张振远，滕环瑜，潘 影，王召军，张洪映，闫筱筱，崔 红

河南农业大学烟草学院，郑州市郑东新区平安大道218号 450046

植物叶表微生物包括细菌、真菌、线虫和病毒等［1-2］，其种类和密度受外界环境，如温度、湿度和紫外线辐射强度的影响［3-4］，同时也与植物叶片自身的形态结构、化学成分和防御机制密切相关［5-6］。烟草叶面微生物在烟株生长发育［7］、逆境应答［8］、病虫害防御［9］以及烟叶品质形成［10-11］等方面发挥着重要作用。因而，对烟草叶面微生物群落结构的深入研究具有重要意义。烟草叶片腺毛浓密、分泌物丰富，建立和优化烟草叶面微生物收集体系是进行微生物群落结构研究的基础。植物叶面微生物收集效果与洗脱液的种类和浓度有关，洗脱液的选择因植物种类不同而异。常用的洗脱剂为无菌水或磷酸缓冲液，但由于叶面腺毛及其分泌物的存在增加了叶片的疏水性和黏性［12-13］，部分微生物与叶面组织整合形成生物膜［14］，导致对烟草叶面微生物的洗脱难度增加。吐温-80（Tween-80）作为非离子表面活性剂，具有增溶、湿润、乳化、减少细菌附着、抑制生物膜形成以及与真菌孢子具有相容性等特点［15-17］。Lukasik等［18］比较了PBS、甘氨酸、吐温-80 溶液及含有吐温-80 的PBS 缓冲液对草莓和番茄种子表面微生物的洗脱效果，发现0.1%吐温-80 的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗脱的微生物数量最多。与其他植物相比，烟草表面腺毛丰富，分泌旺盛，物质含量丰富，分泌物主要化学成分为类西柏烷类二萜化合物、赖百当二萜和蔗糖酯等成分［19］，占鲜烟叶的0.5%～10%［20］。……