冉江玲 叶世芸 鉴志刚 李向东 刘宗绪

基金项目：

2019年贵州中医药大学横向课题（No.3052-052190026）。

作者简介：

冉江玲（1999—），女，土家族，硕士研究生在读，研究方向为中药及民族药质量控制及新药研发。E-mail：1968932864@qq.com

通信作者：

叶世芸（1966—），女，汉族，学士，教授，研究方向为中药及民族药质量控制和新药研发。E-mail：1043842510@qq.com

【摘  要】

目的：建立气相色谱法测定新加香薷饮有效部位挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚含量的方法。方法：色谱柱为HP-5毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；FID檢测器；检测器温度240℃；进样口温度240℃；程序升温，以40℃为起始温度，保持2 min，以5℃/min升至70℃，以0.5℃/min升至74℃，以5℃/min升至110℃，以10℃/min升至140℃；载气为高纯度氮气（＞99.99%）；柱流量为2.0mL/min；分流比为20∶1；进样量为1 μL。结果：α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚检测质量浓度的线性范围分别为0.09～0.61mg/mL、0.28～1.93mg/mL、0.18～1.29mg/mL、0.07～0.47mg/mL，（r值均大于0.999）；检测限分别为0.31μg/mL、0.32μg/mL、0.25μg/mL、0.34μg/mL，精密度、重复性、稳定性（24 h）试验的RSD/%均小于0.03％，平均加样回收率分别为96.22%、94.79%、96.96 %、99.35%，RSD均小于3%。结论：建立的含量测定方法稳定、可靠、准确可行，可作为新加香薷饮质量控制的有效方法。

【关键词】

气相色谱；香荆芥酚；新加香薷饮；α-蒎烯；β-蒎烯；麝香草酚

【中图分类号】R284.1    【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）22-0019-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.22.zgmzmjyyzz202322006

Determination of the Content of 4 Components in Volatile Oil in the Active Part of the Xinjia Xiangru Decoction

RAN Jiangling1  YE Shiyun1*  JIAN Zhigang1  LI Xiangdong2  LIU Zongxu1

1.Guizhou University Of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002，China;

2.Guizhou Dexuantang Hukang Pharmaceutical Co. Ltd， Guiyang 550008，China

Abstract：

Objective To establish a method for determining the contents of α-pinene， β-pinene， thymol and vitexin in volatile oil in the effective part of Xinjia Xiangru Decoction by gas chromatography. Methods The column was HP-5 capillary column （30 m×0.32 mm， 0.5 μm）. FID detector： Detector temperature 240℃; Inlet temperature 240℃; Programmed temperature increase， with 40℃ as the starting temperature， maintained for 2 min， 5℃/min to 70℃，0.5℃/min to 74℃， 5℃/min to 110℃， 10℃/min to 140℃; The carrier gas is high-purity nitrogen （>99.99%）; The column flow rate was 2.0mL/min; The split ratio is 20∶1 and the injection volume is 1μL. Results The linear ranges of mass concentrations of α-pinene， β-pinene， thymol and vitex were 0.09-0.61mg/mL， 0.28-1.93mg/mL， 0.18-1.29mg/mL， 0.07-0.47mg/mL， respectively， （r-values were greater than 0.999）， the detection limits were 0.31μg/mL， 0.32μg/mL， 0.25μg/mL and 0.34μg/mL， respectively， and RSD/% of precision， repeatability and stability （24 h） all were less than 0.03%， the average dosing recovery rates were 96.22%， 94.79%， 96.96%， and 99.35%， respectively， and the RSD was less than 3%.Conclusion The established method is specific， rapid and accurate， and can be used to determine the content of Xinjia Xiangru Decoction.

Keywords：

Gas Chromatography；Carnepeto；Xinjia Xiangru Decoction；α-Pinene；β-Pinene；Thymol

新加香薷饮出自中国清代吴鞠通的《温病条辨》［1］上篇，是由香薷、金银花、厚朴、连翘、扁豆花5味中药所组成的祛湿解表的经典名方，具有祛湿平肝风、化湿和中的功效，临床应用主要集中在夏季的暑湿型流感、高热、中暑等疾病［2-6］。新加香薷饮已收录于中国国家中医药管理局2018公布的《古代经典名方目录（第一批）》中。近几年，国家对经典名方十分重视，连续发布相关政策，对其质量控制方面要求更加严格。目前关于新加香薷饮的品质管理资料缺乏，且理论研究比较薄弱，建立控制新加香薷饮质量的分析方法显得尤为重要。含量测定和指纹图谱是中医药质量控制方面的常用重要技术手段［7］。课题组前期建立了新加香薷饮挥发油气相色谱指纹图谱，指认了4个色谱峰，分别为君药香薷中的麝香草酚、香荆芥酚和臣药连翘中的α-蒎烯、β-蒎烯［8］，且均具有广谱的抗菌作用［9-10］。香薷中麝香草酚、香荆芥酚为2020版我国药典中，评价香薷品质的指标性成分［11］。参照2020版《中国药典》并结合相关文献，采用气相色谱法对以上4种成分进行含量测定，为新加香薷饮的质量控制提供参考依据。

