌落和白色、小圆形、表面光滑、边缘整齐,微隆起有β-溶血环菌落。普通肉汤培养基呈均匀混浊液体,对两株菌分别进行革兰染色镜检可见同样品镜检中见到的两株菌。

3.2.2 在第2批样品中经普通培养基 37℃培养18～20 h后,有一株菌的培养特性和3.2.1前面所描述的相同;另一株细菌普通培养基上呈圆形、微隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、灰白色、半透明,菌落呈浅绿色,在紫外线照射下呈现荧光,鲜血培养基为β型溶血。

3.3 动物试验 4个试验组8只小鼠均在12～24 h内死亡,剖检死亡小鼠,脏器分别涂片,经革兰染色镜检,可见与注射培养物相同的细菌,对照小鼠没有死亡。

3.4 生化试验 对分离到的4株细菌的培养物分别做氧化酶测定试验,结果2号菌株和4号菌株呈阴性,将其接种于细菌自动鉴定ID 32E试条上,1号菌株和3号菌株呈阳性将其接种于细菌自动鉴定ID 32NG试条上,37℃培养24 h。细菌自动鉴定仪读出2号和4号为大肠埃希氏菌,1号为嗜水/豚鼠气单胞菌,3号为荧光假单胞菌,它们主要的生化试验指标结果如表1。

表1 生化试验结果

3.5 血清型鉴定 大肠杆菌用肠道致病性埃希氏菌诊断血清,2号菌株和4号菌株的血清型均为02。

3.6 药敏试验 结果对第一批病料痢特灵、新霉素效果好,对第二批病料阿米卡星、新霉素、氧哌嗪青霉素、头孢哌酮钠(先锋必)效果好,其他药物效果不明显。

4 讨论

4.1 Popoff等(1981)根据有动力气单胞菌之间的表型和遗传关系将本群气单胞菌分为嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌和温和气单胞菌3个种,嗜水气单胞菌是条件性致病菌,在淡水、海水及浮游生物中普遍存在,一旦环境被污染,水生动物抵抗力降低,就会暴发本病,称为有动力气单胞菌败血症。荧光假单胞菌是草鱼等鱼类的假单胞菌败血症或出血性败血症的病原菌,在我国流行较广,在放养、扦捕或冻伤后易感染此菌。大肠杆菌系人和温血动物肠道后段正常菌群的主要成员之一。是条件性致病菌,并从粪便散播至周围环境。两批病料虽感染不同的水生动物传染性疾病,但同时都感染大肠杆菌。这可能是给海豹饲喂了被这些细菌污染的食物,加之饲养管理跟不上,水源造成污染,使海豹感染上述细菌。另一个可能是海水的配制有问题,水的酸碱度(pH)及盐度没有达到要求,使海豹的免疫抵抗力下降,而感染疾病。

4.2 由于治疗嗜水气单胞菌病和荧光假单胞菌病的主要治疗药物为呋喃唑酮,而大肠杆菌对多数药物有较强的耐药性,本实验室的药敏结果是上述菌株对痢特灵、新霉素、阿米卡星、氧哌嗪青霉素、头孢哌酮钠(先锋必)效果好,其他药物效果不明显,娱乐场饲养人员只是盲目的根据海豹提供主的要求用庆大霉素进行治疗,使得海豹的病情加剧。因此,最好根据药敏试验结果选用敏感的抗菌药物进行治疗,避免同一药物连续使用,方可避免一些不必要的损失。

[1]杨本升,刘玉斌,苟仕金,等.动物微生物学[M].长春:吉林科学技术出版社,1995:5.

[2]王世若.兽医微生物学及免疫学[M].长春:吉林科学技术出版社,1990:8.

[3]白文彬,于康震.动物传染病诊断学[M].北京:中国农业出版社,2002:12.

[4]费恩阁.动物传染病学[M].长春:吉林科学技术出版社,1995:8.