乐 章，王云云，宋文俊，陈永昌，舒晓正⋆，吴 燕

（1.江苏大学医学院，江苏 镇江 212013 ；2.常州百瑞吉生物医药股份有限公司，江苏 常州 213125）

术后粘连是当前盆腔手术后最为常见的并发症，是受损伤器官与周围组织之间的异常纤维化连接；形成的常见原因有创伤、感染、缺血和异物反应等；严重的盆腔粘连会导致疼痛、不孕、肠粘连、慢性炎症等后果，因此积极预防盆腔手术后粘连具有积极意义[1-8]。

医用自交联透明质酸钠凝胶是常州百瑞吉生物医药股份有限公司研发的一种新型交联透明质酸钠凝胶，临床试验表明该产品具有良好的预防盆腔术后粘连的效果[9]；但尚缺乏实验室基础研究数据的支持。因此，本文采用标准的白兔子宫角模型（Uterine Horn Model），评价医用自交联透明质酸钠凝胶预防盆腔术后粘连的有效性及安全性，进一步为医用自交联透明质酸钠凝胶的临床应用提供可靠的科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

采用清洁级新西兰白兔24 只，体重2.0 ～3.0（2.49±0.26）kg，购自山东青岛今墨堂百福泰生物技术有限公司 (山东省胶南市大崮山)。兔子到达后分笼，在室温20 ℃左右、相对湿度为30% ～70%、光/ 暗周期为12 h/ 12 h 的环境中饲养。饲喂所用的兔子专用饲料购自协同医药生物工程有限公司（南京市江宁区谷里工业园聚缘路11 号）。由有经验的动物护理人员每天进行护理监测。在经过3 天的环境适应期后，让兔子禁食过夜，进行实验。

1.2 试剂与仪器

医用自交联透明质酸钠凝胶（自交联凝胶）（商品名：海瑞吉®）为常州百瑞吉生物医药股份有限公司产品；0.1% 美兰溶液购自常德比克曼生物科技有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 动物造模和分组处理 参照John DB 等人的方法[10]，建立白兔子宫角模型（Uterine Horn Model）：白兔于手术当天称重，肌内注射3% 戊巴比妥钠（3 mg/kg）进行麻醉。手术区域去毛，涂敷1%碘伏进行消毒。在无菌室中进行手术操作。麻醉后的白兔仰卧位固定于专用手术台，以1% 碘伏再次消毒后，用无菌洞巾覆盖手术区域。切开皮肤，沿腹白线打开腹腔，暴露双侧子宫和输卵管，定位子宫角。测量并记录每侧子宫角的直径，只有子宫角直径≥3 mm以上的白兔可继续用于实验。使用10 号手术刀刀片，自子宫角处开始，在输卵管方向1 cm 和子宫体方向4 cm 的范围内，反复刮擦20 次左右，至浆膜面出现肉眼可见点状出血为止。进行子宫和输卵管刮伤的操作者对于每只动物将接受的处理均不知情，以避免由主观因素引起的损伤程度不同对实验结果的影响。然后，将刮伤的子宫和输卵管放回到原来的自然解剖部位。组织刮伤后，动物被随机进行以下分组/ 处理：（1）PBS 对照组，术后每侧损伤处喷淋无菌PBS 溶液2.5 mL，6 只；（2）自交联凝胶5 mL 组，每侧损伤处涂敷2.5 mL 自交联凝胶，6 只；（3）自交联凝胶10 mL 组，每侧损伤处涂敷2.5 mL 自交联凝胶，然后在关闭腹壁切口前，用注射器将5 mL 自交联凝胶（实验样品）从切口的尾端处注入腹腔，6 只；最后，使用4 号慕丝线连续缝合肌层和皮肤。另外，还设有假手术对照组（6 只），该组白兔只做腹部切开和缝合，不做其他处理。术后每只白兔均肌内注射头孢曲松（0.1 mg/kg），24 h 后再次注射。白兔苏醒后回笼正常饲养，每天观察记录精神状态和进食、饮水等一般情况，并检查手术切口愈合情况。该研究整个过程符合《赫尔辛基宣言》的原则。

1.3.2 大体情况观察 在术后饲养过程中，观察各组白兔存活、腹部切口愈合、有无并发症、饮食和体重等情况。在术后2 周（±1 天），通过吸入CO2处死白兔，称量并记录体重。打开腹腔，观察主要脏器的位置和外观，以及有无腹腔积液和残留实验样品等大体情况。

1.3.3 测定子宫输卵管粘连长度 暴露子宫和输卵管，确定子宫输卵管自身或与周围脏器的粘连，拍照留存。随即使用游标卡尺测量每处粘连的长度，对粘连部位和长度进行详细记录；将两侧子宫输卵管粘连长度相加，作为该只动物的术后粘连长度。在操作中，粘连长度的测量者对于所测动物的实验分组不知情。

