高新花 李延团 张凤梅 郑爽爽

(1.中国海洋大学 山东青岛 266003; 2.山东省烟台哈博生物技术有限公司 山东烟台 264006)

在全球的草药销售额中,我国中药出口份额仅占5%左右,这与我国中医药大国的地位极不相称[1]。其中的首要因素应该是药品质量,而农药残留和重金属污染则是影响药品质量的重要因素[2]。欧美等许多国家对传统药和草药制定了非常严格的标准[3]。中药农药残留问题是中药出口的瓶颈,必须制定出相应的限量标准。陈皮作为一种常用药材,国际国内市场的需求量很大。然而在橘(陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮)的种植过程中,为了防治病虫害,有机磷农药的使用较普遍,因此由有机磷农药残留引起的污染不容忽视,本实验采用毛细管气相色谱法对不同产地陈皮中的14种有机磷农药进行了含量测定,操作简便,重现性好,结果准确可靠。

1 实验仪器与试剂

GC6890N型气相色谱仪(美国安捷伦公司);FPD检测器;HP-5毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm);METTLERTOLEDO AL104电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);低噪音空气泵SGK-2LB(北京精华苑技术研究所);SGH-300高纯氢气发生器(北京精华苑技术研究所);DS-1高速组织捣碎机(上海标本模型厂);WH-866涡旋混合器(江苏太仓科教仪器厂)。

试剂:有机磷农药标准混合溶液储备液(pg.mL-1):敌敌畏(1.96),甲胺磷(1.02),甲拌磷(2.00),乐果(2.00),敌杀磷(4.00),二嗪磷(3.47),甲基立枯磷(2.00),甲基对硫磷(2.04),马拉硫磷(6.00),对硫磷(2.00),水胺硫磷(2.00),杀扑磷(3.43),丙溴磷(3.20),三唑磷(4.00)(以上标准品均购自Dr.Ehrenstorfer GmbH);丙酮(重蒸分析纯,烟台三和化学试剂有限公司);乙腈(分析纯,天津市博迪化工有限公司);氯化钠(140℃烘烤4h);水为蒸馏水。陈皮药材为主产地收集及安国市售商品药材。

表1 14种有机磷农药的线性回归方程、相关系数及检测限

图1 14种有机磷农药混合标准溶液色谱图

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱选择HP-5毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)。柱温采用程序升温,初温50℃,保持1min,然后以20℃/min升至140℃,再以13℃/min升至250℃,保持10min;进样口温度220℃,检测器温度250℃;载气为高纯氮(纯度>99.999%),流量:3.0mL/min;氢 气(纯 度 >99.999% )流 量 :75mL/min;空 气 流 量 :100mL/min;不分流进样。

2.2 供试品溶液的制备

准确称取陈皮样品于60℃干燥4h,准确称重计算样品含水量。将干燥过的样品粉碎过20目筛,准确称取5.000g粉末于100mL具塞锥形瓶中,准确加水20mL浸泡过夜。将浸泡过夜的样品倒入匀浆机中,加入50mL乙腈,高速匀浆2min(12000r/min)后用滤纸过滤,收集滤液至装有5g氯化钠的100mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1min,静置15min,使乙腈相和水相充分分层,准确吸取10.0mL乙腈溶液,转入15mL的刻度离心管中,缓缓通入氮气,蒸发近干,最后用丙酮溶解并准确定容至5.0mL,并在涡旋混合器上混匀,作为供试品溶液待测。

2.3 标准曲线的绘制

取一定量的有机磷混标溶液,用丙酮分别稀释成2,4,6,8,10倍的混标溶液,按“2.1”中的分析条件进行测定,以含量(μg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制14种有机磷的标准曲线,并确定最低检测限,见表1。相关系数为0.9989～0.9999,以3倍信噪比计算,最低检测限为0.003～0.02mg.kg-1。结果表明,各农药的质量浓度(X)与峰面积(Y)呈良好的线性关系。14种有机磷农药的气相色谱图见图1。

2.4 回收率试验

在陈皮中添加14种有机磷农药3个含量水平,3个含量水平储备溶液稀释2,5,10倍的混合标准溶液,每个含量水平重复3次,按照“2.2”提取、净化方法和“2.1”的检测条件,计算加样回收率,平均回收率分别为敌敌畏(86.7%),甲胺磷(84.6%),甲拌磷(84.8%)乐果(84.2%),敌杀磷(84.4%),二嗪磷(89.4%),甲级对硫磷(97.4%),甲级立枯磷(85.0%),马拉硫磷(93.5%),对硫磷(90.1%),水胺硫磷(84.8%),杀扑磷(92.5%),丙溴磷(91.3%),三唑磷(87.7%)。符合多种有机磷农药残留的分析要求。

2.5 样品测定

依照上述实验方法对主产地收集及安国市售陈皮药材的10个批次的样品进行分析,结果见表2。经过对10批陈皮药材的检测,有3个批次检出有机磷残留(表2),其余7个批次未检出。14种有机磷农药有10种未检出,检出的4种为马拉硫磷、水胺硫磷、丙溴磷和三唑磷。

表2 3个批次陈皮中有机磷农药残留(mg.kg-1)

3 结语

从实验结果可以看出使用HP-5毛细管柱在上述条件下对中草药中14种有机磷农药进行分析,使14种化合物达到很好的分离。方法最低检测限为0.003～0.02mg.kg-1,加样回收率84.2%～97.4%,本实验方法操作简单,灵敏度高,分离效果好,且能够节约大量时间和有机溶剂,适合大批量样品农药残留的检测。

[1]薛健,杨世林,陈建明,等.我国中药材农药残留污染现状与对策[J].中国中药杂志,2001,26(9):637.

[2]陈建存.输美中成药重金属/化学品污染及违反FDA规定情况[J].中国中医药信息杂志,2000,7(8):90.

[3]何迎春,吴新正.我国中药材农药污染状况研究[J].江西中医学院学报,2003,15(3):41.