王庆军，王 龙，王启鸣，王晓燕，常仲乐*

（1.山东省临朐县畜牧业发展中心寺头畜牧兽医工作站，山东 临朐 262606；2.山东农业大学动物科技学院，山东 泰安）

泗水裘皮羊又称泗河绵羊，是羊亚科羊属动物，原产于山东省济宁市的泗河两岸，培育历史悠久，生物学特性独特。泗水裘皮羊品质独特，头长多角，是中国的稀有品种。泗水裘皮羊体格健壮，善于爬山，可终年放牧。其属裘肉兼用羊，毛被光泽，毛股清晰，花案美观，皮薄坚韧，羔皮可与滩羊二毛皮媲美，是山东省地方优良家畜品种。泗水裘皮羊繁殖性能较低。正常情况下，母羊的性成熟一般在10 个月以上，公、母羊1～1.5 岁方能配种繁殖。发情无明显季节性。一般饲养条件下，成年母羊可两年产三胎，一般一胎单羔，产双羔较少。由于受肉羊市场冲击，许多裘皮羊养殖户开始引进小尾寒羊以及其他肉、毛品种和裘皮羊同群饲养，并用其公羊杂交裘皮羊，不仅直接造成裘皮羊种群混乱，纯度下降，且致使数量日趋减少，导致保种形势十分严峻。为保存濒危遗传资源，精液冷冻保存是一个有效的方法，但泗水裘皮羊胆小怕人，无法采用假阴道采精，为了顺利采集泗水裘皮羊精液，有必要探索泗水裘皮羊电刺激采精参数。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 选择纯种，年龄2～6 岁之间，体格健壮，睾丸发育正常和左右对称，繁殖机能正常的泗水裘皮羊公羊作为采精对象。

1.1.2 主要器材与试剂 电刺激采精器（电刺激频率固定、电压可调，电流随电压变化）、普通生物显微镜、恒温台、剪毛剪、保定架、集精杯，假阴道、精液密度分光光度计、75%医用酒精、75%酒精棉球、0.9%生理盐水、0.1%新洁尔灭、0.1%高锰酸钾溶液、3%氯化钠溶液等。

1.2 方法

1.2.1 采精前准备 采精所用器皿、器械均首先用清水洗涤，其次用酒精消毒，最后用生理盐水冲洗干净，干燥后备用。符合标准的公羊保定在保定架上，然后采精前剪净尿道口周围被毛，依次用高猛酸钾溶液、生理盐水清洗消毒干净、擦干。

1.2.2 采精操作方法 将电刺激棒用稀释的新洁尔灭溶液浸湿后，连接到电刺激采精器上，掀起尾部毛，缓缓全部插入肛门。打开采精器电源开关，从低电压缓慢调整电压，在一定电压下持续10 s，立即将电压调节旋转到零点，并将电刺激棒拔出放到盛有新洁尔灭溶液的桶中。在阴茎伸出时，一名技术人员一只手持一端装着集精杯的假阴道，另一只手托住阴茎使其被假阴道包裹，注意观察是否有精液排出，最后阴茎不再伸出时用手将包皮中的精液赶净，确保精液全部从假阴道壁流向集精杯中。

1.2.3 精液品质鉴定 记录每次的采精量，用精液密度分光光度计测定精子密度；把稀释后的精液滴到载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察呈直线前进的精子，从而计算出精子活率；对分别在7～12 V、15～20 V 和25～30 V 刺激下采出的精液进行精液品质比较，进而分析不同电压与精液品质的关系；选取在25～30 V 刺激下5 只公羊所采出的精液进行精液品质比较，进而分析在相同电压（25～30 V）下不同个体精液品质的差异。精子活率=直线前进的精子数/总精子数。

1.2.4 精液稀释 精液稀释液配制：Ⅰ液（鲜精时用），葡萄糖（3 g）+柠檬酸钠（3 g）+双蒸水（纯净水）100 mL，过滤，除杂质，加入青霉素20 万单位、链霉素0.2 g 过滤除菌，保存在4 ℃待用，用前取出80 mL 加入卵黄20 mL 充分摇匀备用；II 液（冷冻保存液）：取I 液44 mL+6 mL甘油。按比例对采出的精液进行精液稀释。

1.3 数据处理与分析

试验数据采用 IBM SPSS Statistics 27 进行数据分析，采精成功率、精子活率采用x2检验，精液量和精液密度采用方差分析，结果以平均值±标准误差（Mean ± SE）表示。

2 结果

2.1 泗水裘皮羊对电刺激采精的反应

试验中发现在将探头全部插入直肠提供电刺激后，电压逐渐升高至12 V 后，公羊均能对电刺激做出反应，表现为后腿登直肌肉僵硬、阴茎勃起；刺激电压18 V 以内公羊阴茎虽有勃起，但阴茎却少见伸出包皮外；电压低时排精需要的刺激时间长，从排精清至最后排完精所用的时间也长（表1）。试验中还发现个体在利用电刺激采精时，电刺激至排精时间也存在差异，有时反应敏感电刺激至排精时间短，有时反应不敏感电刺激后并很长时间才能排精。