1.3.4 比较输卵管通畅程度 粘连测量结束后，在每侧距子宫角1 cm 的子宫体处，用注射器朝向远端将0.1%美兰溶液注入子宫体腔内，观察美兰溶液进入输卵管及从其远端流出的情况；参照周晓娜等[11]的方法，对输卵管的通畅程度进行评分（评分标准见表1），确定该实验动物的输卵管通畅指数。

表1 输卵管通畅程度评分标准

1.3.5 统计学分析 采用ANOVA post hoc test 方法（Fisher’s protected least significant difference），对各组动物子宫输卵管粘连长度和输卵管通畅指数进行比较，P＜0.05 被认为有统计学差异。

2 结果

2.1 大体观察

在整个术后观察过程中，各组白兔均正常存活，腹部切口愈合正常；没有任何一只白兔出现并发症；各组白兔的饮食和体重均正常。处死白兔后，大体观察情况总结如表2。

2.2 子宫和输卵管术后粘连

开腹后，所见典型的子宫体粘连情况如图1A 所示。其中，假手术对照组无粘连；与假手术对照组相比，PBS 对照组的粘连长度[（17.93±10.89）mm]更大（P＜0.001）；5 mL 自交联凝胶组的粘连长度[（4.17±6.46）mm] 和10 mL 自交联凝胶组的粘连长度[（1.50±2.51）mm] 与PBS 对照组相比，均有显著减小（均为P＜0.01）；10 mL 自交联凝胶组的粘连长度比5 mL 自交联凝胶组稍小，但差异无统计学意义（P＞0.05）（图1B）。

2.3 术后输卵管通畅程度

通过在输卵管子宫端注射美兰溶液评估输卵管通畅情况（图2A），各组术后输卵管通畅指数的判断如图2B 所示。其中， PBS 对照组的通畅指数（0.67±0.52）最低，表明术后输卵管阻塞明显；与PBS 对照组相比，5 mL 和10 mL 自交联凝胶组的通畅指数（均为1.67±0.52）均显著增加（均为P＜0.05），表明自交联凝胶的使用能有效防止术后输卵管的阻塞。假手术对照组的通畅指数（1.83±0.41）稍高于5 mL 和10 mL自交联凝胶组，但没有显著差异（均为P＞0.05）。

图2 各组术后输卵管通畅情况

3 讨论

盆腔术后粘连的诱因是损伤使腹膜纤维蛋白溶解系统活性受到抑制，先是导致早期纤维蛋白的粘连，随后纤维母细胞进入和小血管的产生导致了含有血管的永久性粘连[1-8]。盆腔术后粘连可引起女性不孕、肠粘连/梗阻、慢性腹痛/盆腔痛等多种并发症，并增加盆腹腔再次手术的操作难度[5,7]。此外，粘连相关的疾病也给医疗卫生资源带来相当大的负担[12-13]。因此，非常有必要积极预防盆腹腔术后粘连的发生[5,7]。

透明质酸因具有良好的生物相容性以及促进创伤修复的特点，是预防手术后粘连的理想原材料，但存在着在作用部位存留时间较短的缺点，粘连预防效果不佳[10,13-15]。而交联的透明质酸凝胶可以有效降低其流动性，从而延长其存留时间，显著增强防粘连的作用[9-10,13,15-16]。医用自交联透明质酸钠凝胶是常州百瑞吉生物医药股份有限公司研发的一种新型交联透明质酸钠凝胶，在一项涉及7 个医疗单位和216 例进行妇科腹腔镜手术患者的临床研究中，该产品被证明具有良好的预防盆腔术后粘连的效果[9]。本研究通过白兔子宫角模型来探究医用自交联透明质酸钠凝胶对术后盆腔粘连的预防作用，以进一步为证明其预防盆腔术后粘连的效应提供实验室研究依据。

本研究结果首先显示白兔的受损子宫体和输卵管发生了明显的粘连，表明模型建立成功，证明了研究方法的可靠性。结果进一步显示，PBS 对照组的粘连长度最大，医用自交联透明质酸钠凝胶组的粘连长度显著减小，证实了该产品可以有效地预防/ 减轻盆腔术后粘连。同时，结果显示PBS 对照组的输卵管通畅程度最低，表明子宫角模型建立成功后输卵管出现严重堵塞；而各医用自交联透明质酸钠凝胶组的通畅指数与PBS 对照组相比均显著提高，表明该产品在预防/减轻术后盆腔粘连的同时，还具有预防术后输卵管堵塞的作用。输卵管堵塞同样是盆腔术后常见并发症，并且是导致不孕的重要原因[17]。因此，医用自交联透明质酸钠凝胶这一效应具有重要的理论意义和临床应用价值。另外，结果还显示实验结束时动物盆腹腔内无实验样品残余和腹腔积液，表明医用自交联透明质酸钠凝胶具有良好的生物相容性和安全性。

综上，本文的白兔子宫角模型研究证实常州百瑞吉生物医药股份有限公司生产的医用自交联透明质酸钠凝胶对于子宫组织及输卵管具有保护作用，可以有效预防/ 减轻子宫角模型出现的子宫、输卵管粘连以及输卵管堵塞。这为该产品的临床应用和推广提供了坚实的实验室研究数据支撑。