林小博

(漯河医学高等专科学校 河南 漯河 462002)

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一。早婚、早育、多产及性生活紊乱的妇女有较高的患病率,宫颈癌早期没有任何症状,随着病情进展,患者可出现异常阴道流血。此外,白带增多也为宫颈癌常见症状,约80%的宫颈癌患者有此症状,本实验旨在通过免疫组织化学技术研究化疗前后宫颈癌细胞Caspase-3活性,为宫颈癌的治疗提供相关依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

31例病例来自于本实验室在周边医院收集新鲜标本,有性生活史,平均(31.19±5.17)岁,其中鳞癌21例,宫颈腺癌10例。宫颈癌组织分期为Ⅰ期13例、Ⅱ期8例,低分化3例、中高分中低分化者7例。标本经过5%福尔马林溶液固定,石蜡包埋。

1.2 方法

采用SP法检测Caspase-3,抗Caspase-3小鼠单克隆抗体(碧云天生物技术研究所提供),工作浓度 l:1000,DAB显色,苏木素复染。以PBS缓冲液代替-抗做空白,染色步骤严格按说明书进行。

1.3 判断标准

显微镜观察并收集图像,Caspase-3阳性以细胞核或细胞质呈浅黄色或棕黄色颗粒样物质。每个标本在400倍的观察随机5个视野计数,按阳性细胞所占百分比及着色程度进行结果判定。按阳性细胞比例判定:阳性细胞≤10%1分,10%～50%2分,>50%3分;按染色程度判定:阴性为0分;淡黄色为1分;中度黄色为2分,棕黄色为3分。按阳性细胞得分×染色程度得分计总分,总分<3为阴性,≥3为阳性[1]。

1.4 统计学方法

2 结果

Caspase-3在宫颈癌细胞中31例(27%)表达,阳性信号定位于细胞质,呈弥漫发布;化疗前显阳性的慢性宫颈癌和宫颈癌分别为57%和27%,化疗后分别为59%和31%;在临床分期中,I II期11例化疗前分别为26%和18%,化疗后分别为31%和21%;在病例分级中,化疗前G1期表达为9例(31%);组织类型中鳞癌10例(23%),而在淋巴结转移中,无淋巴结转移的表达有17例(37%);化疗后分别为33%、30%、23%,以上数据SPSS 12.0软件处理,P<0.05,组间有一定的差异性,具有可比性。

3 讨论

细胞凋亡是生物体内一种主动的自我调控过程。一些特定的基因在这一过程中起决定性的作用,细胞凋亡过程受抑与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。Csapases是一组与秀丽隐杆线虫同源的执行哺乳动物细胞凋亡的主要蛋白酶家族[2],绝大部分细胞凋亡依赖于Caspases的存在。大多数触发细胞凋亡的因素,最终均需要通过Caspase-3介导的信号传导途径导致细胞凋亡。

caspase-3是caspase家族中最重要的成员[3]。Caspases酶原包括 3个部分:原域、大亚单位和小位。酶原本身的活性很低,但可以通过不同的方式被激活。活化的 Caspases通过特异性裂解底物而发挥其执行细胞细胞凋亡,因此又称死亡蛋白酶,他们通过与众多蛋白质因子的相互作用调控细胞凋亡[4]。

Caspase3为调节效应型,分解细胞蛋白,执行凋亡。相关研究显示,瘤细胞Caspase3下调可阻断凋亡信号传导,从而抵制细胞诱导凋亡。Caspase3基因甲基化、基因突变及表达异常可使Caspase3蛋白表达下调,使一些肿瘤细胞得以逃避机体诱发凋亡的监控。

本研究显示,化疗前与化疗后相比,宫颈癌中Caspase3的表达上升,高于化疗前水平,可以说明Caspase-8表达变化可能与宫颈癌癌的发生、发展有关。它们都直接参与介导细胞凋亡的过程,在不同的细胞凋亡因素刺激下,caspase在细胞内可以通过多种不同途径被活化,活化后的caspase通过切断与周围细胞的联络,重组细胞骨架,阻止DNA复制和修复,破坏DNA和核结构,诱导凋亡小体的形成等,在细胞凋亡过程中起着重要作用。因此,Caspase3表达对宫颈癌病情进展的监测、转移潜能及预后估计等具有潜在研究价值。

[1]李晟磊,刘宗文,赵秋民.食管鳞癌组织中RECKmRNA和蛋白的表达及意义[J].中国肿瘤临床,2007,34(22):1280～1286.

[2]马惠芳,林彩霞,任秀君.针刺对脑缺血大鼠海马区凋亡细胞及Caspase-9蛋白表达的影响[J].中国中医药信息杂志,2009,16(11):25～26.

[3]Worf BB,Green DR.Suicidal Tendencies:Apoptotic cell Death by Caspase-Family Proteinase[J].J Biol Chem,1999,27(29):20049～20052.

[4]张保华,王泽华.不同宫颈组织中caspase-3基因的表达及其临床意义[J].临床医学,2003,23(6):523～524.