不同产地煨葛根的鉴定及含量测定

2024-05-17胡静位为晴邓倩

安徽农业科学 2024年9期

胡静位为晴邓倩

摘要采用显微鉴别法对四川、安徽、湖北3个产地煨葛根外观形状及内部组织结构进行初步鉴定，利用薄层色谱法（TLC）鉴定煨葛根中的主要有效成分葛根素，通过高效液相色谱法（HPLC）对它们的含量进行检测，比较分析3个产地煨葛根中有效成分葛根素的含量及其差异性。结果表明，3个产地煨葛根中均含有葛根素，四川产地样品药材葛根素含量优于安徽和湖北产地，但不同产地的煨葛根中葛根素含量均符合《中国药典》标准，同时葛根素的含量与产地有一定关系。

关键词煨葛根；产地；显微鉴别法；薄层色谱法；高效液相色谱法；含量测定

中图分类号 R284.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2024）09-0157-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.09.035

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Identification and Content Determination of Simmered Radix Puerariae from Different Producing Areas

HU Jing，WEI Wei-qing，DENG Qian

（School of Chemical and Pharmaceutical Engineering，Hefei Normal University，Hefei，Anhui 230601）

Abstract The microscopic identification method was used to preliminarily identify the external shape and internal organizational structure of simmered Radix Puerariae from Sichuan，Anhui and Hubei Provinces.Thin-layer chromatography （TLC） was applied to identify the main active ingredient puerarin in simmered Radix Puerariae，and high-performance liquid chromatography （HPLC） was used to detect the puerarin content，the content and differences of the active ingredient puerarin in simmered Radix Puerariae from three producing areas were compared and analyzed.The results showed that puerarin was present in all three producing areas of simmered Radix Puerariae.The puerarin content in the samples from Sichuan region was higher than that from Anhui and Hubei regions.However，the puerarin content in simmered Radix Puerariae from different regions met the standards of the Chinese Pharmacopoeia，and there was a certain correlation between the puerarin content and the producing areas.

Key words Simmered Radix Puerariae; Producing areas; Microscopic identification method; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography;Content determination

基金項目安徽省药食同源天然资源开发与利用工程实验室开放基金项目（YSTY2022018）；安徽省大学生创新训练计划项目（S202314098087）；合肥师范学院质量工程项目（2022szsfkc01，2023jyxm07）。

作者简介胡静（1980—），女，安徽合肥人，副教授，博士，从事药剂学研究。

收稿日期 2023-08-03；修回日期 2023-12-07

在我国传统医学临床上葛根主要有生葛根和煨葛根2种规定的标准存在形式，煨葛根就是对生葛根采用中药煨法炮制后得到的中药材［1］。经过中药炮制后煨葛根在明显提高止泻作用的同时，还降低了药物的不良反应，对药性有缓和作用。现代研究成果表明葛根经过中药炮制煨法前后其所含成分的类别没有发生改变，而且其所含绝大部分成分（包括葛根素）的含量增加，葛根煨制后药物临床上的治疗作用增强［2］。

由于产地不同，同一种药材通常会因为地域气候和地理位置的不同而使药物的疗效有较大的差异性［3］。葛根生产地域分布十分广泛，主要产于江苏、浙江、云南、贵州、山东、安徽、河北、四川、广东、湖北、湖南、重庆、河南等地［4］。由于煨葛根相对生葛根来说药物的治疗效果增强，不良反应减少，且《中国药典》上对葛根经过其他炮制方法处理得到的炮制物都有较为清晰明了的炮制规章及参考，但对煨葛根有关标准的鉴定数据几乎没有［5］。而煨葛根中有效成分葛根素的含量会影响药物的疗效，从而影响治疗的效应性，为了能够获得质量比较平稳、药物治疗效果比较良好的药材，笔者对不同产地（四川、安徽、湖北）的煨葛根（相同条件下同种煨制方法处理）进行鉴定及含量比较研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试材。试验所用的煨葛根样品药材详细信息如表1所示。