表1 泗水裘皮羊对电刺激采精的反应

2.2 电刺激采精电压对泗水裘皮羊采精成功率的影响

试验中发现电刺激采精电压对泗水裘皮羊采精成功率的影响较大，7～12 V 的采精成功率为42%，是三种电压中最低的，25～30 V 的采精成功率最高达到67.9%，7～12 V 的采精成功率显著低于25～30 V 的采精成功率（表2）。

表2 不同电压刺激泗水裘皮羊采精成功率

2.3 电刺激采精电压对精液品质的影响

在 7 ～12 V 刺激下的精液量平均为1.18 mL，15 ～20 V 刺激下的精液量平均为0.92 mL，25 ～30 V 刺激下的精液量平均为0.67 mL，是三种电压中采集精液量最少的电压，25～30 V 电压下采集的精液量与7～12 V 刺激下的精液量差异显著（P＜0.05）；7～12 V 刺激下的精子密度平均为6.14 亿/mL，15～20 V 刺激下的精子密度平均为7.36 亿/mL，25～30V 刺激下的精子密度平均为8.11 亿/mL，虽然在25～30V刺激下的精子密度最高，但三种电压刺激下的精子密度差异不显著；利用三种不同电压实施电刺激采精所采精子的活率差异不显著（P＜0.05）（表3）。

表3 泗水裘皮羊电刺激采精电压与精液品质关系

2.4 相同电刺激采精电压下不同个体精液品质的差异

在相同电压下，个体之间的平均精液量和精子活率差异不显著（P＞0.05），不同个体密度存在较大差异，1 号精子密度最高，2 号精子密度最低，差异显著（P<0.05）（表4）。试验中还发现精液的颜色主要以乳白色为主，精子密度在5～10 亿/mL 时基本呈现乳白色，密度高于13 亿/mL 时呈现灰白色，密度不足2 mL 时呈现淡白透明色。

表4 25～30V 电压下泗水裘皮羊不同个体精液品质的差异

2.5 月份对泗水裘皮羊的精液品质的影响

5月、6月采集的精液量差异不大但均高于11月采集的精液量，差异显著（P＜0.05），9月、10月与其它月份采精精液量差异不显著；不同月份的精子密度差异不显著（P＞0.05），5、6月的精子活率较低，但不同月份的差异不显著，见表5。

表5 不同月份泗水裘皮羊的精液品质

3 讨论与结论

目前，在国内外采精中，电刺激采精技术是使用较为广泛的一种技术。在我国畜牧生产中电刺激采精技术应用也越来越广泛，在耗牛、藏羊、滇南小耳猪等动物人工采精中常用电刺激采精法采集精液，还有在林麝、朱鹮及塔里木马鹿等一些濒危物种也常用电刺激采精法采集精液。孙万林等人进行了藏羊电刺激采精实验，用电刺激采精完成对藏羊的精液采集[1]。目前尚未见泗水裘皮羊电刺激采精研究的相关文献报道。

赵贵军等人对电刺激采精效果进行了分析，其中电击棒插入肛门的深度为（7.1±0.7）cm，采精效果和排精时间均较好[2]。本试验电击棒插入肛门的深度为16 cm，采精效果和排精时间比赵贵军等人的研究要好，但考虑到品种不同、电压不同和年龄不同会出现差异，这方面还需继续深入研究。

王燕文等人对耗牛电刺激采精技术的研究表明，耗牛电刺激采精时15～25 V 最易采出，精液质量好，密度高[3]。而本试验中泗水裘皮羊在25～30 V 采精量较其余两组为最少，但精子活率和密度均较高。这说明不同动物对电刺激的敏感性不同，采精最佳的电刺激电压也不同[4]；刺激电压在较低电压和缓慢往上加的情况下，可能会使副性腺分泌物过多，导致精清过多，从而使精液量较多，精子密度下降，这与表3 的数据相符合。

余忠祥对高寒牧区藏羊公羊电刺激采精试验的效果观察表明，不管高原型藏羊年龄相同或不同，种公羊平均采精量、精液颜色、平均精子密度及平均精子活力均会因为个体之间差异有高有低[5]，与本表4 的试验结果相似，不同个体在相同电压电刺激下，每个个体的平均采精量、平均精子密度及平均精子活力存在着个体差异。泗水裘皮羊个体对电压敏感性的不同，也会造成在相同电压下个体的平均采精量、平均精子活率及平均精子密度均有所差异，这是由于个体睾丸发育后体睾大小及曲精细管长短造成的生精机能差异所导致的。

张笑科等人不同季节对猪精液品质的研究中表明，春季精液体积显著高于夏、秋、冬季（P<0.05）；精液密度、精子活力和总精子数在秋、冬季均显著高于春、夏季（P<0.05）[6]。而本试验表5 中的试验结果与其相似，采精量5月份均高于其他采精月份。精子活率和精子密度在9、10月份均高于其他采精月份，但差异不显著。在不同月份个体的平均采精量、平均精子活率及平均精子密度均有所差异，这可能是因为热应激和冷应激使泗水裘皮羊繁殖机能下降所导致的。