王 留，方磊涵，郭全海，王向国

（商丘职业技术学院，河南 商丘 476000）

奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中一种常见的临床多发病，临床型乳房炎不仅引起奶牛产奶量的严重下降，同时导致牛奶品质降低，给奶牛产业造成巨大的经济损失[1]。引起奶牛乳房炎的因素包括环境因素、奶牛机体抵抗力降低、致病性微生物感染等，其中致病性微生物感染起主导作用。临床上多采用抗生素治疗临床型乳房炎，但是抗生素残留和细菌的抗生素耐药性问题日益突出[1]，导致抗生素的治疗效果和临床应用受到一定的限制。中草药具有绿色、低毒、低残留、不易诱导细菌耐药性等特点，针对奶牛乳房炎致病菌筛选抗菌抗炎效果较好的蒲公英、金银花、连翘、紫花地丁等中草药，根据中兽药方剂配伍原理，通过组方并加工成复方蒲公英乳房灌注剂，用于奶牛临床型乳房炎的治疗。本试验使用复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛临床型乳房炎进行临床治疗试验，通过测定用药前后乳中体细胞数、奶牛血清炎性因子、临床有效率和治愈率的变化，探索复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛临床型乳房炎治疗效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂 便携式体细胞计数仪，韩国Digital Bio Technology 公司；多功能酶标仪，上海酶联生物科技有限公司；淀粉样蛋白A（SAA）双抗夹心ELISA检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司。

1.1.2 试验药物 复方阿莫西林乳房注入剂，浙江海正动物保健品有限公司；复方蒲公英乳房灌注剂，由课题组自制，按照处方配伍比例称取蒲公英、金银花、连翘、紫花地丁等中药材，经水提醇沉法提取，过滤后的上清液浓缩至含生药量1 g/mL。调节pH 7.0，添加0.2%活性炭煮沸20 min，抽滤后的滤液经高压蒸汽灭菌后分装为每袋100 mL，4 ℃ 冰箱内保存备用。

1.1.3 试验动物与分组 从商丘市某奶牛场饲养的中国荷斯坦奶牛中选取2～3胎次的健康奶牛10头和临床型乳房炎奶牛20头进行治疗试验。试验奶牛均无其他疾病发生，也未接受抗生素治疗。10头健康奶牛为健康对照组，试验过程中不给药。20头临床型乳房炎奶牛随机分为试验药物组和抗生素对照组，每组10头，试验药物组奶牛患病乳区注射复方蒲公英乳房灌注剂20 mL（含生药量1 g/mL）；抗生素对照组奶牛患病乳区注射复方阿莫西林乳房注入剂1支（含阿莫西林200 mg，舒巴坦钠50 mg，泼尼松龙10 mg）。2次/d，7 d为一疗程。试验前和试验过程中，供试奶牛自由饮水，统一饲喂，试验药物组和抗生素对照组连续给药7 d，观察奶牛的精神状态、食欲变化和乳房炎治疗效果。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 试验第0、1、4、7天，温水清洗乳房，75%酒精棉球消毒，弃去前3把奶，然后分别采集30 mL牛奶于离心管内，4 ℃ 保存备用。试验第0、4、7天，分别采集奶牛静脉血5 mL于无抗凝剂的采血管内，室温凝固1 h后4000 r/min离心5 min分离血清，-20 ℃保存备用。

1.2.2 检测指标及方法 便携式体细胞计数仪测定乳样中的体细胞数（SCC）；ELISA检测试剂盒测定血清样品中淀粉样蛋白A（SAA）炎性标志物。

1.2.3 临床疗效判定 给药前及给药期间观察奶牛的精神状态、饮食欲和乳房局部症状（潮红、肿胀、疼痛、乳汁异常）变化情况，参考张凤凤等[1]制定的标准综合判定治疗效果，治疗效果分为治愈、有效、无效。

1.2.4 数据分析 试验数据采用SPSS 21.0软件进行统计分析，并进行差异显著性比较。

2 结果

2.1 乳样中体细胞数检测结果

复方蒲公英奶牛乳房灌注剂对临床型乳房炎奶牛乳样中体细胞数的影响见表1。试验前（第0天）试验药物组、抗生素对照组乳样中体细胞数（SSC）与用药第7天相比均差异显著（P＜0.05）。试验药物组与抗生素对照组乳样中体细胞数（SSC）试验前（第0天）差异不显著（P＞0.05），分别为236.07万个/mL和228.59万个/mL，均高于奶牛乳房炎的判定标准（SSC＞50万个/mL）；用药第1天2组间SSC差异显著（P＜0.05），用药第4天和第7天2组间SSC均差异不显著（P＞0.05）。结果表明复方蒲公英奶牛乳房灌注剂能显著减低临床型乳房炎奶牛乳样中体细胞数，与市售商品复方阿莫西林乳房注入剂相比无显著差异。

表1 乳房炎奶牛乳样中体细胞数 （万个/mL）

2.2 血清淀粉样蛋白A（SAA）检测结果

复方蒲公英奶牛乳房灌注剂对临床型乳房炎奶牛血清淀粉样蛋白A（SAA）的影响见表2。试验前（第0天）试验药物组、抗生素对照组SAA与用药第4天相比差异不显著（P＞0.05），与用药第7天相比均差异显著（P＜0.05）。用药第4天试验药物组、抗生素对照组SAA与用药第7天相比均差异显著（P＜0.05）。结果表明，复方蒲公英奶牛乳房灌注剂能显著降低临床型乳房炎奶牛血清淀粉样蛋白A含量，与市售商品复方阿莫西林乳房注入剂相比无显著差异。