葛根素对照品（批号111692-201501），在中国药品生物制品检定所购买；葛根素对照药材（批号111692-201501），在中国药品生物制品检定所购买。

1.1.2 试剂。甲醇，纯度级别为色谱纯；三氯甲烷、30%乙醇、水合氯醛试液，均为分析纯。

1.1.3 仪器。试验所需的大型仪器如表2所示。基本仪器为硅胶G薄层板（批号201905031），购买于青岛海洋化工厂分厂。

1.2 试验方法

1.2.1 不同产地煨葛根的显微鉴别。

该试验是以2020年版《中国药典》为参考，采用显微鉴别法［6］对各煨葛根样品药材粉末进行显微鉴别研究。将各个批次的煨葛根样品药材分别经中药研磨机研磨至粉碎，使样品药材粉末通过4号筛，取少量的样品粉末搁置在载玻片上，然后用滴管滴加1～2滴水合氯醛試液，在显微镜下检视并拍照。

1.2.2 不同产地煨葛根的薄层色谱鉴别。

1.2.2.1 供试品溶液的配制。

称取10个批次的煨葛根样品药材粉末各0.8 g于15 mL试管中，分别加入10 mL甲醇，放置2 h，用抽滤装置滤过，将滤液放在蒸发皿中蒸发至干，将残渣置于5 mL试管中，向残渣中加入甲醇0.5 mL使其溶解，则得到供试品溶液（共10组）。

1.2.2.2 对照药材溶液的配制。

称取葛根对照药材粉末0.8 g置于15 mL试管中，加入10 mL甲醇，放置2 h，用抽滤装置滤过，将滤液置于蒸发皿中蒸干，将残渣置于5 mL试管中，向残渣中加入甲醇0.5 mL使其溶解，则对照药材溶液配制完成（1组）。用a标示。

1.2.2.3 对照品溶液的配制。

用电子天平准确称取葛根素对照品0.001 0 g，置于10 mL容量瓶中，加入适量甲醇，配制成含1 mg/mL葛根素的溶液，作为对照品溶液（1组）。用b标示。

1.2.2.4 薄层色谱鉴别。先将硅胶G薄层板置于105～110 ℃烘箱下活化30 min。再分别吸取所配制的溶液（10组供试品溶液、1组对照药材溶液、1组对照品溶液）各10 μL，点样于同一硅胶G薄层板上，使成条状。以三氯甲烷-甲醇-水（7.00∶2.50∶0.25）为展开剂，将硅胶G薄层板置紫外光灯（365 nm）下检视，并记录薄层色谱图像［7］。

1.2.3 不同产地煨葛根的含量测定。

1.2.3.1 色谱条件。

色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-水（25∶75）为流动相，流速设置为1.0 mL/min，柱温为35 ℃。试验检测葛根素的波长设置为250 nm。

1.2.3.2 供试品溶液的配制。

分别将3个产地的煨葛根药材样品粉末过3号筛，取约0.1 g样品，加入50 mL 30%乙醇，加热回流30 min，加入30%乙醇补足损失的重量，振荡至均匀，取续滤液作为供试品溶液（共10组）。

1.2.3.3 对照品溶液的配制。

用电子天平准确称取葛根素对照品适量，加入30%乙醇适量配制成80 μg/mL的溶液，则得到对照品溶液（1组）。

1.2.3.4 葛根素含量测定。

依据《中国药典》，不同产地煨葛根样品中的葛根素含量采用高效液相色谱法［8-9］进行测定。

精密吸取各供试品溶液10 μL、对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，按“1.2.3.1”色谱条件，以葛根素对照品作为参照物，测定10批样品，确定1个特征峰。

1.2.3.5 精密度试验。

精密吸取葛根素对照品溶液（即80 μg/mL），按照“1.2.3.1”色谱条件进样10 μL，连续进样5次，测定葛根素的峰面积。

1.2.3.6 重现性试验。

取煨葛根药材样品粉末（编号YP-WGG-01-001），过3号筛，取约0.1 g，共5份，分别加入50 mL 30%乙醇，加热回流30 min，加入30%乙醇补足损失的重量，振荡至均匀，取续滤液作为供试品溶液。用高效液相色谱仪测定其葛根素特征峰的峰面积。