1  仪器与试药

1.1  仪器  Agilent7890气相色谱仪及Agilent HP-5毛细管色谱柱（30 m×0.32mm，0.5μm）（美国安捷伦公司）；DZTW调温电热套（北京市永光明医疗 仪器有限公司）；电子天平（精度为十万分之一，杭州友恒称重设备有限公司）。

1.2  试剂与试药  α-蒎烯（批号：GZDD0228-201217，纯度≥99.00%）、β-蒎烯（批号：C101512-201109，纯度≥99.00%）、麝香草酚（批号：C100179-191125，质量分数≥98%）、香荆芥酚（批号：C102093-201028，质量分数≥99%）、水杨酸甲酯（批号：C1000285-1，质量分数≥99%）均购自贵州迪大科技有限责任公司；乙酸乙酯（色谱纯）；水为纯水。16批新加香薷饮药材（编号S1-S16）各药材均购自其道地产区或主产区，所有药材由贵州中医药大学魏升华教授鉴定为正品。新加香薷饮5味药材信息来源见表1。

2  方法与结果

2.1  色谱条件  HP-5毛细管色谱柱（30 m×0.32mm，0.5μm）；FID检测器；检测器温度240℃；进样口温度240℃；程序升温，以40℃为起始温度，保持2 min，以5℃/min升至70℃，以0.5℃/min升至74℃，以5℃/min升至110℃，以10℃/min升至140℃；载气为高纯度氮气（＞99.99%）；柱流量为2.0 mL/min；分流比为20∶1；进样量为1 μL。

2.2  溶液的制备

2.2.1  供试品溶液的制备  通过对古代剂量换算方面研究的论文、相关中医古籍及有关度量衡研究方面的专著进行研究，明确了新加香薷饮中有关剂量单位“两”“钱”的换算。明清时期，1两约为37.3g，1钱为3.73g的折算方法。原方组成及用量记载为：“香薷（二钱）、银花（三钱）、鲜扁豆花（三钱）、厚朴（二钱）、连翘（二钱）。”则转换为现代换算为：香薷、厚朴、连翘各7.46 g，金银花及扁豆花各11.19 g。分别称量香薷、厚朴、连翘各7.46 g，金银花及扁豆花各11.19 g，加水浸泡30 min，照2020年版《中国药典》四部通则2204挥发油测定法甲法操作，于测定器上端加水使之充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯5 mL，加热回流2 h，分取乙酸乙酯液，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，精密量取续滤液1 mL，即得。

2.2.2  混合对照品溶液的制备  ①单一对照品储备液：分别精密称取α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚对照品8.75mg、91.60mg、45.94mg、6.69mg，加入乙酸乙酯分别定容至1 mL、10 mL、5 mL、1 mL容量瓶中，得到各成分浓度为8.75mg/mL、9.16mg/mL、9.19mg/mL、6.69mg/mL的单一对照品储备液。②内标物溶液：精密称取水杨酸甲酯对照品59.00mg，加入乙酸乙酯定容至5 mL容量瓶中，得到浓度为11.80mg/mL的内标物溶液。③混合对照品溶液：分别精密量取上述4种溶液各1 mL、3 mL、2 mL、1 mL，加乙酸乙酯定容至10 mL容量瓶中，得到各质量分数为0.88mg/mL、2.75mg/mL、1.84mg/mL、0.67mg/mL的混合对照品溶液。

2.3  方法学考察

2.3.1  线性关系、检测限及定量限考察  分别精密量取“2.2.2”项下混合对照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL，加入0.2 mL内标溶液，加乙酸乙酯定容至2 mL容量瓶中，按“2.1”项下色谱条件进样，以待测组分与内标物浓度比为横坐标（X），以待测组分与内标物峰面积比为纵坐标（Y），绘制标准曲线。