表2 乳房炎奶牛血清淀粉样蛋白A（SAA）检测结果（μg/mL）

2.3 临床治愈率和有效率

复方蒲公英奶牛乳房灌注剂对临床型奶牛乳房炎的治疗效果见表3。试验药物组治愈率和有效率分别为69.2%、23.1%，总有效率为92.3%；抗生素对照组治愈率和有效率分别为71.4%、19.7%，总有效率为91.1%。试验药物组总有效率与抗生素对照组差异不显著（P＞0.05 ）。

表3 复方蒲公英奶牛乳房灌注剂对临床型奶牛乳房炎治疗效果

3 讨论与结论

乳房炎是奶牛养殖中的常见病和多发病，引起患病奶牛产奶量和牛奶品质降低，牛奶中体细胞数增加。每毫升牛奶中所含的细胞总数称为牛奶体细胞数，白细胞数量占98%以上，其余为乳腺组织脱落的少量上皮细胞[2]。奶牛乳房存在损伤或炎症时，牛奶中体细胞数升高，因此牛奶体细胞数能够反映奶牛乳腺组织损伤、牛奶质量和奶牛的饲养管理情况，是奶牛乳房健康状况的监测指标，可用于奶牛乳房炎的检测[3]。当奶牛发生乳房炎时，大量的白细胞进入乳腺组织以清除感染的致病菌，引起牛奶中体细胞数快速升高，临床上以牛奶中体细胞数超过50万个/mL作为诊断乳房炎的标准[2]。田猛等[4]研究发现，由黄芪、王不留行、鱼腥草等组成的混合发酵中草药能显著降低隐性乳房炎牛奶中的体细胞数，并且不影响牛奶中的乳蛋白率和乳脂率。本试验通过检测用药前后乳样中的体细胞数研究复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛乳房炎的治疗效果，结果显示复方蒲公英奶牛乳房灌注剂能显著减低临床型乳房炎奶牛乳样中体细胞数，与市售商品复方阿莫西林乳房注入剂相比无显著差异。

血清淀粉样蛋白A（SAA）是由肝脏合成的一种高密度脂蛋白特异性载脂蛋白，为急性时相反应蛋白，参与体内的多种炎症反应，当机体存在感染等炎症刺激时，血清淀粉样蛋白A会在短时间内快速升高，因此可作为一种新型的炎症反应标志物，用于机体内的炎症监测和预后评估[5]。血清淀粉样蛋白A用于奶牛乳房炎监测的研究相对较少，薛永康等[6]对患隐性乳腺炎奶牛乳汁中急性期蛋白含量与奶牛隐性乳腺炎的相关性进行研究，结果发现乳汁中血清淀粉样蛋白A有可能作为奶牛隐性乳腺炎的诊断指标。尹柏双等[7]采用Elisa试剂盒检测乳清中淀粉样蛋白A含量研究不同程度奶牛隐性乳房炎与乳清淀粉样蛋白A含量变化的关系，结果发现乳清淀粉样蛋白A含量与乳腺损伤程度和乳汁体细胞数增加呈正相关，乳清淀粉样蛋白A含量变化与隐性乳房炎发病程度具有一定相关性。田猛等[4]研究发现，混合发酵中草药能显著降低隐性乳腺炎奶牛血清中淀粉样蛋白A。本试验通过检测用药前后奶牛血清淀粉样蛋白A含量变化研究复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛乳房炎的治疗效果，结果显示复方蒲公英奶牛乳房灌注剂能显著降低临床型乳房炎奶牛血清淀粉样蛋白A含量，与市售商品复方阿莫西林乳房注入剂相比无显著差异。

治愈率和有效率是评价奶牛乳房炎治疗药物治疗效果的临床指标。隋国燕等[8]通过临床观察、细菌清除率及体细胞计数变化指标研究发现，复方阿莫西林乳房注入剂对奶牛临床型乳房炎的临床治愈率为58.3%。潘康锁等[9]通过乳样体细胞计数及临床治疗效果观察发现高剂量（口服，600 g/次）公英翘芦散对奶牛乳房炎的有效治愈率为100%，临床治疗效果良好。张鹏举等[10]通过加州乳房炎检验和乳中体细胞数研究发现，公英翘芦散治疗亚临床型奶牛乳房炎有效率可达97.56%，说明公英翘芦散可以作为治疗亚临床奶牛乳房炎的有效药物，治疗效果显著。复方蒲公英乳房灌注剂由抗菌抗炎效果较好的蒲公英、金银花、连翘、紫花地丁等中草药，根据中兽药方剂配伍原理，通过组方并加工制成的治疗奶牛乳房灌注剂，对金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等奶牛乳房炎致病菌有较好的抗菌作用。本试验通过临床观察、乳样体细胞数和血清淀粉样蛋白A研究复方蒲公英乳房灌注剂治疗临床型奶牛乳房炎的治疗效果，结果显示总有效率为92.3 %，治疗效果显著。