杨睿 魏琼 孙逸坤 赵梦竹 程序 刘梦华 张冬梅

基金项目：国家自然科学基金资助项目（81973780）

作者单位：北京中医药大学东直门医院/中医内科学教育部和北京市重点实验室（邮编100700）

作者简介：杨睿（1993），女，主治中医师，主要从事中医药防治心血管疾病方面研究。E-mail：Reyoung12@126.com

△通信作者 E-mail：chaweto@126.com

摘要：目的 探讨缺氧状态下大鼠心肌细胞H9c2来源外泌体对血管新生的影响。方法 采用混合气体法制备H9c2细胞缺氧模型，以正常培养细胞为对照。分别提取2组细胞分泌的外泌体，采用纳米颗粒跟踪分析检测外泌体的浓度和粒径，透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小，Western blot验证外泌体标志蛋白。制备人脐静脉内皮细胞（HUVEC）缺氧模型，并与H9c2外泌体共同孵育，分为常氧组、缺氧组、缺氧+正常H9c2外泌体（EXO-C）组和缺氧+缺氧H9c2外泌体（EXO-M）组。通过CCK-8法、细胞划痕实验、Matrigel体外三维成形实验分别检测HUVEC增殖、迁移、成管能力。结果 外泌体鉴定结果显示常氧组和缺氧组H9c2外泌体样本颗粒浓度均处于1×107～1×1012/mL，粒径大小40～160 nm；形态特征均为球形或茶托状结构，大小均一，形态完整；外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101（TSG101）、CD63、CD9均有表达，无阴性蛋白钙联蛋白（Calnexin）的表达。与常氧组比，缺氧组HUVEC增殖能力、迁移面积、迁移率均显著下降，参与成管的长度及分支数、节点数均减少（P＜0.01）；与缺氧组比，EXO-M组HUVEC细胞增殖能力下降，迁移面积减少、迁移率下降，参与成管长度及分支数进一步减少（P＜0.05）；与EXO-C组相比，EXO-M组增殖能力下降，细胞迁移面积减少，迁移率下降（P＜0.01）。结论 缺氧H9c2来源的外泌体对HUVEC增殖、迁移、成管能力有一定程度的抑制作用。……