分别取“2.2.2”项下加入内标物的混合对照品储备液适量，加乙酸乙酯稀释，按“2.1”项下色谱条件进样，并记录峰面积。当信噪比（S/N）为3时得检测限，当信噪比（S/N）为10时得定量限。结果见表2。各成分在对应浓度范围内线性关系良好。气相色谱图如图1所示。

2.3.2  精密度  按“2.2.1”項下条件制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得各样品峰的保留时间RSD≤0.03%，峰面积RSD≤0.54%，表明机器精密度良好。

2.3.3  稳定性  按“2.2.1”项下条件制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件下分别在0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h时进样，测得各样品峰的保留时间RSD≤0.03%，峰面积RSD≤0.85%，表明供试品在24 h内稳定。

2.3.4  重复性  取同一批次（S16）新加香薷饮，按“2.2.1”项下条件制备供试品溶液，平行6次，照“2.1”项下色谱条件下进样，测得各样品含量的RSD≤2.64%，平均含量为1.98%，表明该方法重复性良好。

2.3.5  加样回收率实验  精密量取已知含量的新加香薷饮挥发油6份，每份0.2 mL，根据已知的各指标性成分含量分别加入各对照品适量，加入0.2 mL内标物溶液后，按“2.2.1”项下条件制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录各峰面积值，计算样品中各成分含量及加样回收率，结果见表3。结果表明，α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚的平均加样回收率分别为96.22%、94.79%、96.96 %、99.35%，RSD均小于3%，说明该方法测得结果准确性良好，测定结果可靠。回收率（%）=（测得量－原有量）/加入对照品含量×100%。

2.4  样品含量测定  照表1组合，按“2.2.1”项下方法制备16批次新加香薷饮供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样并测定4种挥发性成分的质量分数。结果见表4。

由表4可知，4种成分的质量分数范围为：α-蒎烯0.11～0.28 mg/g，平均含量为（0.18±0.056）mg/g；β-蒎烯0.48～1.31 mg/g，平均含量为（0.89±0.309）mg/g；麝香草酚0.54～0.94 mg/g，平均含量为（0.76±0.154）mg/g；香荆芥酚0.04～0.38 mg/g，平均含量为（0.18±0.135）mg/g。

3  讨论

3.1  新加香薷饮有效部位中挥发油的主要成分  新加香薷饮组方中多种药材含有挥发性成分，其中连翘挥发油的主要成分α-蒎烯、β-蒎烯［12-14］，香薷挥发油主要的活性成分麝香草酚、香荆芥酚均具有广谱的抗菌作用［15-16］。麝香草酚和香荆芥酚可作为香薷挥发油质量控制的指标性成分，二者的含量对香薷挥发油的抑菌活性具有重要影响［17］。

3.2  新加香薷饮的质量控制的研究  本研究所测定的4种成分α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚分别为新加香薷饮中连翘和香薷的主要成分，目前对新加香薷饮的报道主要集中在临床治疗阴暑、暑湿型感冒等疾病［18-19］，药理研究更多的是在对其成分提取的研究，对于如何建立正确的新加香薷饮的质量标准，保证药材品质这一问题，还需要进一步更深入地研究。目前在质量控制方面仅鉴志刚等［8］建立了新加香薷饮挥发油气相色谱指纹图谱研究和谢佳佳等［20］构建的新加香薷饮的高效液相色谱指纹图谱，可见对新加香薷饮质量控制方面的相关研究较少，因此本研究采用气相色谱法测定新加香薷饮挥发油中4种成分的含量测定方法，可以作为新加香薷饮的质量控制基础，也可为新加香薷饮在临床上的研究提供一定的参考价值。

3.3  含量测定结果分析  根据“2.4”项下16批新加香薷饮有效部位挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚的含量测定数据，可以发现S3、S11、S14分别来自山西长治和河南卢氏产区的连翘中的β-蒎烯成分含量较来自其他产地的低，且波动范围较大，说明药材的质量均一性不好，对临床用药的有效性有一定影响。本研究所建立的α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚的含量测定方法简单快捷、安全有效，有望在筛选优质药材、确保临床安全有效用药方面发挥重要作用。

综上所述，采用内标法测定新加香薷饮挥发油中α-蒎烯、β-蒎烯、麝香草酚、香荆芥酚4种成分的含量，并对含量测定方法进行方法学考察，测定的各成分在相应浓度范围内，线性关系好，精密度、重复性、稳定性均良好，且回收率较好，说明建立的含量测定方法稳定、准确可行，可为新加香薷饮质量控制提供参考，在未来中药经典名方挥发油质量评价中也有望得到更广泛的应用。

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（收稿日期：2023-03-01  编辑：陶希睿）