1.2.3.7 线性关系考察。

取葛根素对照品溶液（即80 μg/mL）1、2、3、4、5、6 mL于10 mL容量瓶中定容至10 mL，即浓度分别为8、16、24、32、40、48 μg/mL。将葛根素对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，按照“1.2.3.1”色谱条件测定峰面积，以峰面积值取lg为底的对数值为纵坐标、对照品浓度取lg为底的对数值为横坐标，绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 不同产地煨葛根显微鉴别分析显微鉴别试验结果（图1～10）显示，不同产地煨葛根样品中，煨葛根粉末颜色均为淡棕色，均含有淀粉粒和具缘纹孔导管等典型的细胞结构。该试验结果与《中华人民共和国药典：中药材显微鉴别彩色图鉴》［10］上葛根药材的相关显微图片相比对，鉴定所做试验样品的药材为煨葛根药材。

2.2 不同产地煨葛根薄层色谱鉴别

按照“1.2.2.4”方法操作，得到薄层色谱图（图11）。由图11可知，供试品（即3个产地的煨葛根药材样品）色谱中，在与葛根对照药材色谱以及葛根素对照品色谱两者相对应的位置上，显现了相同颜色的荧光条斑。各个斑点的分离效果均较好，亮点突出可见。说明试验样品的各煨葛根药材中均含有葛根有效成分葛根素。

2.3 不同产地煨葛根的含量测定

2.3.1 精密度试验。按照“1.2.3.5”方法操作，得出5组样品中葛根素含量峰面积分别为2 454.609、2 473.996、2 474.793、2 479.427、2 482.747 mAU·min，平均峰面积为2 473.114 mAU·min，标准偏差为9.785 mAU·min，葛根素的相对标准偏差（RSD）为0.40%，说明系统随机误差比较低，精密度良好，试验过程中所用的高效液相色谱仪测量数值相对来说较为稳定。

2.3.2 重现性试验。

按照“1.2.3.6”方法操作，试验表明（表3），葛根素的平均峰面积为4 056.958 mAU·min，标准偏差为42.042 mAU·min，煨葛根药材样品的RSD为1.04%，小于《中国药典》中所规定的数值（2.0%），说明重现性良好。

2.3.3 线性关系考察。按照“1.2.3.7”方法操作，试验结果见图12。由图12可知，葛根素的回归方程为y=0.921 1x+1.616 4（R2= 0.995 3），表明葛根素在8～48 μg/mL呈现良好的线性关系。

2.3.4 含量比较分析。

利用各煨葛根样品药材测定的峰面积相关数据，根据标准曲线y=0.921 1x+1.616 4具体求得各煨葛根样品药材中含有葛根素的量，结果见表4。由表4可知，所试验的样品中，四川产地煨葛根药材YP-WGG-01-001～004中葛根素含量分别为7.20%、6.30%、6.34%、4.76%，安徽产地煨葛根药材YP-WGG-01-005～007中葛根素含量分别为0.15%、0.16%、0.17%，湖北产地煨葛根药材YP-WGG-01-008～010中葛根素含量分别为2.84%、3.14%、2.63%。试验结果表明，煨葛根中有效成分葛根素的含量与地域是存在联系的，不同产地的煨葛根中葛根素的含量有差異。

3 结论

该研究对四川、安徽、湖北3个产地的煨葛根药材进行

鉴定及含量比较，3个产地煨葛根中均含有葛根素，四川产地

样品药材葛根素含量优于安徽和湖北产地。但均符合《中国药典》中规定药材中所含有葛根素的量不得少于2.4%的标准。葛根素的含量是与产地有明显关系的。该研究为煨葛根药材研究提供了一定的数据参考，也为评价临床上葛根的药物疗效质量提供了一个依据。

参考文献

［1］

高立新.中药炮制的煨法［J］.咸宁学院学报（医学版），2009，23（1）：7.

［2］裘维瀚，戴辉，胡泓，等.葛根煨制前后成分的比较研究［J］.中成药，2013，35（10）：2213-2217.

［3］王黎，高苏亚，李华.不同产地葛根的HPLC指纹图谱及质量评价研究［J］.安徽农业科学，2011，39（18）：10782-10784，10801.

［4］段海燕，程铭恩，彭华胜，等.野葛块根的异常结构解剖学研究［J］.中国中药杂志，2015，40（22）：4364-4369.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：中国医药科技出版社，2020.

［6］中药检验技术综述［J］.生命科学仪器，2003（Z1）：19-21.